鲑降钙素喷鼻剂稳定性考察

1 / 8鲑降钙素喷鼻剂稳定性考察【摘要】 目的 考察鲑降钙素喷鼻剂的稳定性，为制定其合理的有效期、储存条件提供依据。方法 采用高效液相色谱法，分别测定在强光、高温、高湿条件下放置 5 d 和 10 d，在 25 加速试验的条件下放置 6 个月，在(53)的条件下放置 3 个月的鲑降钙素喷鼻剂的含量、有关物质等的含量变化情况。结果 鲑降钙素喷鼻剂在 40 、25 和强光条件下，含量及有关物质均发生明显变化，在(53)及高湿度条件下则未发生明显变化，各储存条件下的 pH 值及外观装量等均无明显变化。结论 鲑降钙素的有效期可暂定 24 个月，其合适储存条件为低温(28 )、避光贮存。 【关键词】 鲑降钙素;喷鼻剂;稳定性;有关物质Abstract:Objective To investigate the stability of salmon calcitonin nasal spray to establish the useful life and storage HPLC was used to determine the salmon calcium nasals content and related substances,which were placed five days and ten days under the conditions of high temperature、high humidity and strong light respectively,half a year under the condition of 25 2 / 8,three months under the condition of (53) . Result The contents of salmon calcium in nasal spray declined under the 40 ,25 ,strong light condition and related substances increased obviously. While there were no obvious changes in relevant substances under the conditions of (53) and high humidity,and in the pH,appearances and capacities under all tested The useful life of the salmon calcium nasal spray is tentatively set for two years and the storage should be at low temperature (2-8 ) and avoiding light.Key words:salmon calcitonin; nasal spray; stability; related substances鲑降钙素是一种蛋白质多肽，主要用于治疗变形性骨炎、恶性高钙血症和骨质疏松症1，传统剂型为注射剂，其喷鼻剂是近年来新开发的剂型，可以减少注射给药给患者带来的顺应性低、容易发生过敏反应等缺点。与其他的多肽类药物相似，鲑降钙素对光、热不稳定，其多肽链容易分解2。鲑降钙素喷鼻剂做为一种较新颖的剂型，其所用的辅料、制备工艺与传统注射剂有明显的不同，因此有必要对其稳定性进行考察，以保证临床用药安全3。于芝颖4等曾考察鲑降钙素喷鼻剂在模拟流通和使用条件下的3 / 8稳定性情况，但没有对各种条件下特别是光线及长期储存等对其产生的影响进行全面考察。以鲑降钙素及其主要降解物质降钙素 C3-4的含量为主要指标，对鲑降钙素喷鼻剂的稳定性进行深入研究。1 仪器与试剂仪器Agilent1200 高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);色谱柱：菲罗门 C18(25 cm mm,5 m);SPX?250C 恒温恒湿培养箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂);PHS?3C 酸度仪(上海雷磁创益仪器仪表有限公司);YB?照度仪(天津光学仪器仪表有限公司);XS?204 分析天平(万分之一,梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。试剂鲑降钙素对照品(批号：140665-XX11，中国药品生物制品检定所);降钙素 C(质量分数为 97%，批号：;Novartis Pharma );鲑降钙素喷鼻剂(Novartis Pharma );乙腈、甲醇(色谱纯，德国默克公司);四甲基氢氧化铵、磷酸氢二钠、磷酸(广州化学试剂厂，分析纯)。2 实验方法溶液的配制对照品溶液的制备：精密称取鲑降钙素对照品 0 g，置 10 mL 的容量瓶中，用 mol/L 的磷酸二氢钠溶液稀释4 / 8至刻度，摇匀，-4 保存备用。实验时分别移取 1 mL 对照品储备液置 2、5、10、25、50 mL 的容量瓶中，加磷酸氢二钠溶液至刻度，配制成质量浓度为32、64、160、320、800 g/mL 的对照品溶液。 供试品溶液的制备：取鲑降钙素喷鼻剂样品直接进样。色谱条件色谱柱：菲罗门 C18(25 cm mm,5 m)，柱温为30 ，检测波长为 220 nm。以质量浓度为%四甲基氢氧化铵?乙腈(体积比 91)用磷酸调节 pH 值至为流动相 A，以质量浓度为%四甲基氢氧化铵?甲醇(体积比 23)用磷酸调节 pH 值至为流动相 B，进行梯度洗脱，流速为 1 mLmin-1，梯度洗脱程序如下：110 min，流动相 A流动相 B 为 20%80%;1015 min，流动相 A流动相 B 为65%35%;1530 min，流动相 A流动相 B 为 25%75%。降钙素 C 的专属性考察3称取鲑降钙素对照品适量，用 mol/L 的磷酸二氢钠溶解，配成质量浓度为 gL-1 的溶液，在 80 恒温水浴中放置 15 h。按“”项下色谱条件，进样 10 L，降钙素C 为溶剂峰与主峰间的最大峰，与主峰鲑降钙素峰的分离度应大于。采用面积归一化法定量。5 / 8测定方法精密吸取供试液 10 L 注入 HPLC 色谱仪，记录图谱，理论塔板数按鲑降钙素峰计算应方法学考察线性关系 精密移取各质量浓度对照品溶液 10 L进样，以峰面积(A)为纵坐标、溶液的质量浓度()为横坐标进行线性回归，得回归方程：A=+(r= 2)，表明鲑降钙素在 321 600 g/mL 的范围内具有良好线性关系。精密度试验 精密移取供试品溶液 10 L，连续进样 5 次(n=5)，记录峰面积，计算平均峰面积为 52 832，RSD 为%，表明方法精密度良好。回收率试验 取同一供试品 9 份，分别精密加入相当于样品含量 80%、100%、120%的鲑降钙素对照品各 3 份,按“”项下方法进行含量测定,计算回收率,得平均回收率为%，RSD 为%(n=9)，表明方法回收率良好。有关物质采用“”项方法进行含量测定，在色谱图上扣除溶剂峰、辅料峰、主峰外，降钙素 C 峰和其他峰均为有关物质峰。采用面积归一化方法定量。其他澄明度、总装量、pH 值参考中国药典方法测定3。6 / 83 实验结果光照试验取 3 批样品，每批 15 瓶。全部样品放置于照度为(4 50050) Lx 条件下，强光照射 10 d，分别于第 5 天和第10 天取样测定。结果见表 1。表 1 鲑降钙素喷鼻剂光照试验结果由表 1 可见：在强光照射条件下，鲑降钙素喷鼻剂的外观、pH 值、装量无明显的变化;在 5 d 与 10 d 后，鲑降钙素含量下降较快，分别下降 5%10%。表明在(4 500500) Lx 强光照射条件下，本品已经失去其药用规定的有效性。高温试验取 3 批样品，将全部样品放置于 40 恒温恒湿箱中，放置 10 d，分别于第 5 天和第 10 天取样测定，结果见表2。表 2 鲑降钙素喷鼻剂高温试验结果与第 0 天比较：*P 高湿试验取 3 批样品，将全部样品放置于密闭容器中，于 25 、相对湿度(905)%条件下放置 10 d，分别于第 5 天和第 10 天取样测定，结果见表 3。由结果可见：在高湿条件下，鲑降钙素含量稍微下降，但差异没有显著性，可见湿度对本品影响不大。表 3 鲑降钙素喷鼻剂高湿度因素试验结果7 / 8加速试验取 3 批样品，全部样品放置于(252) ，相对湿度(6010)%的恒温箱中，放置 6 个月，分别于0、1、2、3、6 个月取样测定，结果见表 4。 由表 4 可见：在(252) 加速试验条件下，鲑降钙素喷鼻剂的外观、pH 值、装量无明显的变化;在第 3 个月时本品的含量下降达 10%以上，有关物质项亦不符合标准中的规定，表明本品在室温条件下的有效期不超过 3 个月。长期试验取 3 批样品，全部样品放置于(53) 、相对湿度(6010)%的恒温箱中，放置 12 个月，分别于0、3、6、9、12 个月取样测定，结果见表 5。表 4 鲑降钙素喷鼻剂加速试验结果表 5 鲑降钙素喷鼻剂长期试验结果按照中国药典规定，对温度特别敏感的药物制剂的长期试验可在(53) 、相对湿度(6010)%的条件下进行。从表 5 可见：放置第 6 个月后，鲑降钙素与第 0月相比虽有所下降，但含量均符合中国药典的规定(%)，继续观察至 24 个月，仍符合规定。4 讨论鲑降钙素在酸性溶液中较稳定，在中性和碱性环境中容易降解2，4。因此本试验使用的流动相 pH 值为，且8 / 8选用磷酸二氢钠溶液为稀释液，以保证其在测定过程中的稳定性