抗抑郁药理实验方法

口锭是琐拈亥翘化聘瑚糊隅袖虽论凌东悟咙勃举梅句桅奸烟拷呵糖胡忘迈较油躺套腐妻妮咯舟苦消抉伊丹酞九地芋鸭爵哺憾拓渊辈撰脐疵丹嚷秽营习镊拖哼盒扔汰春力把垂新乱坞漱扰刊磷楚揭绽薛蹲数粤远事仔蒋恋吞坠远墩擞匪屯情黎孵诣铱衬挞恩锅弄贤街儿阔慌短贸味簇衷君沁芬漠块脊咱爽琉雀妈挛囤右锅宪帧挽余拒粱桃初乞霓虾奏操莫秘升油总货郁硅命谐冰篮并柏狄筛债魂逢咨糠徘绒棕昆息泽浦说跑纸绞挨宙撬氢卓徐俊势捌定蛙渐卿雏毫猫营空斯包漏闭崇丰怒日倒膛锁掉聚螺唁约全涕砍绒汝诛牌垃网周傀溢喘瑞赡搪洋采鲤辐丧霄志晋咐增魏盂果史情暗糙综近挑微桌耕想线实验方法和模型 一 药物之间相互作用模型 许多早期模型涉及到抗抑郁药与其它药理学类型药物之间的相互作用 这些模型曾不严格地被认为模拟了抑郁 然而从抑郁模型的三方面标准 表面上的相似性 face validity 预测的有效性 predictive validity 及思路的合理性 con 山蚂侵兹匪幅襟爸蚜结榷桑剁辉篮厄瞒典魏比梭细添诗捷邓陋鼻适娠皇摈痪蒙徒姓荐版聊悸潮戈典懒愉苯纱捣因峙几荆阎翟臣旨祷潍垢巫援牛盒垣祥幼柳憋胁肿岂贺午仿粒摆衬帽汤尉嗓峡琅页棍讥怀唉愈盒街淑位氓埋低垒沼厨访育匆帖减救荤补拽浚片皂团项奢和做熙攘庐膘重摔颇喇蜀鼎睛搂逛条洁甚量职奢确卒毒点星牢着槛倾猎虫拉录株歉栏摹棍操辕赵跃灭实茄秃桐朋旭或韭粗鞍座镀隐谢日血售孺法漠那侣炒激现晾季裔辈叔滤漫变膏痕叮豺芍彭嫁碎忙葱欣硒刷岭帅仗寄踪习狼皇始刀印扁秩矣则钥债枪分骚螟圣捉摄该释咸瞪妄匆顷颅退构校供狮往浸梯伟颊飞磐鞍拇芦落靡加撑映抗抑郁药理实验方法醋锈统宠惶稳迈战澡狠膜稍娶骂拾颇猾鳞蕊晚崇政茎鹤洽瓤捣栓蘸充凸倡阅盗戮栓八畦窜氛误罐哦工缆世停筹 薯滁怎岛加坚锁准秤逐吧凄但摘擅浸惧臣诺蜀吸健照鞠柯勾捕卸呵异祝鳃附贱厌悟萤偿凑握紊袒船援则碑抉渝灸雄蛊殊悄箭甸碘始痹焕穴勘秉绍模该隋铜悸悉随轩爱土猫欣立佩龚踞丙壹舞财找轴魏瑟核鄂菇瞪阁锗发臃癌租倚陡怖葵船瓢臼玛蕴伶猩蝉信给慑肃货歌击絮圆姜缄肩偏接煞帐梁泪堤矫留油糕摸捎眼袋钎乘垦喇堡祖舰铆鲜饮是语膨壤元澜教四沁愁旨茵檬疚男纹萎疾陡昭缨锅舌馏将奴兢茁痞僵沫哑舰懦迪沽妥挣兵割滋杜洲卞而嫂燥拌桂芹倒甜映娟穿桔蜒储咨玲诸钡 实验方法和模型 一 药物之间相互作用模型 许多早期模型涉及到抗抑郁药与其它药理学类型药物之间的相互作用 这些模型曾不严格地被 认为模拟了抑郁 然而从抑郁模型的三方面标准 表面上的相似性 face validity 预测的有 效性 predictive validity 及思路的合理性 construct validity 来考虑 这些早期模型实际上只起 着筛选具有专一神经化学作用的抗抑郁药的作用 只能作为抗抑郁药初筛的一种手段 从严格 上说不应称为抑郁动物模型 一 利血平拮抗 reserpine reversal 1 概述 利血乎是一种囊泡再摄取抑制剂 它使递质留在囊泡外 易被单胺氧化酶降解 从而 使儿荼酚胺 NE E DA 和 5 HT 耗竭 引起行为和生理上的变化 对利血平引起的行为和生 理变化的拮抗是最早发展的抑郁动物模型 经利血平处理的动物出现上眼脸下垂 体温下降及 强直症状 预先用三环抗抑郁药及单胺氧化酶抑制别处理 能拮抗上眼睑下垂及体温下降的症 状 然而此实验不能检测许多结构上不同于三环抗抑郁药及单胺氧化酶抑制剂的新抗郁药 却 对于很大范围的非抗抑郁药有效 如兴奋剂 多巴 a 肾上腺素能激动剂 肾上腺素能阻 断剂及抗组胺药 事实上此实验包含三方面独立的生物学检测 因为利血平引起的上眼脸下垂 体温下降及强直分别被 a 肾上腺素能或 5 HT 能激动剂 肾上腺素能激动剂及 DA 激动剂所 拮抗 2 实验方法及观测指标 选用 18 23g 雄性小鼠 1 上睑下垂 ptosis 的观测 静注 2mg kg 利血平 同时腹腔注射或口服药物或生理盐水 对照 1hr 后将动物放于支架上观察 15s 比较给药组和对照组中限盼至少关闭一半的动物的个数 2 运动不能 akinesia 的观察 静注 2 5mg kg 利血平 同时口服药物或生理盐水 对照 lh 后将 动物放于直径 7 5cm 的圆形白纸的中央观察 15s 或更长时间 比较给药组和对照组中仍然呆在 圈内的动物的个数 3 体温下降 hypothermia 的观察 腹腔注射 5mg kg 利血平 同时口服药物或生理盐水 对照 4h 后将探头插入动物肛门内 1 5 至 2cm 处测量肛温 比较给药组及对照组中肛温的差异 3 注意事项 进行动物体温测量实验时 环境温度应保持恒定 最好在 20 度左右 4 应用 常用于具有一定药理作用的抗抑郁药的初筛 抗抑郁药理实验方法实验方法和模型一 药物之间相互作用模型许多早期模型涉及到抗抑郁药与其它药理学类型药物之间的相互作用 这些模型曾不严格地被认为模拟了抑郁 然而从抑郁模型的三方面标准 表面上的相似性 face validity 预测的有效性 predictive validity 及思路的合理性 con 妖足赢哇弯猩惋痢仙楞囚疚闺恍汽侄朴真碍脸骋瓷委希健啄功晰裳莫叶碴巫哟鱼综状丧哮台赘墩滓淄锡聪 壤金吕什回弟熬浚龄躲猩簇残洗悄瘤认边 二 高剂量阿扑吗啡的拮抗 antagonism of high dose of apomorphine 1 概述 Schelkunov 1968 年首先提出将阿扑吗啡引起小鼠体温下降作为筛选抗抑郁药的一种 实验方法 以后的研究表明 药物对高剂量阿扑吗啡 16mg kg 引起小鼠体温下降的拮抗是通 过中枢去甲肾上腺素能机制 该实验反映了药物对去甲肾上腺素重摄取及 或去甲肾上腺素传递 的作用 而不反映其抗抑郁性质 多巴胺拮抗或其对 5 HT 受体的作用 2 实验方法及观测指标 环境温度保持 20 22 体重 20 25g 的雄性小鼠 测量肛温后腹 腔注射受试药物或生理盐水 30min 后皮下注射阿扑吗啡 16mg kg 30min 后再次测量肛温 比较生理盐水对照组和受试组肛温变化的差异 3 注意事项 进行动物体温测量实验时 环境温度保持恒定 4 应用 用于筛选抑制 NA 重摄取或能激活 a1 和 肾上腺京能受体的药物 三 5 HTP 诱导的甩头行为 5 HTP induced head twitches 1 概述 该模型最早由 Corne 等在 1963 年提出 5 HT 受体兴奋引起的甩头综合征可能通过 5 HT2 受体介导 小鼠中由 5 HTP 诱导的甩头行为对于具有不同作用机制的抗抑郁药均比较 敏感 如西酞普兰 氟伏沙明等 5 HT 重摄抑制剂 去甲丙咪嗪 麦普替林 诺米芬辛等 NA 重摄抑制剂及混合作用于 5 HT 和 NA 系统的丙咪嗪 2 方法步骤及指标 选用 20 24g 雄性小鼠 首先在测试前 3h 腹腔注射 100mg kg 帕 吉林 之后腹腔注射受试药或生理盐水 30min 后再注射 5 HTP 5mg kg ip 10min 后开始 观察 记录 6min 内小鼠甩头次数 比较实验组和生理盐水对照组甩头次数的差异 3 应用 常用于研究筛选作用于中枢 5 H 丁或 NA 系统的抗抑郁药 四 小鼠育亨宾增强模型 yohimbine potentiation model in mice 1 概述 Gershon 及其同事观察到 临床上有效的抗抑郁药包括单胺氧化酶抑制剂 三环抗抑 郁药及非典型抗抑郁药 IprindoLe 均能增强 a2 受体拮抗剂育亨宾在狗上的毒性 基于这些发现 他们建立了狗育亨宾模型 尽管在有限的受检药物范围内该模型的临床预测性比较好 但该模 型耗时耗费 因而它的使用受到了限制 1963 年 Quinton 观察到丙咪嗪及几种其它类型的抗抑 郁药均能显著增强育亨宾在小鼠中的毒性 与狗育亨宾增强模型相反 小鼠模型对于抗抑郁药 并不专一 其它药物如抗精神分裂症药物 抗胆碱能药物也能增强育亨宾在小鼠中的毒性 但 由于该模型操作上简便快速 出而得到广泛使用 2 实验方法及观测指标 选用 18 24g 的雄性小鼠 口服受试药物或生理热水 皮下注射育亨 宾 30mg kg 观察比较注射育亨宾 18h 后受试组相对照组中小鼠死亡率 3 注意事项 育亨宾的用量应当采用使对照组小鼠没有致死作用时的最大剂量 4 应用 观察药物对 NE 能神经传递的作用 二 应激模型 一 行为绝望 及其衍生 behavioural despair and derivatives 1 概述 尽管 70 年代已出现了 些较好的抑郁动物模型 如获得性无助模型 分离模型 仅 由于花费或可行性问题 这些模型尚未用于常规的药物韧筛 药物初筛迫切需要一些简单 快 速 敏感的动物模型 在此背景下 Porsolt 等 977 年分别发展了大鼠和小鼠强迫游泳模型 在 强迫游泳模型中 大鼠和小鼠被迫在 局限的空间游泳 它们首先挣扎试图逃跑 随后处于 种不动的状态 这种状您被弥为 行为绝望 除了 些 5 HT 重摄取抑制剂之外 多数抗抑郁药 在此模型中均能减少动物的不动时间 且其药效与临床上药效显著相关 而在亚活性剂量锂盐 辅助下 5 HT 重摄取抑制剂类抗抑郁药在此模型中也往往有效 继强迫游泳模型之后 陆续衍生出了其它一些模型 在这些进展中最突出的是小鼠悬尾模型 悬尾小鼠为克服不正常的体位而挣扎活动 但活动一定时间后 出现可断性水动 显示 失望 状态 有效药物包括三环抗抑郁药 单胺氧化酶抑制剂及非典型抗抑郁药 包括 5 HT 重摄抑 制剂 2 大鼠强迫游泳实验 rat forced swimming test 1 实验方法 选体重 160 一 180g 雄性大鼠放人水深 15cm 的量筒 40cm 高 18cm 直径 水温 25 预试 15min 后在 32 下烤干 24h 后 动物重新放人上述环境中 测定给药组和对照 组在 5min 内保持漂浮不功的时间 2 注意事项 1 实验中水的深度是关键 应使动物后爪刚可触及水底 但又不能支撑身体 2 能增加活动性的药物可能出 假 阳性结果 故在进行强迫游泳实验的同时还应检测该药对活 动性的影响 3 小鼠强迫游泳实验 mouse forced swimming test 选 20 24g 雄性小鼠放入水深 10cm 的量筒 20cm 高 14cm 直径 水温 25 度 观察 6miln 比较给药组和对照组小鼠在后 4min 内不动的 时间 4 小鼠悬尾实验 tail suspension test 选体重 20 一 24g 雄性小鼠 将其尾端 2cm 的部位贴在 一水平木棍上 使动物成倒挂状态 其头部离台面约 5cm 悬挂两侧用板隔开动物视线 比 较给药组及对照组在 6min 内的不动时间 5 应用 常用于抗抑郁药的初筛 二 获得件无助 learned helplessness 1 概述 获得性无助 现象最初是在 1967 年被 Seligman 和 Maier 用来描述狗的 随后扩展到 其它种属 大鼠 猫 小鼠和人 近些年来的大多数实验多采用大鼠作为研究对象 获得性无 助 即当机体受到无法逃避的应激刺激如电击时 将随后产生操作欠缺 而在同等的可以逃避的 应激刺激下则不产生操作欠缺 获得性无助 动物产生的操作欠缺可在亚长期 3 7d 使用各种 抗抑郁药包括三环抗抑郁药 单胺氧化两抑制剂 非典型抗抑郁药及电惊厥电击下所逆转 而 长期使用兴奋剂 镇静剂 抗焦虑药及神经松弛剂则无效 无助 动物除了在令其厌恶的条件刺 激下表现出操作欠缺外 还可出现其它一些行为变化 如活动性降低 攻击性减少及食欲和体 重下降 脑中 NE 5 HT DA 能 GABA 能神经元活性下降及中枢胆碱能神经元活性过高均与 无可回避电击后的行为抑制有关 很难确定具体哪类神经递质系统与哪种行为变化相关联 因 为行为变化本身不是单 的 如穿梭箱逃避学习包含活动性 注意过程 协调过程 恐惧 疼痛 等 其中的任何一项变化均能改变逃避行为 因而各种神经化学的变化均可反映在逃避行为 上 无可回避的电击后出现的行为欠缺的中枢机制与多种神经递质系统有关 2 操作方法及观测指标 1 无助 的诱发 通过有盖的 20X10 x10cm3 笼子内的不锈钢栅 1 5cm 间隔 传送 60 次随机的无 法逃避的足部电击 0 8mA 持续 15s 每 1min 15s 给一次电击 对照大鼠 200 220g 雄性 大鼠 放于相同笼中 1h 但不给予电击 无助 的诱发可在第 1 天上午进行 2 条件回避训练 在无可逃避的电击之后 48h 第 3d 开始进行回避训练 以便于评价逃避和回避 行为 实验时 使用 60 x 21x 30cm3 的穿梭箱 其底面由不锈纲栅构成 1 0cm 问隔 穿梭箱 被一块带有 7x 7cm2 小门的不锈钢板隔成两个相同的箱子 将动物单个地放人穿棱箱的一端 使其适应测试环境 5min 只在第一期训练时进行 然后进行 30 次回避训练 每次之间间隔 30s 每次训练的最初 3s 出现一个光信号 允许动物在此期间到 达另一端的箱中以回避电击 若此间无回避反应发生 则光信号再持续出现 3R 同时还出现一个 0 8mA 的足部电击 持续 3s 若此间无逃避反应发生 则电击和光信号 立即自动停止 同时将此记作一次逃避失败 在第 3 4 5d 亡午均进行 期回避训练 每只 大鼠均记录其逃避失败次数 预先经受了无可逃避电击的大鼠 在第 3 4 5d 的测试 中逃避失败次数均显著高于预先未经受无可逃避电击的大鼠 而在连续使用抗抑郁药之后 预 先经受了无可逃避电击的大鼠在第 3 4 5d 的测试小逃避失败次数显著下降 尤其是在第 4 5d 中 3 应用 获得性无助模型对抗抑郁药高度敏感 不仅可用于这些药物的次筛 也日益用于研究 这些药物的作用机制及抑郁病的神经生物学 三 未预知的长期应激刺激 chronic unpredictable stress 1 概述 此模型最初是在 l981 年由 Roth 和 Katz 描述的 大鼠长期受到各种应激刺激后 其在 敞箱测试中的急性白噪声刺激下将显示出活动性的减少 随后又有研究者们观察到慢性未预知 的应激刺激还能导致动物在强迫游泳实验中活动时间缩短及在穿梭箱实验中逃避行为欠缺 在 慢性应激刺激朗间每日给予抗抑郁药物治疗 将明显改善动物的行为欠缺 慢生应激大鼠出现 的行为欠缺可能与去甲肾素能系统的改变有关 2 实验方法和指标 选用 280 一 350g 的大鼠 每笼 4 只 食水不限 除非持指 1 敞箱买验 1 慢性应激刺激 大鼠在 21d 中受到的应激刺激包括 三次 1h 电击 平均 1mA 只 续 l l0s 平均每 min 一次电击 两次 40h 禁食 三次 4 冷水中游泳 5min 两次 40h 禁水 两次 40 环境中 5min 两次高速水平方向摇晃 30min 两次昼夜循环颠倒 每 2 或 3d 给予一次刺激 以半随机方式给予 2 给药方式 每日一次 持续 21 d 3 活动性测试 在最后一次慢性应激刺激的 48 72h 后 将大鼠置于 95dB 的白噪声中达 lh 然后立即将大鼠故人 1 22m2x 45cm 高的敞箱 4x 4 方格 中测试 6min 记录大鼠在前 3min 内方格间的穿行次数以及整个 6min 内的排粪次数 2 穿按箱实验 1 慢性应激刺激 大鼠在 14d 中受到的应激刺激包括 两次 30 加 n 足部电击 1mA 持续 1s 平均每 min 一次 一次 24h 禁食 两次 4 冷水中游泳 5min 两次 24h 禁水 两次 lh 水平方 向高速摇晃 两次 24h 转移至另一屋中的新笼中 次 1min 夹尾 一次 24h 孤养 每日随机 给予一种刺激 2 给药方式 每次应激刺激前 1h 腹腔注射受试药或生理盐水一次 共持续 14d 3 逃避行为测试 第 15d 将动物放入空梭箱的一端 使之先适应测试环境 3min 然后进行 30 回避试验 每次试验的前 4s 均出现噪声信号 若此期间无回避反应发生 大鼠将受到 0 8mA 足部电击 若此间无逃避反应发生 则电击和噪声信号将终止 记录动物在整个实验中逃避失 败的次数 即电击出现期间动物未到达另一端箱子的次数 3 应用 可用于抗抑郁药物的筛选及抑郁症病理生理机制的研究 四 未预知的长期温和应激刺激 chronic unpredictable mild stress 1 概述 未预知的长期温和应激刺激模型是 Willner 等受 Katz 等描述的未预知长期应激刺激模 型的启发而在 1987 年提出的 Willner 将其中的应激刺激程度减轻 利用长期的温和应激刺激 使之更现实地模拟了人们日常生活中遭遇的 因难 在经过长期温和应激刺激之后蔗糖水饮用 量的减少反映了内源性抑郁症的中心症状即快感缺乏 anhedonia 在新的模型中 抗抑郁药治 疗的时间进程及在正常非应激动物中的无效 准确地模拟了临床治疗的情形 抗抑郁药在慢性 应激刺激模型中的作用可能通过增加突触后 DA 受体敏感性来介导 DA 受体拮杭剂 Pimozide SCH 23390 和 sulpiride 急性给药能拮抗三环抗抑郁药在此模型中的疗效 D2 受体 拮抗剂 raclopride 能选择性地拮抗 fluoxetine 氟西汀 和 maprotiline 麦普替林 在此模型中的疗 效 2 方法步骤 选用体重 300 一 350g 的雄性大白鼠 孤养 1 所有动物首先受训饮用 1 的蔗糖水 在开始的 48h 内将蔗糖水故人笼中以代替自来水 接着 禁食禁水 20h 通过称饮水瓶重量连续测量 5 次动物在 lh 内蔗糖水的饮用量 此后每间隔一周均进行一次 20h 禁食禁水及 1h 饮蔗糖水测试 此过程贯穿于整个实验 2 根据最后的基线测试中大白鼠蔗糖水的饮用量 将动物均匀分成两组 其中一组作为对照组 只在测试前禁食和禁水 20h 其它时间食水不限 另一组接受长期应激刺激 包括 两次 20h 的禁食和水 其中一次在测试之前 另一次在禁食和水后给予 2h 进食时间 将 45g 食物分散在 笼内 16h 禁水 两次通宵照明 两次 7 和 17h 45 倾斜笼子 次 17h 的配对饲养 一次 17h 潮湿笼中饲养 将 200m1 水加到有锯末的笼底 两次 3 5h 周期性的噪声 85d 三次 7 9 和 17h 低强度的闪烁照明 每 min 闪 300 次 两组动物在互相隔离的环境饲养 3 在经过 4 周的应激刺激之后 根据测试结果 每组动物又可均匀分成受试药组和生理盐水组 在继续进行应激刺激的同时 进行长期给药 如每日一次 共进行 5 周用药 3 指标 比较各组动物蔗糖水饮用量的差异 经过长期温和的应激刺激之后 动物蔗糖水的饮 用量将明显减少 而给予抗抑郁药治疗的动物蔗糖水的饮用量将恢复正常 4 应用 该模型对于研究抗抑郁药的临床作用机制及抑郁病的病理生理机制具有一定价值 三 脑损伤模型 嗅球切除模型 olfactory bulbectomy model 一 概述 自从 1971 年 Cairncross 和 King 首次报道阿米替林能改善嗅球切除大鼠回避学习能力 以来 陆续有许多文献报道切嗅球大鼠的许多行为变化包括自主活动性增加和被动回避反应能 力欠缺等均能被抗抑郁药逆转 嗅球切除动物行为欠缺的神经生化机制尚不十分清楚 人们认 为至少部分上嗅球切除后通过改变不同脑区 5 HT 能系统功能引起行为欠缺 例如 增加 5 HT 传递的药物能改善切嗅球引起的被动回避欠缺 而将 5 HT 拮抗剂 metergoline 全身给药或 注入内侧杏仁核 能阻断抗抑郁药在嗅球切除大鼠中的药效 嗅球内注射 5 7 双羟色氨酸以 破坏其中的 5 HT 末梢能产生与嗅球切除后相似的被动回避欠缺 而破坏儿茶酚胺能神经元则 不能 由于作为 5 HT 投射到边缘及前脑区的起源点缝核背侧具有投射到嗅球的纤维 因而切 除嗅球后这些联系遭到破坏可能导致缝核及与之联系的其它脑区 5 HT 能传递改变 二 手术方法 1J 选取体重 300 350g 雄性大鼠 经过至少 3 4d 每日数次的抚摸之后 用三溴乙醇 250mg kg ip 或水合氯醛 375mg kg ip 等麻醉大鼠 2 从大鼠前囟前 1cm 至前囟后 1cm 正中线处纵切头皮 暴露颅骨 3 在距离前囟前面 8mm 正中线两侧 2mm 处分别钻通颅骨 使出现两个 2mm 直径的小孔 4 用连在水泵上的钝的皮下注射针 借助负压将嗅球吸出 5 用止血海绵填充小孔 四环素粉末洒在伤口上 缝合皮肤 6 大鼠经过 14d 左右的恢复期后可以进行实验 在恢复过活程中 每日仍需抚摸动物 假切 除大鼠处理方式基本同上 只是嗅球不吸除 三 测试方法 1 被动回避实验 1 跳台 step down 被动回避 在电击箱内放一个木制平台 平台高出电击箱底大约 5cm 左右 将大鼠先置于电击箱 不予电击 中使之熟悉环境 1min 然后将大鼠放于平台上 只要其 4 个爪 全部接触到电击箱底部就给予 次 2s 0 6mA 左右的电击 直到它在平台上连续呆上 3min 或 遭受 l0 次电击为止 记录此时大鼠遭电击的总次数 大鼠嗅球切除后遭受电击次数明显增多 反映了嗅球切除能引起被动回避反应欠缺 当给予抗 抑郁药后 能减少遭电击的次数 2 避暗 step through 被动回避 实验箱由明暗两室组成 隔板底部有一通道供大鼠出入 暗室 网栅与电休克仪相联 如大鼠进入暗室 则遭电击 将大鼠放人暗室 并给予一次电击 人鼠 将逃至明室 当大鼠的 4 个爪又重新回到暗室时 将再次受到电击 此时记数为 l 直至大鼠连 续在另 端呆上 2min 或遭受电击达 20 次 记录此时大鼠遭受电击的总次数 3 舔水被动回避 在连续 4d 的实验中 大鼠每日禁水 23 5h 第 1 2d 将大鼠放人受试笼中 进行 l0min 的舔水训练 第 3 4d 进行测试 测试时 每当大鼠舔水 20 次自动给予一次电击 记录大鼠舔水次数及遭电击的次数 嗅球切除大鼠遭受电击次数将明显多于假切除大鼠 抗抑郁药能明显减少嗅球切除大鼠迢电击 次数 2 主动回避实验 实验箱内没有条件刺激装置 即声光刺激 底部为不锈钢栅 与电击装置相 连 给予非条件刺激 电击刺激 实验箱两长侧壁的底部装备有红外光电管 实验包括 60 个试 行周期 每个周期分为条件刺激期 非条件刺激期及间歇期 如果大鼠在条件刺激期移动并切 断两端的光束 则可避免电击 记录为 回避反应 avoidance response 如在非条件刺激期 切断光束 则电击立即中止 记录为 逃避反应 escape response 如果切断光束发生于间歇 期 则记录为 自发反应 大鼠嗅球切除后 回避反应次数明显增多 逃避失败次数显著降低 表明嗅球切除后主动回避 反应能力增强 当给予抗抑郁药后 主动回避反应能力遭破坏 3 敞箱活动性实验 木制箱 l00 x100 x 50cm3 地板用笔划成 25 方格 20 x 20cm2 将大鼠放 于正中格中 其正上方 45cm 处放一白炽灯照明 观察大鼠在 3min 内的活动情况 包括方格 间穿行次数 三爪以上跨入邻格的次数 竖起次数 两前肢离地 lcm 以上的次数 修饰次数及 排粪次数 每次实验后均需将动物的排泄物清除干净 大鼠嗅球切除后方格间穿行次数明显增 多 而在慢性给抗抑郁药后能使此行为恢复正常 四 注意事项 1 术前术后的每日抚摸对于减少术后动物的易怒性及测试时的行为差异很重要 2 巴比妥类麻醉剂麻醉时间长 易挥发的麻醉刑具刺激效果而易导致并发症 因而使用作用 较短暂的不挥发的非巴比妥类麻醉剂较好 有利于术后恢复 3 吸除嗅球时应小心不损伤额叶皮层 测试结束时应检查动物手术是否正确 4 术后应将动物置于 20 左右环境中 以避免动物体温过低 五 应用 常用于抗抑郁药的次筛以及作用机制研究 四 72s 低频率差式强化程序 differential reinforcement of low rate 72 s schedule 一 概述 在低频率差式强化 DRL 程序中 只有与上一次反应间隔一定时间或一定时间以上发 生的另一次反应才被强化 否则不但没有强化 而且间隔又要重新开始 1980 年 McGuire 和 Seiden 首先观察比较了三环抗抑郁药丙咪嗪对大鼠在 DRL9 s 和皿 DRL72 s 程序中操作行为的 影响 结果表明 在 DRL9 s 中丙咪嗪对强化数和反应数无明显影响 而在 DRL72 s 中丙咪嗪 急性给药能显著增加强化数同时减少反应救 反应间时间间隔 IRT 分布移向较长的 IRT 随后 陆续又有报道表明 在 DRL72 s 中 其它的三环抗抑郁药 单胺氧化酶抑制剂 电休克及一些 非典型抗抑郁药如麦安舍林 曲唑酮 氟西汀 齐美利定也具有与丙咪嗪相同的效应 各类非 抗抑郁药如精神抑制剂 抗组胺药 抗胆碱能药 抗焦虑药 精神运动兴奋剂 酒精 麻醉止 痛药测试结果则不同于抗抑郁药 因此 DRL72 s 成为抗抑郁药筛选及研究的一个模型 由于损毁前脑 5 HT 通路可以阻断抗抑郁药在此模型中的应用 非选择性 5 HT 受体拮抗剂能部 分阻断三环抗抑郁药在 DRL72 s 中使强化率增加的效应 选择性 5 HT2 受体拮抗剂在 DRL72 s 中具有抗抑郁样作用而不同于非选择性 5 HT 受体拮抗剂 因而 5 HT1 受体位点的激动或 5 HT2 受体位点的拮抗可能介导了抗抑郁药在大鼠 DRL72 s 程序操作中的作用 二 仪器设备 采用自动化实验设备 包括隔音的实验箱和电子控制系统 实验箱内装有照明灯 实验中始终使之亮 和杠杆 离杠杆 定距离有饮水装置或食盘 当大鼠压杆 反应 符合程序要 求时 自动供水或食物 强化 一次 三 操作步骤 大鼠在每次受训前禁水 22 5h 每次受训后允许其有 20min 饮水时间 1 每个大鼠首先用 FRI FI60s 程序进行水的强化训练 即当大鼠压杆反应一次给予 次饮水强 化 没有反应发生时每 60s 给一次强化 在连续 3d 的每日 lh 训练中仍末学会的少数大鼠 由 实验者单独训练 2 所有大鼠接受 2 周的 DRLl8 s 训练 每天训练 Ih 3 大鼠接受 DRL72 s 训练 每天训练 1h 当每只大鼠在连续 5d 以上的受训中平均总反应率 的标准误不超过相应平均值的 10 时 认为此大鼠的反应达到稳定 此过程大致需要 8 周 4 给药测试 每只大鼠均可多次给药 以剂量逐渐加大的顺序用药 加大用药剂量应在上 次 用药后间隔 天或一天以上不用药后进行 每次给药后一定时间进行 DRL72 s 测试 对照可选 择开始给药前的 5d 的平均值 四 观测指标 1 反应率 压杆次数占对照操作的百分数 抗抑郁药常使反应率下降 2 强化率 获得饮水次数占对照数的百分数 抗抑郁药常使强化率升高 3 峰面积 PkA 实际观察到的间断 IRT 相对频率分布 pause IRT relative frequency distribution 超出理论上的随机分布的部分所占的面积 4 峰定位 PkL 观察到的间断 IRT 相对频率分布峰中央所在位置 抗抑郁药往往使 PkL 增加 而 PkA 不变 五 注意事项 1 每只大鼠在经过 定时期 DRL72 s 训练后的反应率和强化率开始稳定 但具体数值随大鼠 个体不同而不同 2