循环肿瘤细胞(CTC)检测在肺癌中应用.ppt

循环肿瘤细胞 CTC 检测在肺癌中的应用 肿瘤疾病近期疗效的判断方法 临床因子作为预后与预测因子 预后 T N Mstaging PSscore预测 吸烟状况 指导靶向治疗性别 指导靶向治疗种族 指导靶向治疗组织学 指导化疗和靶向治疗 影像学方法 非侵入地 直观地对患者的肿瘤大小变化情况进行评估 缺点 存在一定的健康危害或健康隐患肿瘤大小常与肿瘤的恶性程度或浸润能力不完全一致费用昂贵滞后性灵敏性低 病理学方法 手术或活检获得病灶组织 周围淋巴结组织 进行病理学染色和分析 是目前唯一明确肿瘤有否转移的金标准缺点 精确度不够高是侵入性检查手段易造成扩散人工误差大难以标准化 血清肿瘤标记物测定 血清肿瘤标志物的浓度往往可以在一定程度上提示肿瘤的发展程度缺点 特异性不高易受非特异蛋白的干扰其他的病理生理状态影响导致假阳 阴性结果 1869年AustMedJ Ashworth最早在转移性癌症患者血液中观察到 2005年NEnglJMed Cristofanilli证实治疗前CTC数目是转移性乳腺癌患者无进展生存期和总生存期的独立预测因子 循环肿瘤细胞指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞 循环肿瘤细胞 CTC检测 预测PFS及OS指示预后效果复发转移预测与分期有助于肿瘤个体化治疗的药物筛选和治疗方案的确定是传统的影像学及其他生物标志物的补充检测手段有助于寻找新的肿瘤标识物以及开发新的抗肿瘤药物 肿瘤细胞作为生物标志物 外周血和肺静脉血中的循环肿瘤细胞 CTCs 临床意义 转移的辅助标志物 可以预测治疗 预后因子 最小损伤的突变检测 获取CTC需要解决的技术问题 从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞将恶性肿瘤细胞与红细胞 白细胞 正常上皮细胞 造血干细胞等区分开来 每10mL血液中可能仅含有几个到几十个循环肿瘤细胞 而10mL血液中含有的白细胞约有1亿个 红细胞有500亿个 三种技术 过滤法 ISET IsolationbySizeofEpithelialTumorcells8 m孔径过滤膜 漏检体积较小的肿瘤细胞敏感性低 梯度密度法 肿瘤细胞和单核细胞密度小于1 077g mlCTC纯度低 混入较多白细胞肿瘤细胞会迁移至血浆层 而聚集后容易下沉聚蔗糖 泛影葡胺 Ficoll Hypaque 对细胞有毒性 免疫磁珠法 肿瘤细胞表面抗原CTC纯度低 混入较多白细胞不能有效排除细胞碎片假阳性和假阴性高 CellSearch 免疫磁珠 流式细胞分析 化学发光 CellSearch是全球第一也是唯一经FDA批准可用于临床的循环肿瘤细胞 CTC 产品 1983磁流体 JClinOncol 2011Apr20 29 12 1556 63 Epub2011Mar21 Evaluationandprognosticsignificanceofcirculatingtumorcellsinpatientswithnon small celllungcancer 背景 实验流程 患者入组标准 未做过化疗 且4周内未做过放疗病理学确诊为非小细胞肺癌IIIA IIIB IV期准备进行标准的细胞毒疗法5年内未患过恶性肿瘤 实验方法 CellSave专用收集管采集血液采集血后于室温储存并于96小时内进行检测Cellsearch系统进行检测 患者化疗前CTC数量 基线CTC 与临床特征的关系 IV期患者CTC数量明显多于IIIB期患者 IIIB期患者的CTC数量又明显多于IIIA期患者 肝转移及骨转移患者中CTC数量明显多于其它转移患者 患者化疗前CTC数量与肿瘤转移地点的关系 所有非小细胞肺癌病人 所有 期非小细胞肺癌病人 基线CTC数量与无进展生存期和总生存期的关系 基线CTC数量少于5的患者无进展生存期和总生存期明显高于基线CTC数量大于等于5的患者 化疗前后CTC数量与患者无进展生存期和总生存期的关系 化疗后CTC数量少于5的患者无进展生存期和总生存期明显高于CTC数量大于5的患者 化疗前后CTC数量都少于5的患者无进展生存期和总生存期明显高于只有一次测出CTC数量少于5的患者 化疗前后CTC的数量变化反映临床疗效 化疗前 化疗后 化疗后CTC数量减少患者的临床疗效好于CTC数量增加的患者 结论 CTC能在IV期非小细胞肺癌患者中检出 CTC数量的变化反映了临床疗效 CTC数量与OS和PFS相关 是非小细胞肺癌的一个新的预后判断因子 CTC在判断是否存在转移中有重要参考价值 对于原发性肺癌患者 CTC计数在有远处转移的肺癌患者中有显著升高 相关性优于CEA CTC升高对于判断远处转移的敏感性达71 特异性达83 CTC计数和血清CEA水平在不同切点的诊断价值 治疗前和治疗后CTC的数量变化反映疗效 大多数患者的CTC数量在第一个化疗疗程后 22天 下降 提示疗效好 TheAnnalsofThoracicSurgeryVolume87 Issue6 June2009 Pages1669 1675CirculatingTumorCellsinPulmonaryVenousBloodofPrimaryLungCancerPatients 鳞癌中periCTC和pvCTC的数量明显高于腺癌 NEnglJMed2008 359 366 77 DetectionofMutationsinEGFRinCirculatingLung CancerCells 背景 CTC中EGFR突变与肿瘤组织中EGFR突变的一致性 SARMS方法 CTC中EGFR基因型有17个与肿瘤组织中的一样 准确率为94 CTC数量与病情进展的关系 吉非替尼治疗后CTC数量下降 伴随着疾病进展CTC数量也随之上升 肿瘤大的患者CTC数量比肿瘤小的患者多 CTC数量 影像学肿瘤变化 检测CTC中EGFR的基因型与组织中检测结果高度符合 可以通过CTC来检测非小细胞肺癌患者肿瘤的基因型 CTC数量与疾病进展密切相关 结论 小细胞肺癌患者活检组织及相对应的CTC中的CD56 活检组织中的CD56和CTC中的CD56表达具有一致性 肺癌组织 肺癌肝转移组织 BaselinebloodCAC 肿瘤细胞 a monosomy6p11 q12 b amplificationEGFR c MYC EGFR red 5 p15 3 green 6p11 q12 aqua c MYC yellow c trisomyCEP3andmonosomyCEP17 d polysomyCEP3 CEP7 CEP17and9p21 3 CEP3 red CEP7 green CEP17 aqua 9p21 3 yellow 外周循环肿瘤细胞的异常情况与手术切除的肿瘤细胞具有高度一致性 BaselinebloodCTC 肿瘤细胞 CTC中的染色体异常分子标记物与疾病的复发和生存密切相关 CTC的应用 从细胞计数到分子特性 FISH分析CTC生物学特性 白细胞有两份CEP7 绿色 EGFR 红色 和MET 蓝色 CTC中 EGFR 红色 和MET 蓝色 基因扩增 微列阵 实时定量RT PCR 对CTC进行基因表达分析 BIOTECAN宝藤 J J强生 国内首个CELLSEARCH商业实验室CH商业实验室 CTC检测样本准备 使用CellSave储存管采集静脉血液标本10ml轻轻颠倒8次 防止凝块样本室温条件 15 30摄氏度 下96小时之内接受处理接受阿霉素治疗的患者给药之后 至少需要等待7天 样本溶血及结块不能用于CTC检测 NOTICE 样本处理流程 7 5ml血液采集于CellSave储存管 加入6 5ml缓冲液离心CellTracks AutoPrep 系统自动处理流程系统自动将被捕获的 经过染色的细胞置入MagNest装置的样本盒中系统自动分析后得到结果并由操作人员进行最终判读 分析结果并出具报告