培养基的质量控制

作作 业业 指指 导导 书书 编号 HSCDC GC 76 2009HSCDC GC 76 2009 版本 修改次 1 0 惠山疾控惠山疾控 培养基质量控制规程培养基质量控制规程 第 1 页 共 6 页 1 1 目的目的 规范本中心微生物实验室培养基的内部质量控制工作 2 2 适用范围 适用范围 适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收 使用过程中的质量控制 3 3 职责职责 3 1 检验人员 按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制 确保培养 基符合相关标准的要求 3 2 科室负责人 负责指导 监督检验人员对培养基进行质量控制 4 4 使用前的质量控制 使用前的质量控制 4 14 1 生产企业提供的材料生产企业提供的材料 培养基生产厂家随产品应提供下列文件 培养基 独立成分 添加成分名称 批号 使用前的 pH 储藏信息和有效期 性能评 价和所用测试菌株 技术数据清单 质控证书 必要的安全 危害数据 4 24 2 验收验收 实验室收到培养基后 应填写 培养基验收检查记录单 检查包装及完整性 标识 是否清晰等 验收合格后按照 培养基编码系统使用规程 对培养基进行编号 4 34 3 贮存及使用前质量确认贮存及使用前质量确认 4 3 1 商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件 有效期进行贮存 4 3 2 验收合格的培养基应建立 商品化干粉培养基目录清单 使用前对容器密闭 性进行复查 4 3 3 开封的脱水培养基 每次使用前应对其质量进行检查 通过粉末的流动性 均 匀性 结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化 若发现培养基受潮或物理性状发生 明显改变则不应再使用 4 3 4 制备好的成品培养基应建立 成品培养基目录清单 每次使用前应检查 颜 色是否发生变化 是否蒸发 脱水 是否有微生物生长 等 如果发生上述异常情况 则 不应再使用 5 5 制备好的成品培养基的质量控制 制备好的成品培养基的质量控制 新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试 符合要求后使用 成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试 根据测试结果及时 填写 实验室制备培养基测试结果记录单 5 15 1 物理指标控制物理指标控制 5 1 1 测试 20 25 的 pH 值 5 1 2 琼脂层厚度 色泽 透明度和 或 是否存在肉眼可见杂质 凝胶稳定性 粘 稠度和湿度 5 25 2 微生物学指标控制微生物学指标控制 可根据要求选用定量方法 半定量方法或定性方法 详见表 1 表 对培养基性能进行 测试 具体操作方法详见作业指导书 培养基性能测试指南 5 2 15 2 1 微生物污染的控制微生物污染的控制 从每批制备好的培养基中选取至少一个 或 1 平板或试管 置于 37 或按特定标 准中规定的温度培养 18h 5 2 25 2 2 生长特性生长特性 5 2 2 15 2 2 1 生长率生长率 作作 业业 指指 导导 书书 编号 HSCDC GC 76 2009HSCDC GC 76 2009 版本 修改次 1 0 惠山疾控惠山疾控 培养基质量控制规程培养基质量控制规程 第 2 页 共 6 页 将适量测试菌株的工作培养物接种至固体 半固体和液体培养基中 每种培养基上菌 株的生长率应达规定的最低限值 5 2 2 1 1 定量方法 生长率 PR的计算 PR NS NO NS 从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数 N0 从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数 该菌落总数应 100cfu 要求 非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为 0 7 该类培养基应易于目标菌生 长 选择性培养基上目标菌的生长率最低应为 0 1 每平板 或每试管 的接种水平为 10CFU 100CFU 5 2 2 1 2 半定量方法 半定量方法采用生态测量技术在平板上划线 平板板连续划线区域得分的总和即为生 长指数 G G 值不应超过标准规定的允许范围 5 2 2 1 3 定性方法 定性方法采用划线法观察 5 2 2 25 2 2 2 选择性选择性 将浓度为 104CFU mL 106CFU mL 的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考 培养基中 培养基的选择性应达到规定值 5 2 2 2 15 2 2 2 1 定量方法定量方法 选择因子 SF SF DO DS DO 能在参考培养基上生长至少 10 个菌落的最高稀释度 DS 能在测试培养基上显示生长的最高稀释度 要求 非目标菌在选择性培养基上的 SF至少为 2 半定量和定量法中 非目标菌应 部分或全部被抑制 5 2 35 2 3 生理生化特性 选择性和特异性 生理生化特性 选择性和特异性 规定培养基的基本特性 使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特 性 菌落形态 大小等 和非目标菌的被抑制程度进行测试 5 35 3 性能评价和结果解释性能评价和结果解释 按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定 则该批培养基品质优良 若只有物 理指标和微生物指标符合规定 则该批培养基可被接收 表 1 计数用选择性培养基 培养基用途培养条件测试菌株 参考培 养基 控制 方法 判定标准特征反应 生长率 37 24 48h 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 25923 TSA定量PR 0 5 黑色 灰色菌落 周 围为一混浊带 其外 有透明带 选择性37 48h 大肠杆菌 ATCC25922 8739 定性全部抑制 Baird Parker S 特异性 37 24 48h 表皮葡萄球菌 ATCC12228 定性 黑色 灰色菌落 周 围为一混浊带 其外 无透明带 生长率 30 24 48h 腊样芽胞杆菌 ATCC11778 TSA定量PR 0 7具沉淀带的粉色菌落 选择性37 48h 大肠杆菌 ATCC25922 定性全部抑制 MYP S 特异性37 48h 枯草芽胞杆菌 ATCC6633 定性 不具沉淀带的粉色菌 落 作作 业业 指指 导导 书书 编号 HSCDC GC 76 2009HSCDC GC 76 2009 版本 修改次 1 0 惠山疾控惠山疾控 培养基质量控制规程培养基质量控制规程 第 3 页 共 6 页 表 1 计数用选择性培养基 续 培养基用途培养条件测试菌株 参考培 养基 控制 方法 判定标准特征反应 大肠杆菌 ATCC25922 8739 生长率37 24h 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 TSA定量PR 0 5 带有或不带沉淀带的 粉红色或红色菌落 VRBG 结 晶紫中性 红胆盐葡 萄糖琼脂 S 选择性37 20h 粪链球菌 ATCC29212 19433 定性全部抑制 生长率30 20h 大肠杆菌 ATCC25922 8739 TSA定量PR 0 5 带有或不带沉淀带的 淡紫色菌落 选择性30 20h 粪链球菌 ATCC29212 19433 定性全部抑制 VRBL 紫 红胆汁乳 糖 S 特异性30 20h 铜绿假单胞菌 ATCC27853 定性 无色至浅棕色菌落 生长率37 24h 大肠杆菌 O157 H7 ATCC43894 43895 TSA定量PR 0 5 透明菌落 表面淡黄 棕色 菌落直径约 1mm 选择性37 24h 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 25923 定性全部抑制 CT SMAC 改 良山梨醇 麦康凯琼 脂 S 特异性37 24h 大肠杆菌 ATCC11775 25922 定性 粉色菌落 大肠杆菌 ATCC25922 8739 生长率 弗氏柠檬酸杆菌 ATCC25922 8739 半定 量 浊度 2 导管 1 3 产气 产气并浑浊 BGBLB 煌 绿乳糖胆 盐肉汤 L 选择性 30 24 48h 粪链球菌 ATCC29212 19433 TSA 定性不生长 生长率 44 24 48h 大肠杆菌 ATCC25922 半定 量 浊度 2 导气管 1 3 产气 产气并浑浊 EC L 选择性 44 24 48h 铜绿假单胞菌 ATCC27853b 定性不生长 生长率 44 24 48h 大肠杆菌 ATCC25922 半定 量 浊度 2 导气管 1 3 产气 产气并浑浊 产生荧 光 EC MUG LS MUG L 选择性 44 24 48h 铜绿假单胞菌 ATCC27853b 定性不生长 生长率 37 24h 大肠杆菌 ATCC25922 半定 量 导气管 1 3 产气 产气并变黄色乳糖胆盐 发酵培养 L 选择性 37 24h 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 定性 不产气 仍为紫色 生长率 37 24h 大肠杆菌 ATCC25922 半定 量 导气管 1 3 产气 LST 月桂 酸肉汤 L 选择性 37 24h 福氏志贺氏菌 CMCC51572 定性 表 2 计数用非选择性培养基 培养基用途 培养条 件 测试菌株 参考培 养基 控制 方法 判定标准特征反应 大肠杆菌 ATCC25922 8739 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 PCA 平 板计数 琼脂 S 生长率30 72h 枯草芽孢杆菌 ATCC6633 TSA定量PR 0 7 作作 业业 指指 导导 书书 编号 HSCDC GC 76 2009HSCDC GC 76 2009 版本 修改次 1 0 惠山疾控惠山疾控 培养基质量控制规程培养基质量控制规程 第 4 页 共 6 页 表 3 选择性增菌培养基 培养基用途 培养条 件 测试菌株 控制方 法 判定标准特征反应 大肠杆菌 ATCC25922 8739 生长率37 24h 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 VRBG 上 10CFUEE L 选择性 粪肠球菌 ATCC29212 半定量 全部抑制 粉红至红色菌 落 有或没有 沉淀带 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 肠炎沙门氏菌 ATCC13076 生长率 41 5 2 4h 铜绿假单胞菌 ATCC27853 半定量 XLD 或其他选 择性培养基上 10CFU 大肠杆菌 ATCC25922 TSA 上全抑制 RVS L 选择性 41 5 2 4h粪链球菌 ATCC29212 半定量 TSA 上 10CFU 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 大肠杆菌 ATCC25922 生长率37 24h 铜绿假单胞菌 ATCC27853b 半定量 XLD 或其他选 择性培养基上 10CFU 不同培养基上 菌落特征不同 见标准 大肠杆菌 ATCC25922 SC 亚硒 酸盐胱 氨酸 L 选择性37 24h 粪链球菌 ATCC29212 半定量 TSA 上 10CFU 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 生长率37 24h 伤寒沙门菌 CMCC50071 XLD 或其他选 择性培养基上 10CFU 不同培养基上 菌落特征不同 见标准 TTB 四 硫磺酸 钠煌绿 增菌液 L 选择性37 24h 大肠杆菌 ATCC25922 半定量 TSA 上 10CFU 霍乱弧菌 CMCC16109 生长率37 24h 副溶血性弧菌 CMCC20001 TCBS 或其他 选择性培养基 上 10CFU 不同培养基上 菌落特征不同 见标准 大肠杆菌 ATCC25922 8739 碱性蛋 白胨水 L 选择性37 24h 福氏志贺氏菌 CMCC51572 半定量 TSA 上 10CFU 7 5 氯 化钠肉 汤 L 生长率37 24h 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 半定量 B P 平板或其 他培养基上 10CFU 不同培养基上 菌落特征不同 见标准 表 4 非选择性增菌培养基 培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应 BHI生长率37 24h 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 定性浊度 1 2 大肠杆菌 ATCC25922 蛋白胨 盐 L 稀释 20 25 45min金黄色葡萄球菌 ATCC25923 定量 50 菌落数 至 50 原始 菌落数 作作 业业 指指 导导 书书 编号 HSCDC GC 76 2009HSCDC GC 76 2009 版本 修改次 1 0 惠山疾控惠山疾控 培养基质量控制规程培养基质量控制规程 第 5 页 共 6 页 表 4 非选择性增菌培养基 续 培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应 生长率37 24h 大肠杆菌 ATCC25922 定性 导气管 1 3 产 气 乳糖蛋 白胨肉 汤 L 选择性37 24h 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 定性 铜绿假单胞菌 ATCC27853 大肠杆菌 ATCC25922 SCDLP 液 体培养 基 L 生长率37 24h 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 定性浊度 1 2 液体沙 氏培养 基 L 生长率26 5 天 白色念珠菌 CMCC98001 定性浊度 1 2 真菌培 养基 L 生长率26 5 天 白色念珠菌 CMCC98001 定性浊度 1 2 表 5 选择性分离培养基 培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 菌落呈黑色 有金属 光泽 生长率 福氏志贺氏菌 CMCC51572 良好生长 2 菌落呈棕色 大肠杆菌 ATCC25922 8739 全部或部分 抑制 0 1 无典型菌落 亚硫酸酸 铋琼脂 BS S 选择性 37 48h 粪链球菌 ATCC29212 19433 定性 全部抑制 0 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 菌落呈黑色 生长率 福氏志贺氏菌 CMCC51573 良好生长 2 菌落呈无色 大肠杆菌 ATCC25922 8739 全部或部分 抑制 0 1 无典型菌落 XLD S 选择性 37 24h 粪链球菌 ATCC29212 19433 定性 全部抑制 0 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 25923 定性良好生长 溶血 透明溶血环血琼脂平 板 S 生长率 37 24 48h 粪链球菌 ATCC29212 定性良好生长 溶血 草绿色溶血 环 霍乱弧菌 CMCC16109 定性良好生长菌落较大 呈黄色 TCBS S 生长率 37 24 48h副溶血性弧菌 CMCC20001 定性良好生长菌落较大 呈绿色 霍乱弧菌 CMCC16109 定性良好生长 菌落较大 扁平透明 湿润 中心带有黑色 生长率 37 24 48h非 O1 群霍乱弧菌 CMCC17045 定性良好生长 菌落较大 扁平透明 湿润 中心带有黑色 4 号琼脂 S 选择性37 24h 大肠杆菌 ATCC25922 8739 定性 全部或部分 抑制 0 1 作作 业业 指指 导导 书书 编号 HSCDC GC 76 2009HSCDC GC 76 2009 版本 修改次 1 0 惠山疾控惠山疾控 培养基质量控制规程培养基质量控制规程 第 6 页 共 6 页 表 5 选择性分离培养基 续 培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应 大肠杆菌 ATCC25922 8739 定性良好生长 菌落紫黑色带金属光泽 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 定性良好生长 菌落灰白色半透明 伊红美兰 琼脂 S 生长率37 24h 福氏志贺氏菌 CMCC51573 定性良好生长 菌落灰白色半透明 大肠杆菌 ATCC25922 8739 定性良好生长 斜面及底层均变黄 产 气 硫化氢阳性 普通变形杆菌 CMCC49001 定性良好生长 斜面及底层均变黄 产 气 硫化氢阳性 福氏志贺氏菌 CMCC51573 定性良好生长 底层变黄 斜面变红 不产气 硫化氢阴性 TSI 三糖 铁琼脂 S 生长率 37 24 48h 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028 定性良好生长 底层变黄 斜面变红 产气 硫化氢阳性 表 6 非选择性分离培养基 培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应 大肠杆菌 ATCC25922 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028c 营养琼 脂 S 生长率37 24h 小肠耶尔森氏菌 ATCC23715 定性 良好生长 2 5 5 记录