医学标书申请格式

重点 优秀青年所属学科 医学 项 目 类 别 一般一般 湖南省教育厅科学研究项目湖南省教育厅科学研究项目 申申 请请 书书 项 目 名 称 凝血检验室内质控物的研制凝血检验室内质控物的研制 申 请 者 赵早云赵早云 所 在 学 校 湖南中医药大学湖南中医药大学 电 话 0731 传 真 0731 电子信箱 Email zzy 申 请 日 期 2010 03 09 湖南省教育厅 2006 年制 填 报 说 明 一 申请书各项内容 要实事求是 逐条认真填写 表达要明确 严谨 外来语 要同时用原文和中文表达 第一次出现的缩写词 须注出全称 除签名外 项目申请 书必须是打印件 二 申请书一律用 A4 纸 于左侧装订成册 第二页起各栏空格不够时 请自行加 页 如有查新报告及其它附件材料 请连同申请书一起装订成册 附件不超过 20 页 三 所属学科 按湖南高校科技网政策法规栏公布的二级学科名称填写 项目 类别 在 重点 优秀青年 一般 三类中选择 封 2 此页不装订 1 一 简表 项目名称凝血检验室内质控物的研制 研究类型基础研究 应用研究 试验发展 研究年限2011 1 年 至 2012 12 年申请经费 1 万元 姓名赵早云学位本科职称副高身份证号码 x 项 目 负 责 人 主要学习和工作经历 自大学开始 1987 1990 年在湖南医学专科学校攻读临床检验 1994 3 1994 9 在浏阳永安医院检验科进行技术指导 1990 1998 年在湖南中医药大学检验科工作 1998 1 1998 6 月在湘雅医学院附二医院血液研究室进修血液检验及形态学 1999 2001 在湖南中医药大学学习中医学 1999 创立血液室 至今在湖南中医药大学血液室工作 联合申请单位 姓 名职 称 已获 学位 专业 本人 签名 所在单位身份号码 陈偶英副高 硕士护理 湖南中医药大学 周欣欣 初级本科检验 湖南中医药大学第 一附属医院 江劲波 正高本科 血液 内科 湖南中医药大学第 一附属医院 聂甜 医师 研究 生 血液 内科 湖南中医药大学第 一附属医院 X 李红卫 中级本科检验 湘雅三医院 其 它 主 要 研 究 人 员 2 二 立论依据二 立论依据 包括项目的研究意义 国内外研究现状分析 1 凝血常规检验的临床意义 凝血酶原时间 PT 是一个基础的凝血筛选试验 常用来评价先天的和 或 后天获得的外源性凝血途径 因子II V VII X PT延长可见于下列临床情况 维生素K拮抗剂抗凝治疗 肝脏疾病 肝硬化 肝炎 黄 疸 新生儿出血性疾病 纤维蛋白溶解 内分泌失调 DIC PT被广泛用于检测抗凝治疗 因为它的灵敏度 可反映依靠维生素K的因子II VII和X的浓度变化 所以此实验所得的结果对确定治疗药物浓度是特异的 活化部分凝血活酶时间 APTT 是一个基础的内源性凝血途径筛选试验 因子 XII XI IX VIII X V II和I APTT主要用于发现先天或后天获得的这些因子缺乏 和肝素疗法的检测 APTT比其他的基础筛选试验 如复钙时间 部分凝血活酶时间 具有更高的灵敏度和更好的重复性 APTT延 长可见下列情况 先天缺乏 如果凝血酶原时间 PT 正常 可能是下列因子缺乏因子VIII 因子IX 因子 XI 因子XII 如果这些因子都是正常的 则应考虑下列物质缺乏 Fletcher因子 高分子量激肽 获得性缺 乏和异常情况 肝脏疾病 消耗性凝血病 循环中的抗凝物 抗凝血酶原酶或因子抑制物 使用肝素或口服 抗凝药物 纤维蛋白原 FIB 是一种分子量为道尔顿的糖蛋白 正常血浆中的浓度范围是2 4g L 200 400mg dl 它在肝脏 1 7 5g 天 和巨核细胞内合成 纤维蛋白原合成手 链上遗传基因密码控制 这些基因存在多态 性 血浆纤维蛋白原水平存在个体差异 半衰期是3 5天 纤维蛋白原由6条链组成 2Aa 2B 和2 凝血酶 因子IIa 将纤维蛋白原分子裂解成两个纤维蛋白肽A片段 从Aa链 和两个纤维蛋白肽B片段 从B 链 纤维蛋白单体由此产生 然后聚合 最后被因子XIIIa稳定 首先是两个纤维蛋白单体由两条 链稳定 这个稳定源于D 二聚体 降解产物是特定的纤维蛋白碎片 纤维蛋 白原能被纤维蛋白溶酶降解 纤维蛋白原水平增高见于糖尿病 炎症应激反应 肥胖症 纤维蛋白原水平降低 见于DIC 纤维蛋白溶解 不仅如此 纤维蛋白原也被用于心血管意外的致病性研究 凝血酶时间 TT 是一个快速而简易地评价纤维蛋白形成的实验 因子XIII缺乏时 TT保持正常 当 PT APTT延长 不能解释结果时 在进行其他实验之前 应先测定TT 在做其他确诊试验 TT延长指示 异常的纤维蛋白原 严重的纤维蛋白原不足或先天性纤维蛋白原血症 获得性纤维蛋白原血症 DIC 纤维 蛋白溶解 肝脏疾病 存在抗凝血酶 体内含有肝素 水蛭素药物 异常FDP 骨髓瘤 风湿性关节炎 2 凝血检验质控物在凝血检验中的作用 凝血酶原时间 PT 部分凝血活酶时间测定 APTT 纤维蛋白原含量测定 FIB 凝血活酶时间测定 TT 成为血栓与止血实验室检查的常规试验 对术前肝病及心内 血液 消化等系统疾病均有极为重要的 作用 然而由于凝血常规的检测易受某些因素的干扰 如试剂的来源及批号 仪器性能 测定环境等均可影响 检验结果 为保证试验结果的准确性 质量控制是做好每项试验的主要措施之一 其中合格的质控物是质量控 制的关键之一 1 3 3 国内外目前凝血质控物的使用状况 目前国外进口的凝血质控物主要为冻干血浆 其制备方法选择健康人群的数量较多 最大限度地弥补了个 体误差 因而这种冻干血浆更能代表正常人群 主要组成成分有试剂1 正常值质控 冻干正常人柠檬酸盐抗 凝血浆 试剂2 异常值质控 冻干异常人柠檬酸盐抗凝血浆 由于目前我国尚无自己研制开发的血凝质控物 各级医院大多使用的是国外进口血凝仪 其配套的凝血酶原时间 PT 活化部分凝血活酶时间 APTT 纤维 蛋白原 FIB 凝血活酶时间测定 TT 试验的质控物因为依赖进口 其价格较贵 增加了实验室的成本 导致了一些实验室不能坚持每一天做室内质控 全国绝大部分省临检中心开展的室间质评工作 检测结果的可 比性也不尽人意 为了提高PT APTT FIB TT检测结果的准确性和实验室间结果的可比性 开发研制血凝 质控物是一项非常紧迫的重要任务 4 自制凝血质控物的意义 目前国外进口的凝血质控物为冻干血浆 但冻干质控物的精确性受冻干前后加样准确性影响 冻干后其产品 水分含量变化 以及血浆中某些成分由于冻干引起混浊等因素的影响 价格昂贵 每年质控物的成本在 3 万 左右 如能自制质控物就能极大地降低了实验室成本 减轻了病人的负担 自制正常混合血浆为多份血浆混合在一起 其制备方法与冻干血浆相似 即选择多份健康人群的混合血浆 最大限度地弥补了个体误差 因而这种混合血浆更能代表正常人群 5 自制凝血质控物是否成功主要从质控的效果性和稳定性两方面进行评估 国内学者孔立新等在 2006 年曾 自制凝血检验室内质控物与美国的 Biopool 公司产品的定值质控血浆具有相似的效果 当血凝仪报告结果发生 失控时能及时反映出来 稳定期半年 法国 STAGO 公司的全自动血凝仪 STA COMPACT 是目前国际上最为先进的全自动血凝仪 能很好 的抗溶血 脂血 黄疸 乳糜 而受各大医院的青睐 然而其配套的室内质控物却极其昂贵 注 Stago 公司 2009 1 12 月的凝血质控物报价是 24 1ml 的室内质控物为 2881 元 一年下来就要花费 21607 5 元 如能自制 质控物就能极大地降低了实验室成本 减轻了病人的负担 根据NCCLS制订的 用患者标本进行方法比对和偏差评估 指南的要求 对自配质控品的主要性能指标进行 评价 内容包括批内及日间精密度 稳定性观察及与进口质控物的相关性比较 1 5 统计学方法采用 Excel 软件作质控图和 SPSS 11 5 参考文献 黄文芳 刘华 钟亚玲血凝质控物的研制国外医学临床生物化学与检验学分册 20O4 年 11 月第 z5 卷第 6 期 Sect Clinl oehem LabMedF ignMedSd November 2OO4 vbl 25 No 6 485 从玉隆 血栓与止血试验诊断的现状及发展 J 中华检验医学杂志 2000 24 1 5 7 稳定剂 4 郑文亮 患者血浆 内对照 用于凝血酶原时间的监测 J 郑州大学学报 医学版 2004 39 4 688 稳定剂 Westgard JO Burnett RW Precision requirements for cost efective operation of analytical processes J Clin chem 1990 36 9 l629 1632 3 5 自制凝血质控物的前期工作 自制凝血质控物是否成功主要从质控的效果性和稳定性两方面进行评估 4 6 根据 NCCLS 7 制订的 用 患者标本进行方法比对和偏差评估 指南的要求 对自配质控品的主要性能指标进行评价 内容包括批内及日 间精密度 稳定性观察及与进口质控物的相关性比较 国内学者孔立新 8 等在 2006 年曾自制凝血检验室内 质控物与美国的 Biopool 公司产品的定值质控血浆具有相似的效果 当血凝仪报告结果发生失控时能及时反映 出来 稳定期半年 法国 STAGO 公司的全自动血凝仪 STA COMPACT 是目前国际上较为先进的全自动 血凝仪 能很好的抗溶血 脂血 黄疸 乳糜 而受各大医院的青睐 然而其配套的室内质控物却极其昂贵 且封闭 参考文献 1 朱忠勇 凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间测定标准化 J 中华医学检验杂志 1998 21 5 2 郑文亮 患者血浆 内对照 用于凝血酶原时间的监测 J 郑州大学学报 医学版 2004 39 4 688 3 王小林 徐融 对全自动凝血分析仪检测结果的质量控制 J 微循环学杂志 2005 15 4 65 67 4 毛和香 李良琼 PT TT APTT 自制质控血浆稳定性的探讨 J 现代检验医学杂志 2005 20 5 84 5 刘芳 刘华 钟亚玲血凝质控物的研制国外医学临床生物化学与检验学分册 20O4 25 6 485 6 从玉隆 血栓与止血试验诊断的现状及发展 J 中华检验医学杂志 2000 24 1 5 7 7 NCCLS Statistical Quality Control for Quantytative Measurements Principles and Definions Apporoved Guideline Second Edition J NCCLS Document C24 A2 ISBN 1 56238 371 X 1999 8 孔立新 张道杰 凝血检验室内质控血浆的制备与评估 J 临床检验杂志 2006 24 2 4 三 研究方案三 研究方案 1 研究目标 研究内容和拟解决的关键问题 研究目标 通过对自制凝血质控物的制备 比较其与法国STAGO公司的定值凝血质控物是否有相似的效果性 和稳定性 为取代昂贵的进口试剂提供实验依据 从实用出发 经过不断探索和比较分析 最终研究配制出 了配方合理 成本低廉 效果好 结果稳定的液体凝血质控物 研究内容 1自制凝血质控血浆标本的选择 所有的血浆均经过 FDA 认可的检测方法检测 HIV 抗体 HCV 抗体和 HBV 表面抗原 且结果都为阴性 使用者相当的小心 完全依照安全防范规程进行操作 2 自制凝血质控血浆的制备 3 自制凝血质控血浆的定值 4 自制凝血质控血浆的分类与保存 5 自制凝血质控血浆的使用方法 6 自制凝血质控血浆的效果 7 自制凝血质控血浆的稳定性 推荐使用缓冲抗凝剂并一70 保存 可以增加质控物的稳定性 8 自制凝血质控血浆的安全性的建立 9 自制凝血质控物效果性与稳定性与进口试剂相比较方法的确定 10 自制凝血质控物与进口试剂的价格的比较 拟解决的关键问题 自制凝血质控物效果性和稳定性 2 拟采取的研究方法及可行性分析 2 2 1 稳定剂的筛选 将稳定剂分别加入新鲜血浆中 经冷冻干燥制备成血凝质控物 置于 20 经12 个月观察各血凝质控物的稳定性 2 2 2质控物制备及保存 50例正常体检静脉血与抗凝剂按9 1比例混匀 分离血浆 制备时加入小牛血浆 稳 定剂叠化钠等 调整至预定的浓度含量水平 按1Y所需量 将血浆以每份0 5 ml的量分装塑料带盖离心管内 将分装的新鲜血浆迅速置于一20 冰冻保存 2 2 3 定值检测 分别取10支质控血浆 测定凝血四项 每份重复测定2次 每项共20个值 计算四项均值 x 标准差 s 变异系数 CV 值 确定质控范围 2SD 同时将法国stago凝血质控物 各取5瓶 每瓶做4 次凝血四项测定 共20个数据 同上计算均值及确定质控范围 2 2 4 精密度和稳定性观察 每日从一20 冰箱各取1支和日常标本同时测定PT APTT Fib TT连续测定 四周 每月统计 计算各项目自制新鲜混合血浆均值 x 标准差 s 和变异系数 CV 值 作为当月质控靶值 其余置一20 冰箱速冻备用 每天取一份正常速冻混合血浆迅速复溶 检测两次取均值 记录之 每月统计计 算出均值 x 标准羞 s 和 CV值 并作质控图 第2个月依此类推 连续观察12个月 并将新鲜混合血浆4 项检测结果与速冻混合血浆检测结果进行比较 5 2 2 5仪器与试剂 STA COMPACT型全自动血凝分析仪出产与法国STAGO公司 测定所用试剂和质控物均 为其配套试剂 3 器材 一次性真空定量采血器 包括采血针和采血管 109 mmol L 枸橼酸钠抗凝剂 0 2mL 定量采血1 8 mL 2 2 6操作方法 所有试剂现配现用 严格按照仪器操作规程及试剂盒的操作方法 1 每次工作前采用以下2 种正常质控物同时做PT APTT Fib TT室内质控 连续测定40 天 d 记录各组质控结果 质控物A 即STAGO公司PT APTT Fib TT 正常质控物 冻干品 每次工作前取一瓶按说明书要求复溶 质控 物B即自制正常混合血浆 制备方法 取健康人血浆50份混匀 男女各半 龄20 60岁 当日平均做10次PT APTT Fib TT 得出正常混合血浆均值 x 将余下部分按每管0 5 ml 分装在带盖塑料管中 置于一18 一20 冰箱冷冻室中保存 2 每天从冰箱冷冻室取出正常混合血浆1管置于37 水浴中溶化后 随当日凝血象 标本检测 分别得出PT APTT Fib TT值 并计算10 20 30 40 d的均值 再分别与正常混合血浆均值作比 较 每天PT APTT Fib TT 连续观察12个月 2 2 7 统计学方法 使用 SPSS11 0 软件进行统计学处理 行方差分析及回归分析 可行性分析 我院是湖南中医药大学附属第一医院 三级甲等医院 有较好的临床和科研能力 血液室自 1998 年成立起来 一有承担着临床 科研等凝血常规检查 一名副主任技师 一名检验师专门负责血凝仪 日常操作维护 拥有目前世界上较为先进的法国 Stago 公司出产的 STA Compact 全自动血凝仪 完全避免溶血 黄疸 浑浊 乳糜等影响 极大地减少了客观因素的干扰 3 本项目的创新之处 目前自制凝血质控物取得了一定成效 有多篇论文报道 但意见不一 由于各个实验室仪器 试剂 人员等 各因素的影响 自制凝血质控物效果不一 法国 STAGO 公司出产的 STA Compact 血凝仪目前是世界上较为 先进的全自动血凝仪 因能较好地抗黄疸 脂血 溶血 乳糜 尽量避免了客观因素的干扰 然而其配套的 凝血质控物长久以来处于封闭式状态 自制凝血质控物完全取代法国公司的配套质控物尚无报道 4 预期研究进展 2011 1 2012 12 2011 1 2011 6 正常人血浆的制备 定值 分装 2011 7 2011 12 正常人血浆 PT APTT FIB TT 的检测 制月表 2012 1 2012 6 正常人血浆 PT APTT FIB TT 的检测 制月表 2012 7 2012 11 对相对资料 进行整理 统计 分析 2012 年 12 月 发表论文 5 预期成果 通过对自制凝血质控物的制备 判断其与法国 STAGO 公司的定值凝血质控物有相似的效果性和稳定性 为 取代昂贵的进口试剂提供实验依据 从实用出发 经过不断探索和比较分析 最终研究配制出了配方合理 成本低廉 效果好 结果稳定的液体凝血质控物 发表论文 提交结题报告 6 技术路线图 凝血质控物的制备 定值分装 准确性测定精密度测定 资料汇总 效果性观察 分别 7 四 研究基础四 研究基础 与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩及目前承担项目的情况 项目负责人和其它成员情况 分开填写并且项目 成果及奖励等须注明承担或完成人姓名等相关信息 申请者自 1990 年参加工作 一直从事凝血 血液学检查 积累凝血项目的检查达二十多万人次 熟知半 自动 全自动血凝仪的日常维护 年年参加省内卫生部室间质量评比 系湖南省临床研究检验专业委员会委员 参加了省厅课题 1 项 排名第二 与专