淀粉的国标测定方法

淀粉的国标测定方法淀粉的国标测定方法 测定食物中淀粉的方法有酶水解法 酸水解法 可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法 酶 直接 法 一 酶水解法 1 原理 样品经除去脂肪及可溶性糖类后 其中淀粉用淀粉酶水解成双糖 再用盐酸将双糖水解成单糖 最后按还原糖测定 并折算成淀粉 2 适用范围 GB5009 9 85 适用于所有含淀粉的食物 3 仪器 1 回流冷凝器 2 水浴锅 4 试剂 除特殊说明外 实验用水为蒸馏水 试剂为分析纯 1 乙醚 2 0 5 淀粉酶溶液 称取淀粉酶 Sigma 公司 E C3 2 1 1 0 5 g 加 100ml 水溶解 加入数滴甲苯或三氯甲烷 防止长霉 贮于冰箱中 注 配成溶液的淀粉酶破坏很快 最好 邻用现配 3 碘溶液 称取 3 6 g 碘化钾溶于 20 ml 水中 加入 1 3 g 碘 溶解后加水稀释至 100 ml 4 85 乙醇 5 其余试剂同 蔗糖测定方法 5 操作方法 5 1 样品处理 称取 2 5 g 样品 置于放有折叠滤纸的漏斗内 先用 50 ml 乙醚分 5 次洗除脂肪 注 如果 脂肪含量少 此步骤可免 再用约 100 ml85 乙醇洗去可溶性糖类 注 此步骤目的是去除 可溶性糖 将残留物移入 250 ml 烧杯内 并用 50ml 水洗滤纸及漏斗 洗液并入烧杯内 将 烧杯置沸水浴上加热 15 min 使淀粉糊化 放冷至 60 以下 加 20ml 淀粉酶溶液 再 55 60 保温 1h 并时时搅拌 注 温度过高 淀粉酶的活性破坏 然后取 1 滴此液加 1 滴碘溶液 应不现兰色 若显兰色 再加热糊化并加 20ml 淀粉酶溶液 继续保温 直至加碘 不显兰色为止 加热至沸 冷后移入 250ml 容量瓶中 并加水至刻度 混匀 过滤 注 此 时淀粉已水解成双糖 过滤可去除残渣和纤维素 弃去初滤液 取 50 ml 滤液 置于 250ml 锥 形瓶中 加 5 ml 6 mol L 盐酸 装上回流冷凝器 在沸水浴中回流 1h 冷后加 2 滴甲基红指 示剂 用 5mol L 氢氧化钠溶液中和至中性 溶液转入 100 ml 容量瓶中 洗涤锥形瓶 洗液并 入 100ml 容量瓶中 加水至刻度 混匀备用 淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步 反应 然后在淀粉酶的作用下 分解成短链淀粉 糊精 麦芽糖等低聚合的糖 所以在淀粉酶 解后需用酸进一步水解得到葡萄糖 5 2 测定 按 还原糖的测定方法 操作 同时量取 50 ml 水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液 按同 一方法做试剂空白试验 6 计算 X1 A1 A2 0 9 100 1 V1 V3 m1 V2 100 1000 式中 X1 样品中淀粉的含量 A1 测定用样品中还原糖的含量 Mg A2 试剂空白中还原糖的含量 mg 0 9 还原糖 以葡萄糖计 换算成淀粉的换算系数 m1 称取样品质量 g V1 水解用样品溶液体积 ml V2 样品定容总体积 ml V3 测定用样品处理液的体积 ml 二 酸水解法 1 原理 样品经除去脂肪及可溶性糖类后 其中淀粉用酸水解成具有还原性的单 糖 然后按还原糖测定 折算成淀粉 2 适用范围 本法适用于含淀粉的食物 3 仪器 1 水浴锅 2 高速组织捣碎机 1200 rpm 3 皂化装置并附 250 ml 锥形瓶 4 试剂 除特殊说明外 实验用水为蒸馏水 试剂为分析纯 1 乙醚 2 85 乙醇溶液 3 6mol L 盐酸溶液 4 10mol L 氢氧化钠溶液 5 2 5mol L 氢氧化钠溶液 6 甲基红指示液 0 2 乙醇溶液 7 精密 pH 试纸 8 20 乙酸铅溶液 9 10 硫酸钠溶液 10 其余试剂同还原糖的测定 5 操作方法 5 1 样品处理 5 1 1 粮食 豆类 糕点 饼干等较干燥的样品 称取 2 0 5 0 g 磨 碎过 40 目筛的样品 置于放有慢速滤纸的漏斗中 用 30ml 乙醚分三次 洗去样品中脂肪 弃去乙醚 再用 150 ml 85 乙醇溶液分数次洗涤残 渣 除去可溶性糖类物质 并滤干乙醇溶液 以 100ml 水洗涤漏斗中残 渣并转移至 250ml 锥形瓶中 加入 30 ml 6 mol L 盐酸 接好冷凝管 置沸水浴中回流 2h 回流完毕后 立即置流水中冷却 待样品水解冷 却后 加入 2 滴甲基红指示剂 先以 40 氢氧化钠溶液调至黄色 再 以 6mol L 盐酸校正至水解液刚变红色为宜 若水解液颜色较深 可用 精密 pH 试纸测试 使样品水解液的 pH 约为 7 然后加 20 ml 20 乙酸 铅溶液 摇匀 放置 10 min 再加 20 ml 10 硫酸钠溶液 以除去过 量的铅 摇匀后将全部溶液及残渣转入 500ml 容量瓶中 用水洗涤锥形 瓶 洗液合并于容量瓶中 加水稀释至刻度 过滤 弃去初滤液 20 ml 滤液供测定用 5 1 2 蔬菜 水果 各种粮豆含水熟食制品 按 1 1 加水在组织捣碎 机种捣成匀浆 蔬菜 水果需先洗净 凉干 取可食部分 称取 5 10g 匀浆 液体样品可直接量取 于 250 ml 锥形瓶中 加 30 ml 乙醚振摇提取 除去样品中脂肪 用滤液过滤去除乙醚 再用 30ml 乙醚淋洗两次 弃去乙醚 以下按 5 1 1 自 再用 150 ml 85 乙醇溶液 起依法操作 5 2 测定 按还原糖的测定步骤操作 6 计算 A3 A4 0 9 50 V V2 2 X2 m2 250 100 1000 100 1 式中 X2 样品中淀粉的含量 A3 测定用样品中还原糖的含量 mg A4 试剂空白中还原糖的含量 mg m2 称取样品质量 g V2 测定用样品处理液的体积 ml 500 样品液总体积 ml 0 9 还原糖 以葡萄糖计 换算成淀粉的换算系数 注 酸水解能分解部分半纤维素 形成具有还原力的单糖 如木糖 阿拉伯糖等 可影响分 析结果 为了比较正确地测定食物中淀粉含量 建议采用淀粉酶糖化淀粉 除去不可溶性的残 渣后 再用酸水解使之成为葡萄糖 然后测定其含量 最后换算成淀粉 三 可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法 酶 直接法 1 原理 样品先在 37 下经 淀粉酶水解 使可消化淀粉转化成葡萄糖 用 80 乙醇提取 未水解的 抗性淀粉部分经沸水浴凝胶化后 在淀粉葡萄糖苷酶转化成葡萄糖 用葡萄糖氧化酶法分别测 定葡萄糖含量 再换算成可消化淀粉和抗性淀粉含量 2 适用范围 参考 Englyst 和 Champ 的方法 适用于所有含淀粉食物的测定 3 仪器 1 恒温水浴箱 2 温箱 3 分光光度计 4 试剂 除特殊说明外 实验用水为蒸馏水 试剂为分析纯 1 0 1mol L 乙酸缓冲液 pH 5 0 称取 14 28 g 乙酸钠 CH3COONa 3H2O 溶于水 中 加入 2 7ml 冰乙酸 并调节 pH 5 0 用水定容至 1 L 2 酶溶液 分别称取 4g 淀粉酶溶液 amylase Sigma 公司 1g 淀粉葡萄糖苷酶 溶液 amyloglucosidase Sigma 公司 和 0 3g 转换酶 invertase Sigma 公司 溶液于研 钵中 用 0 1mol L 乙酸缓冲液研磨制成匀浆 并调节体积为 100ml 3000rpm 离心 5min 取 上清液 3 淀粉葡萄糖苷酶溶液 称取 2 g 淀粉葡萄糖苷酶 amyloglucosidase Sigma 公司 加 100 ml0 1 mol L 乙酸缓冲液研磨成匀浆 3000 rpm 离心 5 min 取上清液 4 80 乙醇 800ml 乙醇加水至 1L 5 4mol L 氢氧化钾溶液 称取 224g 氢氧化钾 用水溶解并加至 1L 6 2 mol L 乙酸溶液 量取冰乙酸 118ml 加水至 1L 混匀 7 其它试剂同 葡萄糖测定方法 5 操作步骤 5 1 样品处理 测定 RS1 时 直接称取样品 0 2g 1g 测定 RS2 时 选用生的样品 先研磨打 碎后再称取样品 0 2g 1g 测定 RS3 时 则先将样品加水煮沸至少 15min 使之凝胶化 然 后取出放入 4 冰箱冷藏过夜 再混匀后称取样品 0 2g 1g 需折合水分 加入 10 ml 酶 溶液 轻轻混匀 37 温箱或水浴中酶解 16 h 加入 40 ml 无水乙醇 使乙醇含量终浓度为 80 充分摇匀 静置 30min 3000 rpm 离心 15min 上清液转移至 100ml 容量瓶中 用 80 乙醇反复洗涤沉淀 2 3 次 合并上清液并用乙酸缓冲液定容 供测定可消化淀粉用 5 2 水解抗性淀粉 将经反复洗涤的沉淀置于 100 干燥 然后用 15ml 水将沉淀转移至锥形瓶 中 沸水浴中加热 30min 冷却至室温 加入 1 倍体积的 4 mol L 氢氧化钾溶液 使氢氧化钾 终浓度为 2mol L 室温下混合 30min 注 在样品凝胶化后 2mol L 氢氧化钾的作用是进一 步破坏淀粉结构 如果氢氧化钾的浓度过高或过低 不利于结构破坏 操作中需注意 加入 约 30ml2 mol L 乙酸溶液 调节 pH 为 5 0 再加入淀粉葡萄糖苷酶溶液 5 ml 65 70 水 浴 90min 冷却后将水解液转移至 100ml 容量瓶中 用乙酸缓冲液定容至刻度 过滤 5 3 测定 吸取 0 5ml 上清液 5 1 和抗性淀粉水解液 5 2 按照葡萄糖氧化酶法分别测 定葡萄糖含量 从测定步骤开始 同时做葡萄糖标准曲线 6 计算 根据葡萄糖标准曲线得出上清液中和抗性淀粉水解液中葡萄糖浓度 再根据稀释定容体积和称 样量分别计算出可消化淀粉和抗性淀粉含量 As Ab V F X 0 5 m 0 1 0 9 式中 X 样品中可消化淀粉 抗性淀粉含量 g 100g As 由标准回归方程求出的样品测定管中葡萄糖含量 mg Ab 由标准回归方程求出的样品空白管中葡萄糖含量 mg V 样品定容体积 ml F 稀释倍数 0 5 测定时吸取样品提取液的体积 ml m 样品质量 g 0 1 将 mg g 转换成 g 100g 的系数 7 注意事项 7 1 Eglyst 根据抗性淀粉的分类 对样品处理采用不同的处理方法 读者可根据实验需要选择 相应的方法 7 2Eglyst 测定抗性淀粉时 模拟胃肠道内环境 根据 淀粉酶水解时间长短 将 20min 时 已水解的淀粉称为快消化淀粉 20min 120min 水解的淀粉称为慢消化淀粉 120min 后仍没有 水解的淀粉称为抗性淀粉 有的学者指出在体内实验中