亚硝酸盐的测定

关于双汇 春都 雨润猪肉火腿肠中水分 蛋白质 脂肪 亚硝酸盐含 量的测定 一 研究对象双汇 春都 雨润猪肉火腿肠 二 研究方法 用直接干燥法测水分含量 用凯氏定氮法测蛋白质 含量 用索氏抽提法测脂肪的含量 用盐酸萘乙二胺法测亚硝酸盐含 量 第一法 直接干燥法 1 原理 食品中的水分一般是指在 100 左右直接干燥的情况下 所失去物质的总量 直接干燥法适用于在 95 105 下 不含或含其他挥发性物质甚微的食品 2 试剂 2 1 6N 盐酸 量取 100ml 盐酸 加水稀释至 200ml 2 2 6N 氢氧化钠溶液 称取 24g 氢氧化钠 加水溶解并稀释至 100ml 2 3 海砂 取用水洗去泥土的海砂或河砂 先用 6N 盐酸煮沸 0 5h 用水洗至中性 再用 6N 氢氧化钠溶液煮沸 0 5h 用水洗至中性 经 105 干燥备用 3 操作方法 3 1 固体样品 取洁净铝制或玻璃制的扁形称量瓶 置于 95 105 干燥箱中 瓶盖 斜支于瓶边 加热 0 5 1 0h 取出盖好 置干燥器内冷却 0 5h 称量 并重复干燥至恒量 称取 2 00 10 0g 切碎或磨细的样品 放入此称量瓶中 样品厚度约为 5mm 加盖 精密 称量后 置 95 105 干燥箱中 瓶盖斜支于瓶边 干燥 2 4h 后 盖好取出 放入干燥 器内冷却 0 5h 后称量 然后再放入 95 105 干燥箱中干燥 1h 左右 取出 放干燥器内冷 却 0 5h 后再称量 至前后两次质量差不超过 2mg 即为恒量 3 2 半固体或液体样品 取洁净的蒸发皿 内加 10 0g 海砂及一根小玻棒 置于 95 105 干燥箱中 干燥 0 5 1 0h 后取出 放入干燥器内冷却 0 5h 后称量 并重复干燥 至恒量 然后精密称取 5 10g 样品 置于蒸发皿中 用小玻棒搅匀放在沸水浴上蒸干 并 随时搅拌 擦去皿底的水滴 置 95 105 干燥箱中干燥 4h 后盖好取出 放入干燥器内冷 却 0 5h 后称量 以下按 3 1 自 然后再放入 95 105 干燥箱中干燥 1h 左右 起依法操作 3 3 计算 式中 X1 样品中水分的含量 m1 称量瓶 或蒸发皿加海砂 玻棒 和样品的质量 g m2 称量瓶 或蒸发皿加海砂 玻棒 和样品干燥后的质量 g m3 称量瓶 或蒸发皿加海砂 玻棒 的质量 g 理理 蛋白质是含氮的有机化合物 食品与硫酸和催化剂一同加热消化 使蛋白质分解 分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵 然后碱化蒸馏使氨游离 用硼酸吸收后再以硫酸或盐 酸标准溶液滴定 根据酸的消耗量乘以换算系数 即为蛋白质含量 1 有机物中的胺根在强热和 CuSO4 浓 H2SO4 作用下 硝化生成 NH4 2S O4 反应式为 2NH2 H2S04 2H NH4 2S04 其中 CuSO4 做催化剂 2 在凯氏定氮器中与碱作用 通过蒸馏释放出NH3 收集于 H3BO3 溶液中 反应式为 NH4 2SO4 2NaOH 2NH3 2H2O Na2SO4 2NH3 4H3BO3 NH4 2B4O7 5H2O 3 用已知浓度的 H2SO4 或 HCI 标准溶液滴定 根据 HCI 消耗的量计算出氮 的含量 然后乘以相应的换算因子 既得蛋白质的含量 反应式为 NH4 2B4O7 H2SO4 5H2O NH4 2SO4 4H3BO3 NH4 2B4O7 2HCl 5H2O 2NH4Cl 4H3BO3 试试剂剂 所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制 2 1 硫酸铜 2 2 硫酸钾 2 3 硫酸 2 4 2 硼酸溶液 2 5 混合指示液 1 份 0 1 甲基红乙醇溶液与 5 份 0 1 溴甲酚绿乙醇溶液临用 时混合 也可用 2 份 0 1 甲基红乙醇溶液与 1 份 0 1 次甲基蓝乙醇溶液临用时混合 2 6 40 氢氧化钠溶液 2 7 0 025mol L 硫酸标准溶液或 0 05mol L 盐酸标准溶液 仪仪器器 定氮蒸馏装置 如图所示 凯氏定氮法仪器 1 安全管 2 导管 3 汽水分离管 4 样品入口 5 塞子 6 冷凝管 7 吸收瓶 8 隔热液套 9 反应管 10 蒸汽发生瓶 编编辑辑本本段段 操操作作方方法法 1 样品处理 精密称取 0 2 2 0g 固体样品或 2 5g 半固体样品或吸取 10 20ml 液体样品 约相当氮 30 40mg 移入干燥的 100ml 或 500ml 定氮瓶中 加入 0 2 g 硫酸铜 6g 硫酸钾及 20 毫升硫酸 稍摇匀后于瓶口放一小漏斗 将瓶以45 度角 斜支于有小孔的石棉网上 小火加热 待内容物全部炭化 泡沫完全停止后 加强火力 并保持瓶内液体微沸 至液体呈蓝绿色澄清透明后 再继续加热0 5 小时 取下放 冷 小心加 20ml 水 放冷后 移入 100ml 容量瓶中 并用少量水洗定氮瓶 洗液并 入容量瓶中 再加水至刻度 混匀备用 取与处理样品相同量的硫酸铜 硫酸钾 浓硫 酸同一方法做试剂空白试验 2 按图装好定氮装置 于水蒸气发生器内装水约2 3 处加甲基红指示剂数滴及 数毫升硫酸 以保持水呈酸性 加入数粒玻璃珠以防暴沸 用调压器控制 加热煮沸水 蒸气发生瓶内的水 3 向接收瓶内加入 10ml 2 硼酸溶液及混合指示剂 1 滴 并使冷凝管的下端 插入液面下 吸取 10 0ml 样品消化液由小玻璃杯流入反应室 并以10ml 水洗涤小 烧杯使流入反应室内 塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞 将10ml 40 氢氧化钠溶液倒入 小玻璃杯 提起玻璃塞使其缓慢流入反应室 立即将玻璃盖塞紧 并加水于小玻璃杯以 防漏气 夹紧螺旋夹 开始蒸馏 蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内 蒸 馏 5min 移动接收瓶 使冷凝管下端离开液皿 再蒸馏1min 然后用少量水冲洗冷 凝管下端外部 取下接收瓶 以0 01N 硫酸或 0 01N 盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫 色为终点 同时吸取 10 0ml 试剂空白消化液按 3 操作 编编辑辑本本段段 计计算算 X V1 V2 N 0 014 m 10 100 F 100 X 样品中蛋白质的百分含量 g V1 样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积 ml V2 试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积 ml N 硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度 0 014 1N 硫酸或盐酸标准溶液 1ml 相当于氮克数 m 样品的质量 体积 g ml F 氮换算为蛋白质的系数 蛋白质中的氮含量一般为 15 17 6 按 16 计 算乘以 6 25 即为蛋白质 乳制品为 6 38 面粉为 5 70 玉米 高粱为 6 24 花生 为 5 46 米为 5 95 大豆及其制品为 5 71 肉与肉制品为 6 25 大麦 小米 燕麦 裸麦为 5 83 芝麻 向日葵为 5 30 编编辑辑本本段段 注注意意事事项项 1 样品应是均匀的 固体样品应预先研细混匀 液体样品应振摇或搅拌均匀 2 样品放入定氮瓶内时 不要沾附颈上 万一沾附可用少量水冲下 以免被 检样消化不完全 结果偏低 3 硝化时如不容易呈透明溶液 可将定氮瓶放冷后 慢慢加入30 过氧化 氢 H2O2 2 3ml 促使氧化 4 在整个消化过程中 不要用强火 保持和缓的沸腾 使火力集中在凯氏瓶 底部 以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下 使氮有损失 5 如硫酸缺少 过多的硫酸钾会引起氨的损失 这样会形成硫酸氢钾 而不 与氨作用 因此 当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时 要增加硫酸的量 6 加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点 硫酸铜为催化剂 硫酸铜在蒸馏时 作碱性反应的指示剂 7 混合指示剂在碱性溶液中呈绿色 在中性溶液中呈灰色 在酸性溶液中呈 红色 如果没有溴甲酚绿 可单独使用0 1 甲基红乙醇溶液 8 氨是否完全蒸馏出来 可用 PH 试纸试馏出液是否为碱性 9 吸收液也可以用 0 01 当量的酸代表硼酸 过剩的酸液用0 01N 碱液滴定 计算时 A 为试剂空白消耗碱液数 B 为样品消耗碱液数 N 为碱液浓度 其余均 相同 10 以硼酸为氨的吸收液 可省去标定碱液的操作 且硼酸的体积要求并不严 格 亦可免去用移液管 操作比较简便 11 向蒸馏瓶中加入浓碱时 往往出现褐色沉淀物 这是由于分解促进碱与加 入的硫酸铜反应 生成氢氧化铜 经加热后又分解生成氧化铜的沉淀 有时铜离子与氨 作用 生成深 l 蓝色的结合物 Cu NH3 4 2 12 这种测算方法本质是测出氮的含量 再作蛋白质含量的估算 只有在被测 物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量 目目的的 索氏抽提法 用于 粗脂肪含量的测定 脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中 测定脂肪的含量 可以作为鉴别其品质优劣的一个指标 脂肪含量的测定有很多方法 如抽提法 酸水解法 比重法 折射法 电测和核磁共振法等 目前国内外普遍采用 抽提法 其中 索索氏氏抽抽提提法法 Soxhlet extractor method 是公认的经典方法 也也是是 我我国国粮粮油油分分折折首首选选的的标标准准方方法法 编编辑辑本本段段 原原理理 采用索氏抽提法中的残余法 即用低沸点有机溶剂 乙醚或石油醚 回流抽提 除去样品中的粗脂肪 以样品与残渣重量之差 计算粗脂肪含量 由于有机溶剂的抽提 物中除脂肪外 还或多或少含有游离脂肪酸 甾醇 磷脂 蜡及色素等类脂物质 因而 抽提法测定的结果只能是粗脂肪 编编辑辑本本段段 实实验验材材料料 主主要要仪仪器器和和试试剂剂 1 实实验验材材料料 油料作物种子 中速 滤纸 2 仪仪器器 1 索氏脂肪抽提器 图 1 或 YG 型油分测定器 2 干燥器 直径 15 18cm 盛变色硅胶 3 不锈钢镊子 长 20cm 4 培养皿 5 分析天平 感量 0 001g 6 称量瓶 7 恒温水浴 8 烘箱 9 样品筛 60 目 3 试试剂剂 无水乙醚或低沸点石油醚 A R 编编辑辑本本段段 操操作作步步骤骤 1 切切片片 将滤纸切成 8cm 8cm 叠成一边不封口的纸包 用硬铅笔编写顺序号 按顺序排 列在培养皿中 将盛有滤纸包的培养皿移入105 2 烘箱中干燥 2h 取出放入干燥 器中 冷却至室温 按顺序将各滤纸包放人同一称量瓶中称重 记作a 称量时室 内相对湿度必须低于 70 2 包包装装和和干干燥燥 在上述已称重的滤纸包中装入3g 左右研细的样品 封好包口 放入105 2 的 烘箱中干燥 3h 移至干燥器中冷却至室温 按顺序号依次放入称量瓶中称重 记作 b 3 抽抽提提 将装有样品的滤纸包用长镊子放入抽提筒中 注入一次虹吸量的1 67 倍的无水 乙醚 使样品包完全浸没在乙醚中 连接好抽提器各部分 接通冷凝水水流 在恒温水 浴中进行抽提 调节水温在 70 80 之间 使冷凝下滴的乙醚成连珠状 120 150 滴 min 或回流 7 次 h 以上 抽提至抽取筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止 约 需 6 12h 抽提完毕后 用长镊子取出滤纸包 在通风处使乙醚挥发 抽提室温以 12 25 为宜 提取瓶中的乙醚另行回收 4 称称重重 待乙醚挥发之后 将滤纸包置于105 2 烘箱中干燥 2h 放入干燥器冷却至恒 重为止 记作 c 结结果果与与计计算算 粗脂肪含量 b c b a 100 式中 a 称量瓶加滤纸包重 g b 称量瓶加滤纸包和烘干样重 g c 称量瓶加滤纸包和抽提后烘干残渣重 g 附附注注 1 测定用样品 抽提器 抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理 这是因为 第一 抽提体系中有水 会使样品中的水溶性物质溶出 导致测定结果 偏高 第二 抽提体系中有水 则抽提溶剂易被水饱和 尤其是乙醚 可饱和约2 的水 从而影响抽提效率 第三 样品中有水 抽提溶剂不易渗入细胞组织内部 结果不易将脂肪抽提干净 2 试样粗细度要适宜 试样粉末过粗 脂肪不易抽提干净 试样粉末过细 则有可能透过滤纸孔隙随回流 溶剂流失 影响测定结果 3 索氏抽提法测定脂肪最大的不足是耗时过长 如能将样品先回流1 2 次 然后浸泡在溶剂中过夜 次日再继续抽提 则可明显缩短抽提时间 4 YG 型油分测定器容量大 适合于样品较多的选种鉴定工作使用 温度控 制在 70 左右 8h 可提取完毕 5 必须十分注意乙醚的安全使用 抽提室内严禁有明火存在或用明火加热 乙醚中不得含有过氧化物 保持抽提室内 良好通风 以防燃爆 乙醚中过氧化物的检查方法是 取适量乙醚 加入碘化钾溶液 用力摇动 放置 1min 若出现黄色则表明存在过氧化物 应进行处理后方可使用 处 理的方法是 将乙醚放入分液漏斗 先以1 5 乙醚量的稀 KOH 溶液洗涤 2 3 次 以除去乙醇 然后用盐酸酸化 加入1 5 乙醚量的 FeSO4 或 Na2SO3 溶液 振摇 静置 分层后弃去下层水溶液 以除去过氧化物 最后用水洗至中性 用无水CaCl 2 或无水 Na2SO4 脱水 并进行重蒸馏 操操作作细细节节 1 如何利用残余法测定油料作物种子中的粗脂肪含量 残余法测定油料作物种子中的粗脂肪含量 是用低沸点有机溶剂 乙醚或石油醚 回流抽提 除去样品中的粗脂肪 以样品与残渣重量之差 来计算粗脂肪含量 2 测定过程中为什么需要对样品 抽提器 抽提用有机溶剂都要进行脱水处理 进行脱水处理的原因有三 第一 抽提体系中有水 会使样品中的水溶性物质溶出 导致测定结果偏高 第二 抽提体系中有水 则抽提溶剂易被水饱和 尤其是乙醚 可饱和约 2 的水 从而影响抽提效率 第三 样品中有水 抽提溶剂不易渗入细胞 组织内部 结果不易将脂肪抽提干净 3 在实验过程中安全使用乙醚应注意哪些问题 抽提室内严禁有明火存在或用明火加热 乙醚中不得含有过氧化物 保持抽提室内 良好通风 以防燃爆 4 测定样品粒子粗细有什么要求 试样粗细度要适宜 试样粉末过粗 脂肪不易抽提干净 试样粉末过细 则有可能 透过滤纸孔隙随回流溶剂流失 影响测定结果 一 亚硝酸盐测定 2 原理 样品经沉淀蛋白质 除去脂肪后 在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后 再与 N 1 萘基乙二胺偶合形成紫红色染料 与标准比较定量 3 试剂 实验用水为蒸馏水 试剂不加说明者 均为分析纯试剂 3 1 氯化铵缓冲液 1L 容量瓶中加入 500mL 水 准确加入 20 0mL 盐酸 振荡混匀 准确加入 50mL 氢氧化铵 用水稀释至刻度 必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至 pH9 6 9 7 3 2 硫酸锌溶液 0 42mol L 称取 120g 硫酸锌 ZnSO4 H2O 用水溶解 并稀释至 1000mL 3 3 氢氧化钠溶液 20g L 称取 20g 氢氧化钠用水溶解 稀释至 1L 3 4 对氨基苯磺酸溶液 称取 10g 对氨基苯磺酸 溶于 700mL 水和 300mL 冰乙酸中 置棕色瓶中混匀 室温保存 3 5 N 1 萘基乙二胺溶液 1g L 称取 0 1gN 1 萘基乙二胺 加 60 乙酸溶解并 稀释至 100mL 混匀后 置棕色瓶中 在冰箱中保存 一周内稳定 3 6 显色剂 临用前将 N 1 萘基乙二胺溶液 1g L 和对氨基苯磺酸溶液等体积混合 3 7 亚硝酸钠标准溶液 准确称取 250 0mg 于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝酸钠 加 水溶解移入 500mL 容量瓶中 加 100mL 氯化铵缓冲液 加水稀释至刻度 混匀 在 4 避 光保存 此溶液每毫升相当于 500 g 的亚硝酸钠 3 8 亚硝酸钠标准使用液 临用前 吸取亚硝酸钠标准溶液 1 00mL 置于 100mL 容 量瓶中 加水稀释至刻度 此溶液每毫升相当于 5 0 g 亚硝酸钠 4 仪器 4 1 小型粉碎机 4 2 分光光度计 5 操作方法 5 1 样品处理 称取约 10 00g 粮食取 5g 经绞碎混匀样品 置于打碎机中 加 70mL 水和 12mL 氢氧 化钠溶液 20g L 混匀 用氢氧化钠溶液 20g L 调样品 pH 8 定量转移至 200mL 容量瓶 中加 10mL 硫酸锌溶液 混匀 如不产生白色沉淀 再补加 2 5mL 氢氧化钠 混匀 置 60 水浴中加热 10min 取出后冷至室温 加水至刻度 混匀 放置 0 5h 用滤纸过滤 弃去初滤液 20mL 收集滤液备用 5 2 测定 5 2 1 亚硝酸盐标准曲线的制备 吸取 0 0 5 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0mL 亚硝酸钠 标准使用液 相当于 0 2 5 5 10 15 20 25 g 亚硝酸钠 分别置于 25mL 带塞比色管 中 于标准管中分别加入 4 5mL 氯化铵缓冲液 加 2 5mL60 乙酸后立即加入 5 0mL 显色 剂 加水至刻度 混匀 在暗处静置 25min 用 1cm 比色杯 灵敏度低时可换 2cm 比色杯 以零管调节零点 于波长 550nm 处测吸光度 绘制标准曲线 低含量样品以制备低含量标准曲线计算 标准系列为 吸取 0 0 4 0 8 1 2 1 6 2 0mL 亚硝酸钠标准使用液 相当于 0 2 4 6 8 10 g 亚硝酸 钠 5 2 2 样品测定 吸取 10 0mL 上述滤液 5 1 于 25mL 带塞比色管中 自 5 2 1 于标准 管中分别加入 4 5mL 氯化铵缓冲液 起依法操作 同时做试剂空白 6 计算 式中 X1 样品中亚硝酸盐的含量 mg kg m1 样品质量 g m2 测定用样液中亚硝酸盐的质量 g V1 样品处理液总体积 mL V2 测定用样液体积 mL 结果的表述 报告算术均值的二位有效数 7 允许差 相对相差 10 数据 直接干燥法 干燥前 干燥后 再次干燥后 第三次干燥之后 双汇 31 95 28 96 28 74 28 74 春都 30 98 27 90 27 66 27 66 雨润 31 20 28 21 27 86 27 86 亚硝酸盐测定的 关于标准曲线的数据 0 00 0 048 0 20 0 062 0 40 0 074 0 60 0 095 0 80 0 106 1 00 0 120 1 50 0 159 2 00 0 195 2 50 0 234 关于样品的 你们今天测得就是 昨天测得这个我觉得有点问题 关于蛋白质和脂肪的数据得问别的组要 因为咱们是分工合作的 呵呵 三 亚硝酸盐的测定 1 1 实验原理 实验原理 亚硝酸钠有较好的水溶性 可用水浸取 亚硝酸盐在酸性条件 下与对氨基苯磺酸发生重氮反应形成重氮苯磺酸 无色 重氮盐 再与萘乙胺发生偶氮反应生成红色化合物 该化合物颜色的深浅与 样品中亚硝酸盐的浓度成正比 故可进行比色定量分析 2 仪器 恒温水浴 烧杯 玻璃棒 温度计 250 mL 容量瓶 25 mL 比色管 移液管 721 分光光度计 3 试剂 1 缓冲液 分析纯 HCl 2 mL 加水 40 mL 混匀后加分析纯浓 氨水 5 mL 再加水至 100 mL 定容 2 溴甲酚紫指示剂 溴甲酚紫 0 1g 溶于 100 mL 水中 3 饱和硫酸铝钾 分析纯 KAL SO4 2 20g 加 80 mL 水 微加 热溶解用上清液 4 亚硝酸钠标准液 2ug mL 精确称取在硫酸干燥器中放 置 24