无菌检查方法验证告报告2015

编号 编号 FAL YZ 003 1 无无菌菌检检查查方方法法 验验证证报报告告 编制 日期审核 日期 评审会签 姓名部门职务评审意见日期 批准 日期 科科技技发发展展有有限限公公司司 目目 录录 序号内容页号 1 目的 1 2 范围 1 3 依据 1 4 职责权限 1 5 验证方法 2 6 验证结论 5 7 附录 6 1 无菌检查方法验证报告无菌检查方法验证报告 1 目的目的 通过对培养基无菌性检查 灵敏度检查 对产品的无菌检查方法适用性进行试 验 证明该方法适用于产品无菌检查日常检测 2 范围范围 适用于本公司产品的无菌检查方法的建立和确认 3 依据 依据 中国药典 2015年版 GB T14233 2 2005 医用输液 输血 注射器具检验方法 第2部分 生物 学实验方法 4 职责权限职责权限 姓名姓名部门部门分工职责分工职责 组长 组织确认或验证工作 批准方案和报告组长 组织确认或验证工作 批准方案和报告 负责编制方案 实施 总结报告及微生物检测 负责设备样品提供 配合实施方案的工作 负责微生物检测 5 验证方法验证方法 实验前的准备 a仪器设备 2 设备名称设备编号证书编号设备 状态 压力蒸汽灭菌器 10 11 53 京海字第12004119号 未检定 己检定在有效期内 激光尘埃粒子计数器 Y09 3016 H212C O1040 未检定 己检定在有效期内 温湿度计 JWS A3 B812Z A0571号 未检定 己检定在有效期内 微压差表 B10093624 B712C E0083号 未检定 己检定在有效期内 微压差表 B10090070 B712C E0076号 未检定 己检定在有效期内 细菌培养箱 SPX 100B Z 京海字第11042604号 未检定 己检定在有效期内 霉菌培养箱 MLX 150 1 京海字第11042605号 未检定 己检定在有效期内 确认人 日期 b操作环境 微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空 气区域内进行 检验全过程必须严格遵守无菌操作 防止再污染 单向流空气 区域 工作台面及环境应定期按 医药工业洁净室 区 悬浮粒子 浮游菌和 沉降菌的测试方法 的现行国家标准进行洁净度验证 c 稀释液和试剂 PH7 0 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液 d 器具 无菌注射器 仪液器 YT 603 集菌仪 5 15 1培养基的适用性检查培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及胰胳大豆胨肉汤培养基等应符合培养基 的无菌性检查及灵敏度检查的要求 本检查可在供试品的无菌检查前或与供试 品的无菌检查同时进行 培养基 硫乙醇酸盐 批号 20140408 生产厂家 青岛日水生物技术有限公 司 胰胳大豆胨肉汤培养基 批号 20151023 生产厂家 青岛尼赛欣合生物技术有 3 限公司 5 1 1无菌性检查 每批培养基随机取不少于 5 支 瓶 培养 14 天 应无 菌生长 5 1 2灵敏度检查 菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代 从菌种保存中 心 获得的冷冻干燥菌种为第 0 代 试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行 保存 以保证试验菌株的生物学特性 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus CMCC B 26 003 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa CMCC B 10 104 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis CMCC B 63 501 生孢梭菌 Clostridium sporogenes CMCC B 64 941 白色念珠菌 Candida albicans CMCC F 98 001 黑曲霉 Aspergillus niger CMCC F 98 003 5 1 3菌液制备 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑 曲霉微生物培养基质控品 使用前注入1 1ml稀释液充分溶解后 在漩涡混合器 上震荡混匀 制成10 100 cfu 0 1ml菌悬液 3 5天内用完 5 1 4培养基接种 取每管装量为12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基7支 分别接种 小于100 cfu 的金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 生孢梭菌各2 支 另1支不 接种作为空白对照 培养3 天 取每管装量为9ml的胰胳大豆胨肉汤培养基7 4 支 分别接种小于100 cfu 的枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉各2 支 另1 支不接种作为空白对照 培养5 天 逐日观察结果 5 1 5结果判定 空白对照管应无菌生长 若加菌的培养基管均生长良好 判该 培养基的灵敏度检查符合规定 见附件无菌培养基的适用性检查记录见附件无菌培养基的适用性检查记录 5 25 2无菌检查方法验证试验无菌检查方法验证试验 5 2 1当建立产品的无菌检查法时 应进行方法的验证 以证明所采用的方法 适合于本产品的无菌检查 若本产品的组分或原检验条件发生改变时 检查方 法应重新验证 验证时 按 中国药典2015版四部1101无菌检查法 的规定进 行操作 对每一试验菌应逐一进行验证 5 2 2菌种及菌液制备 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 生孢梭菌 枯草芽孢 杆菌 白色念珠菌 黑曲霉同培养基灵敏度检查 5 2 3 薄膜过滤法 5 2 3 1FAL 胶无菌检测 使用 YT 603 集菌仪 滤膜孔经不大于 0 45 A 样品组样品组 取 1ml 医用胶缓慢滴入 100ml 氯化钠蛋白胨缓冲液中 使其固化成 白色胶膜充分冲洗振荡 1 分钟 制成样品组供试液 取一幅二联式集菌培养器 将样品组供试液平均通过每只集菌培养器过滤 再用 100ml 氯化钠蛋白胨缓冲 液冲洗 然后通过集菌仪每只集菌培养器加入 100ml 胰胳大豆胨肉汤培养基或 硫乙醇酸盐培养基 后每只加入 10 100cfu 试验菌 做为样品组 B 中和剂对照组中和剂对照组 取一幅二联式集菌培养器 将 100ml 氯化钠蛋白胨缓冲液平 均通过每只集菌培养器过滤 然后通过集菌仪每只集菌培养器加入 100ml 胰胳 5 大豆胨肉汤培养基 或硫乙醇酸盐培养基 后每只加入 10 100cfu 试验菌 做中和剂对照组 C C 阳性对照组 菌液组 阳性对照组 菌液组 取一幅二联式集菌培养器 通过集菌仪每只集菌培 养器加入 100ml 胰胳大豆胨肉汤培养基 或硫乙醇酸盐培养基 后每只加入 10 100cfu 试验菌 做为阳性对照组 D D 阴性对照 阴性对照 另取一幅二联式集菌培养器 通过集菌仪一只通过 100ml 胰胳大 豆胨肉汤培养基 另一只通过 100ml 硫乙醇酸盐培养基 作为阴性对照 5 2 35 2 3 结果判断结果判断 样品组与中和剂对照组微生物生长浓度相似 表明中和剂的中 和方式有效消除了样品的抑菌性 即有效性 如对照组与阳性对照的微生物 浓度相似 表明样品预处理 消除样品抑菌性的方法 检测程序和培养条件等 均不影响微生物生长 即无毒性 阴性对照无菌生长 否则实验无效 6 6 验证结论验证结论 通过培养基无菌性检查 培养基灵敏度检查 无菌检查方法验证 结果 表明 制定的无菌检查方法适用本公司的产品 6 无菌检查方法验证试验记录无菌检查方法验证试验记录 编号 ZJ JL 8 2 4 4 10 序号 样品名称 样品批号 检测日期 样品数量 试验方法 依据 中国药典 2015 年版 四部 1101 无菌检查法 方法验证试验 薄膜过滤法 直接接种法 硫乙醇酸盐流体培养基 30 35 培养 3 天 1 样品组2 中和剂对照组3 菌液组 现象描述 培养 天数 123451234512345 金黄色 葡萄球 菌 铜绿假 单孢菌 生孢梭 菌 阴性对 照 注 为生长 为不生长 胰酪大豆胨豆汤培养基 20 25 培养 5 天 1 样品组2 中和剂对照组3 菌液组 现象描述 培养天数123451234512345 枯草芽孢杆 菌 白色 念珠菌 黑曲霉 阴性对照 工 作 台 环境 CFU 皿 碟号24 小时48 小时平均菌落数 结论 1 2 7 3 结论 检验者 复核者 复核日期 无菌培养基的适用性检查记录无菌培养基的适用性检查记录 编号 ZJ JL 8 2 4 4 9 培养基 1 硫乙醇酸盐流体培养基 批号 检验日期 2 胰酪大豆胨豆汤培养基 批号 完成日期 以上均为符合药典规定的干燥培养基 一 培养基的无菌性检查 培养温度 硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨豆汤培养基 培养时间 天 培养基 名称 管数 1234567891011121314 备注 1 2 3 4 硫乙醇酸 盐流体 培养基 5 1 2 3 4 胰酪大豆 胨豆汤培 养基 5 结论 注 为生长 为不生长 二 培养基的灵敏度检查 1 菌液制备 1 金黄色葡萄球菌新鲜肉汤 培养物 CMCC B 26003 第 代 注入 1 1ml 稀释液充分深解后 在漩涡 混合器上震荡混匀 至 含菌量 CFU 0 1ml 2 枯草芽孢杆菌新鲜肉汤培 养物 1ml CMCC B 63501 第 代 注入 1 1ml 稀释液充分深解后 在漩涡混合器上震荡混匀 至 含菌量 CFU 0 1ml 3 铜绿假单胞菌新鲜肉汤培 养物 1ml CMCC B 10104 第 代 注入 1 1ml 稀释液充分深解后 在漩涡混合器上震荡混匀 至 含菌量 CFU 0 1ml 8 4 生孢梭菌新鲜硫乙醇酸盐 培养物 CMCC B 64941 第 代 注入 1 1ml 稀释液充分深解后 在漩涡混合器上震荡混匀 至 含菌量 CFU 0 1ml 5 白色念珠菌新鲜改良马丁 培养物 1ml CMCC F 98001 第 代 注入 1 1ml 稀释液充分深解后 在漩涡混合器上震荡混匀 至 含菌量 CFU 0 1ml 6 黑曲霉新鲜孢子洗脱液 1ml CMCC F 98003 第 代 注入 1 1ml 稀释液充分深解后 在漩涡混合器上震荡混匀 至 含菌量 CFU 0 1ml 2 检查结果 细菌培养温度 3 天 霉菌及酵母菌培养温度 5 天 硫乙醇酸盐流体培养基 天 菌种类型 培养基装量