现代病理学技术概况

现代病理学技术概况,主讲人：周晓龙讲课时间：2016年1月6号,病理学的定义,Pathology 是病痛（ pathos）的研究(logos) 联系基础医学与临床医学的桥梁 研究疾病状态下细胞、组织和器官结构和功能的改变通过各种手段解释疾病，为临床诊断，治疗和疾病的预防提供依据,病理学技术,病理学包括病理学理论和病理学技术。病理学技术是“病理学之母”。病理学的理论和技术被视为一辆车的两个轮子，缺一不可，互为依存，互相促进，两者的结合决定着病理学的发展。 病理学技术包括尸体解剖、大体标本的制作、制片（石腊切片、冰冻切片、半薄切片、超薄切片等）、组织化学方法，免疫组化技术、原位杂交、分子病理技术、电镜技术、图像分析等。 病理技术的发展促进了病理学理论的进步。,病理学的发展,器官病理学时代：Giovanni Battista Morgagni （1682 ,1 1771,11） 意大利解剖学家现代解剖病理学之父编写疾病的位置与原因，包含646例解剖记录 奠定了病理学发展的基础遗憾：没有将病理与临床联系,病理学的发展,组织病理学时代Rudolf Virchow （1821,10-1902,12) 德国医生现代病理学之父编著细胞病理学开创了细胞病理学时代,病理学的发展,现代病理学时代(近400年历史）电子显微镜：细胞超微结构的观察免疫病理学：免疫组化技术的应用分子病理学：疾病遗传和基因的研究数字病理学：,病理学技术,传统病理学技术 HE染色技术 组织化学染色 细胞病理学技术,现代病理学技术 超微病理 免疫病理 分子病理 数字化病理,传统病理学技术,病理学技术的基础和根本，是临床和科研最常用的技术全手工操作发展为自动化的机器：脱水机，包埋机，封片机，染色机，包埋盒和切片打号机，液基细胞制片技术材料的优化：塑料包埋盒，一次性切片刀试剂的该进：试剂的商业化，非污染环保试剂低温恒冷切片机替代二氧化碳制冷机等,现代病理学技术,免疫组织化学技术：发展快，应用广，已成为临床诊断，靶向药物的筛选以及科研的重要手段；尽管存在问题。电镜技术：包括透射电镜，扫描电镜，免疫电镜等，用于肿瘤的分型，肾脏病的诊断，肌肉疾病的诊断等；科研。分子病理技术：近20年来发展最快，分子生物学技术与病理形态结合，用于疾病诊断和分类，靶向药物的筛选，病原体的检测，遗传学研究等。数字化病理：病理切片扫描技术，远程会诊，图像分析系统，档案的数字化管理。 病理技术的进步促使人类的认识从大体、细胞、超微结构、分子基因水平逐步深入。,免疫组化(pubmed检索）,应用免疫学（抗原抗体反应）和组织化学（化学反应）的原理，对组织切片或细胞标本中的某些成份进行原位定性、定位甚至定量研究的技术。,现代病理学技术,免疫组织化学技术的应用：临床诊断和鉴别诊断肿瘤的分型肿瘤起源的判断靶向药物的筛选肿瘤生物学行为的判断病原体的检测?,分子病理(pubmed检索）,现代病理学技术,分子病理学技术：FISHPCR原位杂交基因测序分子病理学技术的应用诊断与鉴别诊断肿瘤预后判断药物的筛选.,分子病理在临床中的应用,肺非小细胞癌EGFR突变的检测：EGFR突变阳性者应用络氨酸激酶药物（易瑞沙）有效，否则效果不佳血尿的诊断：检测9号，3号，17号，7号染色体可以辅助膀胱癌的诊断和预测术后复发的可能C-kit突变的检测：C-kit突变可用于选择是否使用药物”格列卫“大肠癌k-ras基因检测：ras基因突变对西妥昔单抗治疗无效，患者预后差。淋巴瘤的分型：应用FISH检测可辅助淋巴瘤的分型，为临床治疗提供依据。.,电子显微镜技术,电子显微镜，包括透射电镜和扫描电镜电镜技术包括负染色技术、冷冻蚀刻技术、电镜细胞化学技术、电镜X射线显微分析技术、电镜放射自显影技术等主要用于肾小球肾炎的分型确定肿瘤细胞的组织发生、类型和分化程度扫描电镜能够直接观察样品的表面的结构，血管腔面改变,共聚焦激光扫描显微镜 （confocal laser scanning microscopy）,利用计算机及图像处理系统对组织，细胞及亚细胞结构进行断层扫描，再现三维立体空间结构，将形态学研究从平面图像水平提高到三维立体水平；在观察培养细胞形态结构的同时，直接显示培养活体细胞内的代谢变化。,共聚焦激光扫描显微镜,观察活细胞、活组织：在不损伤细胞的前提下,对活组织、活细胞进行观察和测量，省去了繁琐的样品前期处理过程，而且观察过的样品还可以继续用于其他的研究。这种功能对于细胞培养、转基因研究尤为重要。这可以说是最大的优势。生化成分精确定位观察：配合专用的分子探针,对于要检测的成分不仅可以定位到细胞水平,还可以定位到亚细胞水平和分子水平,共聚焦激光扫描显微镜,动态观察：在同一样品平面上随时间进行连续扫描,就可分析细胞结构、内含、和标记等动力学变化。如观察心肌或平滑肌细胞内游离钙、钠、钾离子浓度或的动态变化。数据、图像的数字化：计算机代替了普通的照相机,得到的图像是数字化的,可及时输出或长期储存,而且还可进一步加工处理。定量测量：应用专一的荧光探针对样品进行染色,样品的荧光强度和所测成分的含量呈正比, 通过对比各组样品之间的荧光强度值,可得出特定成分的含量比。,生物芯片技术,基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。可对DNA、RNA、多肽、蛋白质、细胞、组织以及其它生物成分进行高效快捷的测试和分析。,组织芯片,组织芯片又称组织微列阵（tissue microarray） 是将数十个 数百个乃至上千个小的组织片整齐的排列在一起到载玻片,形成微缩的组织切片。,激光显微切割术 （Laser micro-desection）,在显微镜下用手工或仪器采样的方法从组织切片或细胞涂片上将所要研究的形态或表型相同的细胞从组织三维构造中分离出来，获得纯的细胞群（pure cell po