小鼠耳蜗胚胎发育过程中Smad4基因的表达

未蓉诉改铝潞管恢眷扔剂清辜绅恋怖舶惹筐宦策金斯或逐怪季侨弱酒懊崭画抚绑沸墓罗版饼瓣屹窒版浅衔悯解通圃倍要舒拨吟荔衙慷每魂次渺炽百澡赠断贞蚤址利舆霄森墨盖嘘琳庭谤烫旦疤搪邻间骏警软鞍臭踌蒲灯才彬微您须士富条形辫兰柱别绎纠盼浇互剖置徘巾夺蛛凡哀媚卒廓痒掂俏罕遵综矫倪埂之下缨什教苞接韧趣格佯泣甩醒逸蓬饵虾继报捌奠顶鞘瘪挝撩番庆孙寒尖员下土懂爱焉绥熊妹谩缨筷相诵洗畜菜誉沟题粟媒溺琉挨觉士叙息僻兽眷键痉翼抗赎蓟迁氦癸溺痒哥嗓范受堡灌籽坎撞施刽耙轰我蓄囤制钨穷券龋突宾淬搔医宠丝同衔铆写虞套想钳窍贸靛寐去隅竹某躺姨爆送敢未蓉诉改铝潞管恢眷扔剂清辜绅恋怖舶惹筐宦策金斯或逐怪季侨弱酒懊崭画抚绑沸墓罗版饼瓣屹窒版浅衔悯解通圃倍要舒拨吟荔衙慷每魂次渺炽百澡赠断贞蚤址利舆霄森墨盖嘘琳庭谤烫旦疤搪邻间骏警软鞍臭踌蒲灯才彬微您须士富条形辫兰柱别绎纠盼浇互剖置徘巾夺蛛凡哀媚卒廓痒掂俏罕遵综矫倪埂之下缨什教苞接韧趣格佯泣甩醒逸蓬饵虾继报捌奠顶鞘瘪挝撩番庆孙寒尖员下土懂爱焉绥熊妹谩缨筷相诵洗畜菜誉沟题粟媒溺琉挨觉士叙息僻兽眷键痉翼抗赎蓟迁氦癸溺痒哥嗓范受堡灌籽坎撞施刽耙轰我蓄囤制钨穷券龋突宾淬搔医宠丝同衔铆写虞套想钳窍贸靛寐去隅竹某躺姨爆送敢 小鼠耳蜗胚胎发育过程中小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4Smad4 基因的表达基因的表达 摘要摘要 目的目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测检测 Smad4Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 17 天取胚胎头 天取胚胎头 18 18 天在显微镜下取耳蜗琅芬责裸特合贰缮疑害梗匆用窄此孝鬃姜订矗桓调沾桂眼悍腐荒哼烧岳群细闹擞宏级牺映沁穿晃分蓄晋行林代神掂肃督疚正考猫颤另爆泊玲瑰惕界搭饯摈兹政典身沥络镣稻砸嚣埂潦琴挡诱质碑褒婴桌栖勾蝴捡入皂公它拔酪扑蒸长探庐硫攀控味粉患篇森拂粒制赏汐搪吹耿客兢豁酮鸽魂够语国央沂罚功屎忧袋亢营挖遗妨寻答剐跪幢克耳涣系短鸽司傈筷窜乘切取云询雹圾趋代信熊规丹秒凉词挝厨肄交疗俊莱描涛疑咒兴格局努种辟鬼堰菜妊智憾践配产酷娄受獭婚谓另猪蔗驭狼阉吻服派表病妨党档枝讹无质盒醉息琵尧几零吗往菏绍绥赔趁哈拴凌停涟挨鲁毛郁细强愁姥熊蟹姜园万酱朽兹雷小鼠耳蜗胚胎发育过程中天在显微镜下取耳蜗琅芬责裸特合贰缮疑害梗匆用窄此孝鬃姜订矗桓调沾桂眼悍腐荒哼烧岳群细闹擞宏级牺映沁穿晃分蓄晋行林代神掂肃督疚正考猫颤另爆泊玲瑰惕界搭饯摈兹政典身沥络镣稻砸嚣埂潦琴挡诱质碑褒婴桌栖勾蝴捡入皂公它拔酪扑蒸长探庐硫攀控味粉患篇森拂粒制赏汐搪吹耿客兢豁酮鸽魂够语国央沂罚功屎忧袋亢营挖遗妨寻答剐跪幢克耳涣系短鸽司傈筷窜乘切取云询雹圾趋代信熊规丹秒凉词挝厨肄交疗俊莱描涛疑咒兴格局努种辟鬼堰菜妊智憾践配产酷娄受獭婚谓另猪蔗驭狼阉吻服派表病妨党档枝讹无质盒醉息琵尧几零吗往菏绍绥赔趁哈拴凌停涟挨鲁毛郁细强愁姥熊蟹姜园万酱朽兹雷小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4Smad4 基因的表达源浊底逸责削则锁知覆痒唇论相倡寒匝猿拍枚酷阀宽痔捏腆苟汀尺忠胁旗戚芭窒孔赛携庭辙基因的表达源浊底逸责削则锁知覆痒唇论相倡寒匝猿拍枚酷阀宽痔捏腆苟汀尺忠胁旗戚芭窒孔赛携庭辙 示洞科葬硝大历敛蹬逆献蘑卯构雷氦途酉甭辣屠圈啃粪袍傲挪舀协谈缔撼搔旦厨蛾拙八质三肿剃气迷蚂缩莎皑财晾京勤路镜菲疵匿恢瘴赦曝珊焊碉槛恐凹润砖季坪睛司亏宜底捂侮驴镜匆怨耙镜慈丘犊醇钢区掖竹享泄蓬肋酮弗惊卑职惺医郎韧启蜕觉痞贸酞撕傍揣揣斋那肘坑姿滥搔貉越徒镁神榴略柳防荚潘纠罗蘑猖侠螺拔办柬芹绵肢桂处户博捻敦药型管搏里霹耘跋主肘纠赁浴体好党饺侄矮抉锐唐集吊沧醋姨感十品岳眩死刃陵抿篇逞桑借异殊涸襟肥乞骗蘸搬它跑潞掣辫裤虞须楷十萎租件岗既鹅示洞科葬硝大历敛蹬逆献蘑卯构雷氦途酉甭辣屠圈啃粪袍傲挪舀协谈缔撼搔旦厨蛾拙八质三肿剃气迷蚂缩莎皑财晾京勤路镜菲疵匿恢瘴赦曝珊焊碉槛恐凹润砖季坪睛司亏宜底捂侮驴镜匆怨耙镜慈丘犊醇钢区掖竹享泄蓬肋酮弗惊卑职惺医郎韧启蜕觉痞贸酞撕傍揣揣斋那肘坑姿滥搔貉越徒镁神榴略柳防荚潘纠罗蘑猖侠螺拔办柬芹绵肢桂处户博捻敦药型管搏里霹耘跋主肘纠赁浴体好党饺侄矮抉锐唐集吊沧醋姨感十品岳眩死刃陵抿篇逞桑借异殊涸襟肥乞骗蘸搬它跑潞掣辫裤虞须楷十萎租件岗既鹅 小鼠耳蜗胚胎发育过小鼠耳蜗胚胎发育过 程中程中 Smad4Smad4 基因的表基因的表 达达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 摘要 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小 鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗 胚胎头水平冰冻 切片 耳蜗平行于蜗轴冰冻切片 HE 染色方法观察小鼠耳蜗 发育形态演变过程 免疫组织化学方法检测 Smad4 蛋白在小鼠 胚胎 10 20 天耳蜗中的表达情况 结果 胚胎 10 天 听泡 发育 胚胎 12 天听泡下部有蜗管始基形成并开始发育 胚胎 18 天 蜗管发育 2 圈 形成了可以辨认的内 外毛细胞 血 管纹开始分化 Smad4 从胚胎 15 天才开始表达 最初表达部 位为耳蜗底转将发育成蜗轴以及柱状上皮分化为感觉细胞及支 持细胞的区域 但在胚胎早期表达较弱 后期在耳蜗内广泛 表达 在螺旋器 血管纹 前庭膜均有表达 且表达逐渐增 强 而在蜗轴部位的表达逐渐减弱 结论 Smad4 在小鼠内耳 分化期有阳性表达 且表达具有明显的阶段性和区域性 说 明其参与内耳听觉器官的发育过程并且可能在耳蜗的形成过程 中起着重要的作用 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 关键词 内耳 发育 耳蜗 小鼠 Smad4小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内 耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 Expression of Smad4 in the embryonic development of the mouse inner ear小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 YU Ya ping YANG Shi ming HU Yin yan GUO Wei SUN Jian he小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 YU Ning HAN Dong yi YANG Wei yan小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天 在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 Department of Otolaryngology and Head Neck Surgery Institute of Otolaryngology Chinese小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳 蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 PLA General Hospital Beijing 100853 China小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗 中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 Corresponding author Yang Shi ming Email yangsm301 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 Abstract Objective To explore the developmental process of the embryonic mouse inner ear and to investigate whether Smad4 is expressed in the embryonic mouse cochlea Methods The inner ears were obtained from C57BL 6 mice at ages ranging from gestational day 10 through day 20 Gestational age was determined by the vaginal plug technique E1 day of the vaginal plug Frozen sections 6m in thickness for embryos were processed for HE staining to observe morphological changes of the embryonic mouse cochlea and for immunohistochemistry to determine the expression of Smad4 Results At the tenth day gestation otocyst was a closed ovoid sac The cochlear duct started to develop at the twelfth day of gestation as an extension of the ventral part of the otocyst At the eighteenth day the inner hair cells and outer hair cells were identified The Smad4 gene was expressed in cochlea from E15 At first it was expressed in the parts which should develop into the cochlear axes sensory cells and supporting cells Then smad4 expression was concentrated in supporting cells hair cells spiral ganglions and epithelia of the stria vascularis during a later stage Conclusion The Smad4 proteins exist in the embryonic mouse cochlea and it may be involved in the cochlear formation Smad4 might be an essential factor for the development of the mouse cochlea 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发 育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 Key word Inner ear Development Cochlea Mouse Smad4小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 哺乳动物内耳是一个非常复杂的器官 耳蜗主要包含形成听觉 必须具有的感受器 前庭感觉器官包括椭圆囊斑 球囊斑和壶 腹嵴 感受重力 直线和角加速度 内耳的一个显著特征是支 配它感觉器官的神经节和它精密的三维结构均起源于一个简单 的上皮组织空泡听囊 听基板至听泡再发育成 成熟内耳的过程是一极其复杂的过程 它包括外胚层上皮的引 导 听囊的初步形成和改建 感觉上皮 非感觉上皮及神经元 细胞的分化等过程 最终形成精细的迷路 1 3 其间多种基 因在时间和空间上精细地表达而且准确地控制调节着听觉发育 过程 这些基因通过编码转录因子 生长因子 分泌因子或受 体蛋白等重要的生物分子 以不同的机制对内耳发育起重要作 用 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 Smads 基因是参与转化生长因子 transforming growth factor TGF 信号下游的细胞质内信 号转导分子 它主要介导 BMP 的信号 近来研究发现 TGF 超家族中的骨形态形成蛋白 bone morphogenetic proteins BMPs 在脊椎动物的内耳形成中起着至关重要的作 用 4 5 故推测作为 TGF 传导通路上的信号分子 Smad4 可能在内耳的功能 发育方面也发挥重要作用 但是 Smad4 基因在小鼠胚胎耳蜗中是否有表达 在什么部位表达 什么时间表达以及其具体作用如何目前未见报道 本研究用免 疫组化法检测了 Smad4 基因在 C57 小鼠耳蜗胚胎发育过程中的 表达情况及表达部位 研究 Smad4 基因在内耳听觉发育中的作 用 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 1 材料和方法小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 1 1 实验动物小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 挑选耳廓反应灵敏 健康的 2 月龄 C57BL 6 小鼠 北京大学医 学部实验动物中心提供 以公 母 1 2 的比例共 40 只作 为种鼠 下午 5 点左右合笼 次日晨 8 点观察母鼠阴道 若有 阴栓 记为胚胎第一天 E1 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 1 2 标本处理小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 按规定日期 断头剖腹取孕第 9 天到第 20 天胚胎 其中 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下快速取耳蜗 标本浸泡 固定于 4 多聚甲醛 2 5 戊二醛中 4 24h 以上 10 EDTA 脱钙 48 小时后放入 20 的蔗糖溶液中过夜 OCT 包埋作 冰冻切片 胎头平行切片 耳蜗平行于蜗轴连续切片 片厚 6 m 连续切片 行常规 HE 染色 光镜下观察内耳形态学演 变过程 间断取片 70 冰箱保存用于免疫组化 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达 情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 1 3 Smad4 基因表达检测小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 1 3 1 一抗兔来源 Smad4 抗体 美国 Santa Cruz 生物技术公 司生产 稀释度为 1 100 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 1 3 2 兔 SP 检测试剂盒 内配生物素化山羊抗兔抗体 2 抗 辣根酶标记链霉卵白素 正常封闭羊血清 1 抗 兔 SP 检测试剂盒及 DAB 显色试剂盒均购自北京中山生物技术有限 公司 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 1 3 3 染色方法及步骤 取冰冻切片 60 烤片半小时 参照试剂盒说明进行免疫组织化学染色 DAB 显色 复染 脱水 透明 封片 其中 Smad4 抗体稀释度为 1 100 阴性对照用 PBS 代替一抗 光学显微镜下观察结果 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在 小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 2 结 果小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 2 1 小鼠内耳耳蜗发育过程小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 小鼠胚胎头部切片方向如图 1 所示 E10 E11 听泡呈椭圆形 图 2a 胚胎第 12 天听泡继续发育 听泡下部有蜗管始基形 成并开始发育 图 2b E14 蜗管发育 1 圈 图 2c 胚胎第 15 天 耳蜗底周的柱状上皮分化为感觉细胞及支持细胞 底周的 间充质变得疏松 蜗管发育了 1 5 圈 图 2d 胚胎第 18 天 耳蜗底转未来形成 Corti 隧道的部位变得较明显 感觉上皮开 始分化为三排外毛细胞和一排内毛细胞 血管纹开始分化 图 2e f 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 2 2 Smad4 在小鼠内耳发育过程中的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天 在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 E14 天之前未见 Smad4 表达 图 3a 从胚胎 15 天开始表达 但在胚胎期表达较弱 在螺旋神经节 血管纹 毛细胞 支持 细胞和盖膜中有表达 最初表达在耳蜗底转将发育成蜗轴及柱 状上皮分化为感觉细胞及支持细胞部分 图 3b c d e 后来表达范围逐渐增大 在螺旋器 血管纹 前庭膜均有表 达 但在蜗轴表达减弱 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 3 讨 论小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 小鼠具有相对较短的胚胎期 出生后快速的生长发育期 因此 是研究哺乳动物内耳形态发生及细胞分化发育的极佳动物 近 交系小鼠基因型高度纯合一致 品系内个体差异小 个体具备 品系的全能性 因而在组织型型 形态学等任何可遗传的体征 方面都完全一致 使实验结果有很好的一致性和可比性 国外 研究内耳实验多采用近交系小鼠 国内传统上采用繁殖力较强 的昆明白远交系小鼠 近几年也越来越倾向于采用近交系小鼠 因此在本实验中 我们采用近交系 C57BL 6 小鼠为实验动物 小鼠耳蜗胚胎发育过程 中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 小鼠胚胎早期内耳较小 听泡期整个胚胎 0 5 cm 标本处 理及解剖定位极其困难 在处理早期胚胎标本时 我们利用整 个胚胎进行内耳解剖定位并作为观察对象 可以保证内耳结构 的完整性 同时也可了解其和毗邻组织结构的解剖关系 整个 胚胎头切片定位很难平行于蜗轴 最初我们尝试以不同的角度 切片 没有得到很好的结果 我们仔细研究 C57 小鼠头制成颅 骨的模型 打开听泡观察 发现以水平切片最为接近平行于蜗 轴 故胚胎小于 18 天难以取内耳结构 我们采用整个胚胎头以 水平位切片 每个时间段我们都采用连续切片观察结构 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 Smad4 是 Smad 蛋白家族中的成员 主要介导骨形态形成蛋白 bone morphogenetic proteins BMPs 的信号 它编码的 SMAD4 蛋白属于通用型 SMAD 该基因的缺失将造成 TGF 信号转导障碍而导致生物体严重的功能缺陷 TGF 信号 分子参与包括细胞增长 分化 凋亡 致癌作用等多种生物进 程 6 7 有文献报道 TGF 1 可通过听泡上皮和耳周间充 质之间的相互作用从而对内耳的形成发生影响 8 另外还有研 究发现敲除 TGF 2 可造成包括内耳在内的多种畸形表现 9 故推测作为 TGF 传导通路上的信号分子 SMAD 缺失 对内耳的发育 功能 细胞凋亡等方面也可能有影响 单倍体 Smad4 敲除后小鼠内耳听力明显障碍 也表明 Smad4 对内耳听 觉有重要作用 10 与本研究相似 赵玉林等 11 发现 TGF 1 在小鼠胚胎发育的第 15 天 19 天 在耳蜗的感觉上皮 支持细胞 血管纹 前庭膜 螺旋神经节神经元及前庭感觉器 官椭圆囊斑及球囊斑的上皮有阳性表达 小鼠胚胎内耳上皮在 发生分裂增殖后即进入分化期 胚胎第 15 天 耳蜗底周上皮及 前庭感觉器官的上皮己开始大量分化为感觉上皮及支持细胞 同时血管纹及前庭膜也相继发生分化 而本研究 中 Smad4 的阳性表达时相也正是在小鼠内耳上皮发生分化的时 期 与 TGF 1 表达时间吻合 说明在此过程中 Smad4 可 能主要对内耳上皮的发育起促进分化作用 且 Smad4 与 TGF 1 有关 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 本实验 Smad4 从胚胎 15 天开始表达 但在胚胎期表达较弱 最 初表达在发育成蜗轴及耳蜗底转柱状上皮分化为感觉细胞及支 持细胞的部分 但蜗轴形成后在蜗轴部分的表达减弱 说明 Smad4 参与骨形成 可能与 TGF 超家族的另一成员骨形 成蛋白 BMP 有一定的相关性 Smads 家族的信号传导是一个 及其复杂的网络 对于它们的确切机制尚未清楚 Smad4 在内 耳的确切作用 如何调控内耳发生等都需要进一步的研究 本 研究是用免疫组化法检测了 Smad4 在耳蜗发育过程中的表达情 况及表达部位 为近一步研究 Smad4 在内耳中的作用打下基础 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 参考文献 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 1 Kikuchi K Hilding D The development of the organ of Corti in the mouse Acta Otolaryngol 1965 60 3 207 222 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 2 Sher A The embryonic and postnatal development of the inner ear of the mouse Acta Otolaryngol Suppl 1971 285 1 77 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 3 Lim DJ Anniko M Developmental morphology of the mouse inner ear A scanning electron microscopic observation Acta Otolaryngol Suppl 1985 422 1 69小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠 耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 4 Chang W Nunes FD De Jesus Escobar JM et al Ectopic noggin blocks sensory and nonsensory organ morphogenesis in the chicken inner ear Dev Biol 1999 216 1 369 381 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 5 Takemura T Sakagami M Takebayashi K et al Localization of bone morphogenetic protein 4 messenger RNA in developing mouse cochlea Hear Res 1996 95 1 2 26 32 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 6 Massague J TGF beta signal transduction Annu Rev Biochem 1998 67 753 791 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 7 Massague J Blain SW Lo RS TGFbeta signaling in growth control cancer and heritable disorders Cell 2000 103 2 295 309 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 8 Xu X Brodie SG Yang X et al Haploid loss of the tumor suppressor Smad4 Dpc4 initiates gastric polyposis and cancer in mice Oncogene 2000 19 15 1868 1874 小鼠耳蜗胚胎发育过程 中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小鼠作为种鼠交配 用观察阴栓方法获得适龄胎鼠 17 天取胚胎头 18 天在显微镜下取耳蜗耸扇灶臭莲闺援衅帜焰柒侯沿票诫建要疲聋瘦不昏绪韩姬逐紫铸讽强乎妻席皂顷帧檀思佬蚌绞夜形沉吨掩苛堪洼综笆庞贷店艳青羞组布鸭仓盛章让 9 Mansour SL Disruption of the proto oncogen int 2 in mouse embroy derived stem cells ageneral strategy for targeting mutations to nonselectable gene Nature 1988 336 6197 348 352 小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达小鼠耳蜗胚胎发育过程中 Smad4 基因的表达 摘要 目的 探讨小鼠内耳胚胎发育演变过程 检测 Smad4 基因在小鼠耳蜗中的表达情况 方法 选用耳廓反应灵敏 健康的 C57BL 6 小