艾滋病检测技术及诊断.ppt

艾滋病检测技术及诊断 检测依据和行业标准 样品的采集和处理 样品种类及用途血液标本的采集抗凝剂的选择样品的保存样品的运送 样品种类及用途 全血 血清 血浆 口腔黏膜渗出液 尿液及干血斑 DBS 样品可用于HIV抗体检测 全血 血清 血浆 病毒培养上清液可用于HIV抗原检测 抗凝全血可用于CD4 和CD8 T淋巴细胞测定 血浆 DBS可用于HIV 1病毒载量 基因型和耐药检测 淋巴细胞富集液 外周血单核淋巴细胞 PBMC 及全血可用于HIV核酸定性与定量 基因型检测和HIV 1分离培养 血液标本的采集 抗凝全血 消毒局部皮肤 用有抗凝剂的真空采血管抽取适量静脉血 或用一次性注射器抽取静脉血 转移至加有抗凝剂的试管中 轻轻颠倒混匀6 8次 备用 血浆 将采集的抗凝全血1500 3000r min离心15分钟 上层即为血浆 吸出置于合适的容器中 备用 血清 根据需要 用不含抗凝剂的真空采血管抽取5 10ml静脉血 或一次性注射器抽取静脉血 转移至无抗凝剂的试管中 室温下自然放置1 2小时 待血液凝固 血块收缩后再用1500 3000r min离心15分钟 吸出血清 置于合适的容器中 备用 抗凝剂选择 CD4 和CD8 T淋巴细胞检测 EDTA 肝素 枸橼酸钠病毒分离 核酸检测 EDTA 枸橼酸钠 样品的保存 抗体检测 血清或血浆样品 短期 1周 内进行检测的可存放于2 8 一周以上应存放于 20 以下 核酸检测 4 8h内分离血浆 4天内检测可存放于4 3个月内存放于 20以下 3个月以上 70 以下保存 CD4 T淋巴细胞检测 室温保存 时间不超过24h 如果用CD45设门 样品保存不超过72h 样品的保存 筛查阳性样品应及时进行补充试验 筛查阴性样品 可根据具体需要决定保存时间 建议至少保存1个月 特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间 补充试验阳性样品按照国家生物样品管理的有关规定执行 样品的运送 标本筛查阳性 复检需用三代试剂 送检单位必须联系受检者 在仔细核实受检者身份等信息后重新采集1份全血 将筛查阳性的血清与重新采集的全血共2份样品一同送至本中心 要求送检血清量不得少于0 5ml 送检单位对重新采集的全血不得做任何处理 标本的标识须用正楷字标明受检者姓名 性别和采集时间 年 月 日 筛查阳性的血清应装于1 5ml冻存管内 如果没有也可装于真空采血管内 禁止使用除此之外的其他容器 样品的运送 包装要求 应采用WHO提出的三级包装系统第一层容器 装样品 要求防渗漏 样品应置于带盖的试管内 试管上应有明显的标记 标明样品的编号或受检者姓名 种类和采集时间 在试管的周围应垫有缓冲吸水材料 以免碰碎 随样品应附有送检单 送检单应与样品分开放置 第二层容器 要求耐受性好 防渗漏 容纳并保护第一层容器 可以装若干个第一层容器 将试管装入专用带盖的容器内 容器的材料要易于消毒处理 第三层容器 放在一个运输用外层包装内 应易于消毒 在第三层容器外面要贴标签 数量 收 发件人 样品的运送 用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送 用于CD4 和CD8 T淋巴细胞测定的样品应在室温下 18 25 运送 用于病毒载量检测的样品应在 20 以下运输 DBS和尿液样品应在室温下运送 样品的运送 样品的运送 带螺帽 垫圈的血清冻存管 样品的运送 禁止使用EP管 样品的运送 禁止使用内旋盖冻存管 样品的运送 在冻存管外套带盖的第二层容器 样品的运送 置于带冰袋的第三层容器中 样品的运送 HIV抗体筛查检测报告的填写筛查阳性的标本应填写HIV抗体筛查检测报告 加盖公章后送检 报告单不得有空项 必须按规范要求认真完成筛查 复检 第一次 复检 第二次 三次试验 在检测结果空白处填写送检样品的S CO值或发光值 HIV筛查实验室筛查不能使用快速检测方法 两次复检需使用三代试剂 三代试剂检测结果阳性方可送检 HIV抗体检测 HIV抗体检测的实验室要求HIV抗体检测的目的和要点常规HIV抗体检测方法结果报告质量控制 HIV抗体检测 HIV抗体检测的实验室要求应符合国家对实验室生物安全的有关要求实验室的质量控制按 全国艾滋病检测技术规范 2015 相关章节规定执行 HIV抗体检测 HIV抗体检测的目的和要点目的 1 HIV抗体检测可用于诊断 血液筛查 监测等 2 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况 包括临床检测 自愿咨询检测 根据特殊需要进行的体检等 3 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV 包括献血员筛查和原料血浆筛查 4 以监测为目的的检测是为了了解不同人群HIV感染率及其变化趋势 包括高危人群 重点人群和一般人群 HIV抗体检测 要点 1 根据目的选择检测方法及检测策略 2 严格遵守实验室SOP 3 结果判定以试剂盒说明书为标准 4 筛查试验有反应 须做补充试验 补充试验包括抗体确证试验 WB RIBA LIA 和核酸试验 定性和定量 HIV抗体检测 常规HIV抗体检测方法酶联免疫吸附试验 ELISA 化学发光或免疫荧光试验 CIA IFA 快速检测法 RT 金标法 硒标法 明胶颗粒凝集试验 PA 蛋白免疫印迹试验 WB 条带 线性免疫试验 RIBA LIA 筛查方法 抗体确证试验 HIV抗体检测 结果报告筛查报告 筛查试验无反应报告为 HIV抗体阴性 有反应必须进行复检 复检两次检测均无反应报告为 HIV抗体阴性 复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行 补充试验 本中心只提供WB试验 报告为 HIV感染待确定 不能出具阳性报告 确证报告 符合HIV 1阳性判断标准 报告 HIV 1抗体阳性 符合HIV 2抗体阳性判断标准 报告 HIV 2抗体阳性 符合阴性判断标准 报告 HIV抗体阴性 符合不确定判定标准 报告 HIV抗体不确定 备注中注明 2 4周后复检 质量控制 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制快速法抗体检测质控 质量控制 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制试剂盒内部对照 试剂盒内提供的阴阳性对照血清 用于判断每次实验的有效性 但不能作为室内质控品用 室内质控品 外部对照 1 为试剂盒组分的外部质控品 是为监控检测的重复性而设置 质控品定值必须为弱阳性 2 可判断该批样品检测的有效性 因此 每次实验必须含室内质控品 其结果无效 必须重新试验 质量控制 Levey Jennings质控图质控图参数 算术平均值 X 标准差 S 变异系数 CV 及控制限 控制规则 告警 12S 失控 13S 质量控制 1 告警 12S 当外部对照的S CO值超过 2S范围时 系统处于告警状态 应予注意 是否可以继续检测需要进一步观察 警告 12S规则违背 质量控制 2 失控 13S 当外部对照的S CO值超过 3S范围时 系统处于失控状态 本次结果不能被接受 失控 13S规则违背 质量控制 质控图的分析及失控处理实验室应建立质控图分析及失控情况处理的程序 当出现失控时 必须找出发生问题的原因 找出解决问题的方法 并消除原因 质量控制 快速检测质控试剂内对照在质控窗口内出现质控带 该质控带是试剂自带的内部过程质控 说明实验操作全部完成并且实验所用材料处于工作状态 清洁的检测区背景是内部阴性过程质控 如试验完成后未呈现红色质控带 说明试剂盒内质控无效 该试验结果无效 样品必须重检 实验室质量控制 室内质控品对照1 可采用商用质控品或自制质控品 质控品应包含抗体阳性样品和阴性样品 不能使用酶联试验的外部质控品 更换试剂批号更换检测人员2 下列情况需做质量控制更换包装更换厂家3 建议 每个检测日检测一次阳性和阴性质控品 如果日检测量大于50份样品 至少应做2次质控 实验室检测策略 窗口期 从HIV感染人体到感染者血清中的抗体 抗原或核酸等感染标志物能被检测出之前的时期 在窗口期内的血液已有感染性 现有诊断技术检测HIV抗体 抗原和核酸的窗口期分别为感染后的3周 2周和1周左右 HIV抗体筛查试验 初步了解机体血液或体液中有无HIV抗体的检测方法 也包括同时检测抗体和抗原的方法 HIV补充试验 在获得筛查试验结果后 为了准确判断 继续检测机体血液或体液中有无HIV抗体或核酸的方法 包括抗体确证试验和核酸试验 实验室检测策略 实验室检测策略 使用抗体检测试剂的筛查检测流程 三代试剂 试剂1 有反应 无反应 两种试剂 均有反应一有 一无 均无反应 补充试验 报告HIV抗体阴性 实验室检测策略 使用抗原抗体检测试剂的筛查流程 四代试剂 抗原抗体检测试剂 有反应 抗体检测 均有反应一有 一无 补充试验 均无反应 HIV 1核酸试验或P24抗原试验或2 4周后随访 无反应 报告HIV抗体阴性 P24抗原阴性 HIV感染 AIDS的诊断 诊断原则以实验室检测为依据 结合临床表现和参考流行病学资料综合进行 HIV抗体和病原学检测是确诊HIV感染的依据 流行病学史是诊断急性期和婴幼儿HIV感染的重要参考 CD4 T淋巴细胞检测和临床表现是HIV感染分期诊断的主要依据 AIDS的指征性疾病是AIDS诊断的重要依据 HIV感染 AIDS的诊断 HIV感染的诊断成人 青少年及18个月以上儿童符合下列一项即可诊断 HIV抗体筛查试验有反应和HIV抗体确证试验阳性 HIV抗体筛查试验有反应和核酸定性试验阳性 HIV抗体筛查试验有反应和核酸定量试验 5000cps ml 有流行病学史或艾滋病相关临床表现 两次HIV核酸检测均为阳性 HIV分离试验阳性 HIV感染 AIDS的诊断 18个月龄及以下儿童符合下列一项即可诊断 为HIV感染母亲所生和两次HIV核酸检测均为阳性 第二次检测需在出生4周后采样进行 有医源性暴露史 HIV分离试验结果阳性或两次HIV核酸检测均为阳性 为HIV感染母亲所生和HIV分离试验阳性 HIV感染 AIDS的诊断 AIDS的诊断成人及15岁 含15岁 以上青少年符合下列一项即可诊断 HIV感染和CD4 T淋