狂犬病及疫苗药典

,狂犬病及疫苗,制作者：,什么是狂犬病？,狂犬病是被狂犬病病毒感染的一种急性传染病。中枢神经系统是狂犬病病毒复制的主要部位。人类感染狂犬病几乎全部继发于动物咬伤或抓挠。世界大部分人类狂犬病的主要宿主是犬，绝大部分人类狂犬病的发生均源于犬咬伤。同时，尽管猫不作为狂犬病病毒的宿主，但也是重要的病毒携带者。人类狂犬病可以表现为狂躁型或麻痹型。如果是狂躁型狂犬病，患者则在5天内死亡，而麻痹型狂犬病，患者则在13天内死亡。临床表现为特有的恐水、怕风、恐惧不安、咽肌痉挛、进行性瘫痪等。病死率100%。,狂犬病病毒是什么样的？,狂犬病病毒属于弹状病毒科狂犬病病毒属，由一些遗传学相关的包膜病毒组成，含有单股非节段性负链RNA。病毒的形状像一粒子弹，长度为200nm，宽度为75nm。,病毒含有以下五种结构蛋白质：病毒颗粒转录酶（L）、糖蛋白（G）、核蛋白（N）、磷蛋白（P）和基质蛋白（M）。狂犬病病毒G蛋白是一种三聚体，是诱导生成病毒中和抗体（virus-neutralizing antibodies ，VNAs）的主要抗原，并且可以诱导机体产生对狂犬病病毒致命感染的免疫性。,狂犬病疫苗最重要的免疫应答就是病毒包膜G蛋白相关抗体的产生。,不幸被疯狗咬了如何打疫苗？,“5针法”：美国和WHO推荐的暴露后免疫程序是在第0天应用狂犬病免疫球蛋白（rabies immunoglobulin，RIG），然后分别在第0天、第3天、第7天、第14天和第28天应用CCV；只在三角肌的位置肌内注射1ml疫苗。“2-1-1”：广泛用于法国，该方案包括在第0天两次肌内注射1ml，然后在第7天和第21天分别各注射一次。使用2-1-1程序可能最好限定于没有咬伤的暴露，以及患者依从性非常差的情况。“2-2-2-0-2”：前的泰国红十字会免疫方案包括分别在第0天、第3天、第7天和第28天皮内注射两剂0.1ml。“8-0-4-0-1-1”：用于一些发展中国家， 多部位皮内注射0.1ml，0（8剂）、7（4剂）、28、90由于肌内注射费用昂贵，为缩减成本可以进行皮内注射。 除了打疫苗，需要联合使用RIG（HRIG或ERIG）,怎样进行暴露前免疫？,所有可能接触狂犬病病毒的高风险职业，如兽医、猎人、设陷阱捕兽者、抓犬员、邮件投递者、业余洞窟探勘者和实验室工作人员均应预防性接种狂犬病疫苗。标准美国三剂注射方案：肌内注射，0、7、21或28。接受3剂暴露前免疫方案之后，在实验室中持续暴露于高浓度狂犬病病毒的人员应每6个月检测一次VNA水平，如果滴度不足，则应肌内或皮内注射一支疫苗以加强。兽医和其他经常暴露于狂犬病动物或狂犬病病毒的人员同样应每2年检测一次。,细胞培养狂犬病疫苗（cell culture rabies vaccines ，CCV）,人二倍体细胞疫苗（可以避免对动物蛋白的过敏）MRC-5人胚成纤维细胞Vero 细胞疫苗Vero的传代非洲绿猴肾细胞纯化的鸡胚细胞培养疫苗原代鸡胚成纤维细胞原代地鼠肾细胞培养疫苗乳鼠肾细胞系（BHK-21）纯化鸭胚细胞培养疫苗鸭胚恒河猴二倍体细胞培养疫苗恒河猴胚肺成纤维细胞,什么是疫苗？,疫苗是以病原微生物或其组成成分、代谢产物为起始材料，采用生物技术制备而成，用于预防、治疗人类相应疾病的生物制品。类型：灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、 基因工程重组蛋白疫苗、其他类疫苗灭活疫苗:是指病原微生物经培养、繁殖，用理化方法灭活后制成的疫苗。Eg:狂犬病疫苗,如何制造狂犬病疫苗？,狂犬病病毒毒株接种人二倍体细胞,培养后,收获病毒液,浓缩后，灭活病毒，而后纯化制成。前期工作：建立种子批系统,原始种子/细胞种子,传代扩增至特定代次,主种子批/主细胞库,工作种子批/工作细胞库,传代扩增至特定代次,保管菌毒种要有严格的登记制度，建立详细的总账和分类账。,种子批的检定项目至少应包括鉴别（血清学、全病毒或部分特征性序列测序）、外源因子、病毒表型、遗传稳定性等。,目的：保证疫苗生产的一致性。,病毒性疫苗生产用细胞基质,选择疫苗生产用细胞基质应基于风险效益的综合评估，包括细胞的种属及组织来源、细胞对病毒的敏感性、扩增病毒的稳定性、细胞的特性及全面检定的可行性、细胞对制品的安全性、生产工艺的便利性以及下游纯化工艺能够去除风险因素的可能性和达到的安全水平等。疫苗生产用细胞基质通常包括原代细胞、二倍体细胞和连续传代细胞。人二倍体细胞（MRC-5）细胞检定：细胞鉴别外源因子內源因子成瘤性致瘤性,生产用培养液,病毒疫苗生产用细胞培养液：材料应该成分明确，并验证生产用细胞的适应性。疫苗生产用培养基中不得使用人血清。使用生物源性材料，应检测外源性因子污染，包括细菌和真菌、支原体、分枝杆菌以及病毒。对生产过程中添加的具有潜在毒性的外源物质，应对后续工艺去除效果进行验证，残留物检测及限度应符合相关规定。常见添加剂：牛血清、人血白蛋白、抗生素、其他生物材料（转铁蛋白、胰岛素、生长因子等）生产过程中尽可能减少添加剂的使用，如果加入，要验证其残留量是否符合规定。,生产,一、病毒培养物的制备传代细胞培养 ：将工作细胞库细胞按规定传代，同一种疫苗生产用的细胞扩增应按相同的消化程序、分种扩增比率、培养时间进行传代。二、病毒增殖和收获接种病毒时应明确病毒感染滴度与细胞的最适比例，同一工作种子批按同一MOI的量接种，以保证每批收获液病毒产量的一致性。同一细胞批接种同一工作种子批病毒后培养，在不同时间的多个单次病毒收获液经检验后可合并为一批病毒原液。多次收获的病毒培养液，如出现单瓶细胞污染，则与该瓶有关的任何一次病毒收获液均不得用于生产。,生产,三、病毒灭活试剂： -丙内酯。灭活程序一经结束应立即取样进行灭活验证试验，否则应将样品置70及以下暂存并尽快进行灭活验证试验。对同一批病毒原液分装于多个容器的，应按容器分别取样进行验证，不得采用合并样品进行验证。四、抗原纯化Vero细胞的狂犬病疫苗：在灭活后采用柱色谱法进行纯化。应对纯化工艺过程进行验证，并设立抗原纯度、免疫活性、残留物限度等质量控制标准，具体要求一经确立不得随意改变。,生产,五、中间产物中间产物是从起始材料开始，通过一个或多个不同工艺如发酵、培养、分离以及纯化，添加必要的稳定剂等各工艺过程所获得的产物。 检测 应对中间产物制备成半成品前进行关键项目的质控监测，如病毒滴度、活菌数、抗原活性、蛋白质含量以及比活性指标的检测，并需考虑对后续工艺阶段无法检测的项目，如纯度、残留物等进行检测。中间产物贮存：温度通常为28,原液,半成品,成品,按照批准的配方将稀释液（磷酸盐缓冲生理氯化钠溶液）、稳定剂（人血白蛋白）、赋形剂（麦芽糖）等配制成均一混合的半成品。,通过分装设备分装至最终容器后，贴签和包装后为成品,半成品、成品,半成品、成品,半成品检测：依据生产工艺和疫苗特性设定检测项目，如无菌检查、细菌内毒素检查、残留有机溶剂（ -丙内酯）等项目检测。疫苗成品检测项目：一般包括鉴别、理化测定、纯度、效力、异常毒性检查、无菌检查、细菌内毒素检查、佐剂及工艺杂质残留物检测等。,稳定性评价,稳定性研究结果目的：确定疫苗的保存条件及有效期，并证明在有效期内疫苗的有效性和安全性等指标符合规定要求。对大多数疫苗来说，效力试验是反映产品稳定性的主要参数。对成品疫苗进行稳定性