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食用菌生物学实验 实验一母种培养基配制及棉塞制作 一 实验目的1 掌握食用菌固化培养基的配制 2 学会棉塞的制作方法 二 基本原理食用菌母种分离 移接和斜面保存菌种都必须要制作相应的培养基 以备食用菌的培养 分离和保存之用 培养基是根据各种食用菌在生长繁殖过程中对营养物质需求制成的 它可供给食用菌的C源 N源 水分 各种无机盐及生长物质等 培养基的种类很多 本实验学习斜面培养基 PDA 制作 三 实验准备1 器具 天平 称量纸 牛角匙 精密pH试纸 量筒 刻度搪瓷杯 试管 三角瓶 漏斗 漏斗架 玻璃棒 烧杯 试管架 铁丝筐 剪刀 棉花 线绳 牛皮纸 皮筋 纱布 电炉 菜刀 菜板 小铝锅等 2 材料 马铃薯 葡萄糖或蔗糖 琼脂 水 四 实验内容过程 制马铃薯滤液 融化琼脂 培养基的分装 棉塞的制作方法步骤 1 配方 PDA 马铃薯200g 葡萄糖20g 琼脂15 20g 自来水1000ml pH自然 2 制作方法 1 制滤液 马铃薯刮去粗皮 去芽眼 切成碎块 称量后放锅中 加水1200 1300ml 将其煮沸20min 用双层纱布过滤 取1000ml滤液 2 化琼脂 将滤液加热至将沸腾时加入琼脂 不断搅拌 注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦 待琼脂完全融化后加入剩余原料 并使其溶解 用热水补足水量 3分装 通过漏斗装置 趁热将培养基分装于试管中 装量约占试管高度的1 4 分装三角瓶 其 装量以不超过其容积的一半为宜 注意管口或瓶口不要沾染培养基 4 制棉塞棉花以白色长绒脱脂棉为宜 根据试管口大小取棉 将其卷成棉塞 最好外包一层纱布 将棉塞塞入试管口 棉塞塞入试管2 3 制做棉塞要求外表光滑 外包的纱不能折 松紧适宜等 A 正确 B 不正确 5 包扎 管口堵入棉塞后7或9支试管扎一捆 棉塞部分用牛皮纸包扎 在包装纸上标明培养基名称 制备组别和姓名 日期等 6 灭菌 7 摆斜面 8 存放冰箱 4 6C 六 作业1 简述高压灭菌锅的使用 2 何谓灭菌 简述热力灭菌的类型和原理 3 何时加入琼脂 融化时注意什么问题 分装的技术要求有哪些 4 棉塞的作用有哪些和技术要求 菌种培养时管口堵胶塞或软木塞行吗 为什么 实验二 食用菌接种环境的消毒 灭菌与斜面接种一 目的及要求 1 掌握食用菌斜面接种方法及无菌操作技术 2 能正确分析自己的接种效果 二 基本原理 食用菌斜面接种是食用菌栽培过程中最基本的方法之一 也是食用菌制种工作最重要的一个环节 因为在食用菌栽培过程中 一旦斜面接种污染 后面的工作将无法进行 故斜面菌种的接种 分离和移接非常重要 必须在严格无菌操作条件下进行 才能获得纯菌丝体 纯菌 三 实验准备1 材料 空白斜面培养基 无菌检验 母种等2 器具 酒精灯 接种环 火柴 尖头镊 酒精棉球 大镊子 接种箱 超净工作台 高锰酸钾 37 甲醛溶液 紫外灯 2 来苏水 标签纸等 四 实验内容1 接种环境的处理2 母种的转管技术 五 方法步骤1 接种环境的处理 1 接种箱的熏蒸 先用2 来苏清洁接种箱内外 放入接种所需的物品 用甲醛熏蒸 每立方米空间一般用甲醛10ml 加半量高锰酸钾 5 7g 使甲醛氧化挥发 先将高锰酸钾放入接种箱内的容器中 再注入甲醛 立即产生强烈刺激的甲醛气体 熏蒸25 30min 2 超净工作台的消毒 用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品 开启超净工作台上的紫外灯 照射20 30分后使用 2 母种的转管技术 1 手及菌种管的消毒 用肥皂洗手 再用75 酒精棉球擦手和菌种管表面 在酒精灯焰上略烧试管外的棉塞后 立即将菌种管放入接种箱内 2 转管 两手从接种孔伸人接种箱内 酒精棉球擦拭接种环 左手持菌种管和斜面管 两支试管口对齐于火焰上方 右手持接种环或针和铲等 并将其在灯焰上干热灭菌 用小指及无名指拔掉棉塞 接种环冷却后伸入菌种管内取略豆粒大菌种块 迅速移人斜面培养基的中部 然后将棉塞在火焰上烧一下 立即塞入试管口 旋紧棉塞 接种环不要触碰管口及管壁 接种后的试管应立即贴标签 注明菌种名称及接种日期 再进行适温培养 母种转管过程 六 作业1 何谓无菌操作 消毒 消毒分哪几种类型 2 同学相互评比接种结果分析自己接种成败的原因 实验三 食用菌母种制作分离技术一 目的要求1 明确食用菌无菌操作技术要点 2 掌握食用菌母种分离技术 二 基本原理 食用菌母种分离方法较多 但主要采用组织和孢子分离 所不同的是前者取子实体某块组织 后者取子实体的孢子经过培养形成的纯菌丝体 纯种 三 实验准备1 材料 空白斜面培养基 空白培养无菌 食用菌子实体等2 器具 酒精灯 接种环 火柴 尖头镊 酒精棉球 大镊子 接种箱 超净工作台 高锰酸钾37 甲醛溶液 紫外灯 2 来苏水 标签纸等 四 实验内容1 组织分离2 孢子分离五 方法步骤1 接种环境的处理 1 接种箱的熏蒸先用2 来苏清洁接种箱内外 放入接种所需的物品 用甲醛熏蒸 每立方米空间一般用甲醛10ml 加入高锰酸钾 5 7g 使甲醛氧化挥发 先将高锰酸钾放入接种箱内的容器中 再注入甲醛 立即产生强烈刺激的甲醛气体 熏蒸20 30min 2 超净工作台的消毒用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品 开启超净工作台上的紫外灯 照射20 30min后使用 接入的母种2 组织分离法此法是生产中最常用的方法 具有操作简便 菌丝萌发快 分离所得的菌种在培养基条件适宜的情况下 能保持原菌种的优良性状 1 种菇消毒在接种箱内 用镊子夹着燃烧的酒精棉球迅速擦拭菇体 2 取接组织将菇体撕开 用无菌尖头镊在柄盖交界处取绿豆粒大组织 放入斜面培养基中央 迅速塞上棉塞 3 多孢子分离 1 钩悬法是一种特别适用于耳类 也适用于伞菌类的多孢分离法 在接种箱内将一小块消毒的耳片或菇片悬挂于无菌三角瓶内 装约1cm厚的培养基 在25 左右条件下 约24h现孢子粉时以无菌操作法取出分离材料 适温培养后挑取健壮尖端菌丝转管 2 孢子印分离法取成熟子实体经表面消毒后 切去菌柄 将菌褶向下放置于灭过菌的有色纸上 在20 24 静置一天 大量孢子落下形成孢子印 接种环沾少量孢子在试管或平板培养基上划线培养 4 母种的培养将斜面朝下斜置叠放于瓷盘中 放于培养箱中适温培养 2 3天后每天都要检查菌丝生长情况 及时挑拣污染试管 出现粘膜或杂色 5 注意事项 分离的母种一定纯化后再做出菇试验 1 纯化菌丝长至斜面1 2时 挑尖丝转管 培养成再生母种 2 出菇试验将再生母种扩成原种 栽培种 使其出菇 看产量 质量 形态 长势 抗性如何 经鉴定为优质菌种后 才可供生产使用 3 控制菌龄菌丝即将长满斜面 一般7 10天 终止培养 分别用于菌种保藏或繁衍原种 六 作业1 食用菌菌种分离技术有哪些方法 生产上最常用的是哪一种 2 孢子分离的母种为何一定要做出菇试验 3 试设计一个分离野生平菇菌种的实验方案 实验四 食用菌原种栽培种培养基 料 的配制与消毒灭菌一 目的要求1 掌握原种 栽培种培养基 料 的类型 2 学会原种 栽培种培养基 料 的配制方法 二 基本原理 食用菌原种及栽培种培养基的种类很多 根据主料不同分为粮食颗粒 棉子壳 稻草 玉米芯 粪草 木削等多种 原种 栽培种培养基 料 的配制基本相同 所不同的是原种培养基更精细 营养更丰富 更全面 更易被菌丝吸收 栽培种培养基更粗放 更广泛 更接近生产实际 原种 栽培种两菌种的生产过程基本相同 主要区别在于接种时取接的菌种不一样 三 实验准备1 材料 棉籽壳 麸皮 蔗糖 石灰粉 过磷酸钙等 2 器具 棉塞 打孔棒 菌种袋或瓶 标签 高压灭菌锅 接种箱 消毒药品 线绳等 四 实验内容1 培养料的配制2 菌种瓶及菌种袋的分装 五 方法步骤 一 培养基的配制 1 配方与配制P102 粮食颗粒培养基 麦粒 玉米粒等 配方 粮食粒98 5 石膏粉1 碳酸钙0 5 配制 将洗净的粮食粒洗净 用1 石灰水泡胀 文火煮沸15 20min 熟而不烂 勿破皮 捞出晾至无明水后拌入余料 原种多使用颗粒培养基 棉籽壳麦麸培养基配方 棉籽壳87 麦麸10 白糖1 石灰1 过磷酸钙1 配制 将棉籽壳 麦麸 石灰混合为主料 余料溶解于少量水后浇入主料中 边加清水边翻拌至含水量达60 65 紧握料的指缝中有水泌出而不下滴 2 分装 原种培养基装入菌种瓶 或其他大口瓶 装量约占瓶高的1 2 非颗粒培养基可装至瓶肩 用锥形棒打一料孔 瓶口擦净 堵棉塞后外包牛皮纸或双层报纸 栽培种培养基一般装入聚丙烯菌种袋 上端套颈圈后如同瓶口包扎法 两端开口的菌种袋可将两端扎活结 装料要求外紧内松 培养料需紧贴瓶壁或袋壁 松散的培养料会导致菌丝断裂及影响对养分 水分的吸收 二 培养基的灭菌原种与栽培种培养基的容器大 装量多 应增加灭菌压力及灭菌时间 高压蒸汽灭菌 一般在压力 1 5kg cm2 温度约128 1 条件下 保持灭菌时间1 2h 若采用常压灭菌 需保持最高温度10h左右 再闷1天或1晚 六 作业 料 的配置有何不同 粮食颗粒为何要进行泡和煮 实验五 食用菌原种 栽培种接种环境消毒 灭菌与接种一 目的要求1 掌握接种前的准备工作及原种 栽培种的接种 2 能通过培养观察分析自己的接种结果和存在的问题 二 基本原理食用菌菌种制作分为三个阶段 即 母钟 原种 栽培种 栽培种是对菌种的再次扩大培养 为食用菌生产提供大量优质菌种 是生产的需求 同时 也使菌种适应大生产用的栽培料和生态环境的需求 通过菌种的多次扩繁提纯以逐级检查菌种的品质 及时存优去劣 以获得高产优质菌种 三 实验准备材料器具 一 二级菌种 接种耙铲 大镊子 酒精灯 火柴 酒精棉球 标签 高压灭菌锅 接种箱 消毒药品等 四 方法步骤食用菌一二级菌种的生产过程基本相同 主要区别在于接种时取接的菌种不一样 一 接种转管 瓶 灭菌后的原种及栽培种培养基及时运送至无菌环境中 待料温降至约24 进行抢温接种 1 接原种用接种耙铲取蚕豆大母种 连同培养基 放于瓶中培养料的孔口处用料盖实 一般1支母种可接10支再生试管母钟 一只再生试管母钟约接5 8瓶原种 2 接栽培种用大镊子 接种铲或接种匙取枣大原种 放于瓶或袋中料面上 若两端扎活结的菌种袋 每端都要接入原种 1瓶原种约接60瓶或25 30袋栽培种 去弃表面老化菌丝及老种块 堵棉塞或用线绳扎袋口 贴标签 注明菌种名称和接种日期 二 培养接种后将种瓶 袋 置于适温下培养 菌种瓶初放时 应直立于床架上 当菌丝吃料后 再将其横放 菌种袋根据气温可单层或多层叠放 隔4 5天转动或调换位置 以利于受温一致 并避免培养料水分的沉积 经常检查及时去除出现杂色 粘液及菌种死亡的瓶或袋 逐渐降温当菌丝长至料深的1 2时 降温2 3 以免料温升高 菌丝生长细弱 注意菌龄原种约30天 栽培种约20 30天菌丝长满 再继续培养7 10天是使用的最好菌龄 五 作业1 原种和栽培种培养基 料 的配置有何不同 2 何谓接种 一只试管种可接多少瓶原种和栽培种 3 菌种的表面有一块残留的琼脂块 证明该菌种是哪级菌种 菌种表面有少许玉米粒或麦粒 证明该菌种是哪级菌种 菌种在适宜条件下培养了十多天 发现有些菌种块丝毫未萌动 请分析原因 实验六 食用菌制种及栽培中主要病虫害识别综合观察分析 综合 一 目的要求能正确识别主要病虫害的形态特征及侵染症状 分析产生的原因 能采取正确的防治方法 二 基本原理食用菌栽培中 优良的菌种是最关键条件 因此 必须通过各类菌种培养观察中筛选出菌体洁白 生长旺盛 无污染和虫害的纯菌丝体 纯种 用于生产 否则会直接影响产量和质量 三 实验准备1 材料 被侵染的培养料和子实体2 器具 放大镜 显微镜 解剖镜 接种针 尖头镊 载玻片 盖玻片 吸水纸 酒精灯 火柴 无菌水 染色剂等 四 实验内容1 主要 竞争性 真菌侵染症状的识别2 主要病虫害的识别 五 方法步骤1 主要 竞争性 真菌侵染症状的识别 1 观察 用肉眼和放大镜观察木霉 青霉 曲霉 毛霉 根霉 杂菌的危害症状 2 镜检 载玻片中央滴半滴无菌水或染色剂 无菌尖头镊取少许污染材料置于水或染液中 无菌接种针轻轻拨散 放盖片 低倍镜找理想目标 高倍镜下观察各霉菌的形态特征 木霉食用菌的劲敌 后期呈墨绿色 后期 初期 显微镜下 曲霉 黑曲霉及黄曲霉 黑曲霉孢子成熟后呈黑色 呈黄绿色的是黄曲霉 青霉孢子成熟后呈青绿色 根霉后期呈黑色 有假根及匍匐菌丝 毛霉后期呈黑色 无假根及匍匐菌丝 日长速有时达3cm 2 主要虫害的识别 1