肝功能检查指标的选择与评价

肝功能检查指标的选择与评价,一、实验目的,掌握：血清转氨酶、胆红素测定的方法和原理；熟悉：重氮试剂法测定血清胆红素的操作步骤；了解：血清转氨酶、胆红素测定的临床意义。,ALT、AST测定,测定方法：连续监测法、赖氏法连续监测法测定丙氨酸氨基转移酶基本原理： L-丙氨酸+-酮戊二酸 -丙酮酸+L-谷氨酸 -丙酮酸+NADH 乳酸+NAD+连续监测法测定天门冬氨酸氨基转移酶基本原理： L-天门冬氨酸+-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH+H+ L-苹果酸+NAD+ 连续监测法测定NADH被氧化为NAD+,可在340nm处连续监测到NADH被氧化引起吸光度下降速率，该下降速率与ALT、AST活性呈正比。,二实验原理,ALT,LDH,AST,MDH,三、试剂与器材,丙氨酸氨基转移酶试剂盒：R1: -酮戊二酸、NADH、乳酸脱氢酶（LDH）R2：L-丙氨酸 、Tris缓冲液天冬氨酸氨基转移酶试剂盒：R1: -酮戊二酸、NADH、苹果酸脱氢酶（MDH）、 乳酸脱氢酶（LDH）R2：L-天门冬氨酸 、Tris缓冲液,四、操作步骤,1.试剂准备：取 10ml的R2，溶解一瓶R1，充分溶解后即为工作液。2.仪器准备：水浴锅调温 37 。紫外分光光度计，预热，波长340nm。2.按表操作： 3. 混匀，37水浴1min，于空白管校零，精确读取1、2、3min吸光度，计算样本每分钟吸光度变化率A/min。注：为减小误差，可先把工作液37水浴5min，混匀直接上机检测。,五、结果计算,ALT或AST（U/L）=A/min =A/min ,1000 ,VtVs,10006.22,VtVs,A/min为两次测定的平均值Vt=反应总体积 Vs=血清体积 =6.22为NADH在340nm波长，比色皿光径1cm时的摩尔吸光系数。,六、参考范围,ALT（37）：男性40U/L 女性31U/L AST（37）：男性37U/L 女性31U/L,七、临床意义1.肝细胞损伤的灵敏指标2.肝癌、肝硬化3.某些化学药物引起的肝脏损害4.其他疾病或因素（肌炎、胸膜炎、肾炎、肺炎）,八、注意事项,1.血清不易反复冻融，避免影响酶活性；2.避免标本溶血；3.试剂变浑浊或者空白吸光度小于0.900，试剂不能使用。,TBIL、DBIL测定,结合胆红素 未结合胆红素+加速剂（破坏氢键）,二、实验原理,+重氮试剂,偶氮胆红素 呈紫红色，测A546nm,重氮盐法：（亚硝酸钠、对氨基苯磺酸） 对氨基苯磺酸+HCL+NaNO2氯化重氮苯磺酸+NaCL,三、试剂与器材,TBIL试剂R1主要成分：对氨基苯磺酸 盐酸 十二烷基三甲基氯化铵DBIL试剂R1主要成分：EDTA 对氨基苯磺酸 盐酸TBIL、DBIL试剂R2主要成分：亚硝酸钠TBIL、DBIL校准品（2.0mL蒸馏水复溶后使用）,四操作步骤,TBIL测定：1.TBIL工作液配制：取R1和R2按5:1的比例混合待用；2.TBIL校准液配制：取2ml蒸馏水复溶待用；3.按表操作：4.混匀，37保温10min，于546nm测定“A”。DBIL测定：1.DBIL工作液配制：取R1和R2按40:1的比例混合待用；2.DBIL校准液配制：取2ml蒸馏水复溶待用；3.按表操作：4.混匀，37保温2min，于546nm测定“A”。,五、结果计算,C样品=A样品/A校准* C校准,六、参考范围,TBIL：3.4-17.1umol/LDBIL：0-3.4umol/L,七、注意事项,1.血液标本和标准液应避免阳光直照2.溶血、脂血对测定有干扰；3.试剂具有一定的强酸性，注意个人防护。,八、临床意义,1.血清总胆红素测定的意义： （1）黄疸及黄疸程度的鉴别 （2）肝细胞损伤程度和预后的判断 （3）新生儿溶血症 （4）再生障碍性贫血及数种继发性贫血血清总胆红 素减少