马尾藻多糖体外抗肿瘤活性研究

1 / 5马尾藻多糖体外抗肿瘤活性研究【摘要】目的研究马尾藻多糖体外抗肿瘤作用，以期为筛选抗癌辅助药提供实验依据。方法采用热水浸提法提取马尾藻多糖，MTT 法检测马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z 和肺腺癌细胞 A549 体外增殖的影响。结果 3 种马尾藻多糖在体外能抑制鼻咽癌细胞 CNE-2Z 和肺腺癌细胞 A549的增殖且与浓度呈正相关；对两种肿瘤的抑制效果以围氏马尾藻最明显，其次是半叶马尾藻。结论不同马尾藻多糖抗肿瘤活性不同且对不同肿瘤的抑制作用也不同，3 种马尾藻多糖对鼻咽癌细胞 CNE-2Z 抑制作用比对肺腺癌细胞 A549抑制作用强，又以围氏马尾藻多糖抑瘤作用最强。 【关键词】 马尾藻多糖； 抗肿瘤； MTT 法研究发现，从海洋藻类中提取的海藻多糖，不仅有提高机体免疫功能、抗肿瘤、抗辐射、防衰老及抗病毒等多种生物活性，而且具有毒性小、药源丰富的特点1 。大量海藻处于自生自灭的状态，如果能将海藻开发为抗肿瘤药物，必将降低药物的成本2 。本实验通过对采集于湛江硇洲岛最常见且大量生长的半叶马尾藻 Sargassum hemiphyllum，亨氏马尾藻 Sargassum henslowianum Agardh 和围氏马尾藻 Sargassum wightii 等 3 种海藻进行多糖提取和 MTT 法检测，来对其体外抗肿瘤活性进行研究。2 / 51 材料海藻来源均采自广东省湛江市硇洲岛海域，由广东海洋大学海洋生物研究所谢恩义博士鉴定。细胞株鼻咽癌细胞 CNE-2Z 和肺腺癌细胞 A549，均由广东医学院生物与化学教研室提供。仪器与试剂 FS862A 型药物粉碎仪，R205B 型旋转蒸发仪，型高速冷冻离心机，冷冻真空干燥器，TC2323 型CO2 培养箱，ELx800 酶标仪。新生牛血清，RPMI-1640,MTT，实验用其它试剂均为分析纯。2 方法多糖的提取将 3 种海藻洗净，干燥粉碎，经热水浸提，乙醇沉淀，Sevag 法去蛋白，无水乙醇多次洗涤，真空干燥得 3 种多糖，用 RPMI-1640 培养液配制成，1，2，4 ，8 mg/ml 的多糖溶液。MTT 法检测多糖的体外抗肿瘤作用收集对数生长期的鼻咽癌细胞 CNE-2Z 和肺腺癌细胞 A549，按104/孔接种于 96 孔板，每孔 180 l 细胞悬液，在 37、5%CO2 条件下培养 24 h 后，实验组分别加入不同浓度的多糖溶液 20 l，使多糖的终浓度分别为， ， ， ， mg/ml，对照组加相同体积的 RPMI1640 液，每组设 3 个平行孔，继续培养 48 h后，每孔加入 20 l MTT 溶液,再培养 4 h。小心弃去培养3 / 5液，每孔加入 100 l DMSO 溶解，待完全溶解后，于酶标免疫测定仪以 570 nm 测定各孔吸光度。根据下面的公式计算出抑制率，绘制浓度-抑制率曲线。抑制率=100%统计学处理用软件进行单因素方差分析，多个样本均数与对照组样本均数之间的比较采用 t 检验。3 结果用 MTT 法检测 3 种多糖对鼻咽癌细胞 CNE-2Z 增殖的影响用不同浓度的海藻多糖处理鼻咽癌细胞 CNE-2Z 后，可见抑制率均随着多糖浓度的增加而增加；当浓度为 mg/ml 时，3 种多糖对 CNE-2Z 细胞的抑制率分别为%，%，%，与对照组相比差异有显著性；对鼻咽癌细胞 CNE-2Z 抑制效果以围氏马尾藻最明显，其次是半叶马尾藻。结果见表 1，图 1。表 1 MTT 法检测 3 种多糖对 CNE-2Z 细胞生长的影响(略)用 MTT 法检测 3 种多糖对肺腺癌细胞 A549 增殖的影响用不同浓度的海藻多糖处理肺腺癌细胞 A549 后，可见抑制率均随着多糖浓度的增加而增加；当浓度为 mg/ml 时，3 种多糖对肺腺癌细胞 A549 的抑制率分别为%，%，%，与对照组相比差异有显著性。对肺腺癌细胞 A549 抑制效果以围4 / 5氏马尾藻最明显，其次是半叶马尾藻。结果见表 2 及图 2。表 2 MTT 法检测 3 种多糖对 A549 细胞生长的影响(略) 4 讨论癌症对人类健康威胁很大，目前的治疗方法主要有外科手术、放射治疗和化学治疗。但放疗缺乏特异性，在杀死肿瘤细胞的同时，也损伤正常细胞，化学治疗又有很强的副作用，因此，寻找天然低毒高效的抗癌辅助药越来越重要。我国海域辽阔，海藻资源丰富，大量的体内外实验充分证明海藻多糖对肿瘤有明显的抑制作用，已用于癌症的辅助治疗。据报道，硫酸化墨角藻多糖在子宫颈癌中能引起显著的细胞毒性效应从而达到治疗作用3 ；硒化麒麟菜多糖具有抗人喉癌细胞株 Hep-2 增殖的活性，其抑制作用明显优于亚硒酸钠的抗肿瘤活性4 ；Hirayasu 等5发现海藻硫酸多糖可以通过增加淋巴细胞纤维蛋白溶酶粒酶 A 的酯酶活性来增强免疫反应，而抑制肿瘤生长；张志娟等6发现复合螺旋藻多糖与银杏叶有效成分体外联合使用能协同抑制肝癌细胞增殖。5 / 5为了筛选出经济有效的抗癌辅助药，本实验对采集于湛江硇洲岛常见且大量生长的半叶马尾藻，亨氏马尾藻和围氏马尾藻进行多糖提取，并采用 MTT 法检测其体外抗肿瘤的药理活性，结果证实。3 种马尾藻多糖对鼻咽癌细胞CNE-2Z 和肺腺癌细胞 A549 的生长有明显的抑制作用且与浓度呈正相关；同一类的不同马尾藻多糖抗肿瘤活性不同，从图 12 中能看出围氏马尾藻多糖抑瘤作用最强，其次是半叶马尾藻，有希望将围氏马尾藻开发成抗癌辅助药；马尾藻多糖对不同肿瘤的抑制作用也不同，从表 12 中能看出 3 种马尾藻多糖对鼻咽癌细胞 CNE-2Z 比对肺腺癌细