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文档简介

小鼠骨髓染色体制备与观察 实验目的 掌握动物骨髓细胞染色体制片技术观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数 实验材料及流程 小鼠2n 40秋水仙素处理 收集骨髓细胞 低渗处理 固定 滴片 染色 水洗 镜检 秋水仙素处理 已完成 目的 抑制纺锤丝形成 增加中期分裂相细胞的比例方法 腹腔注射0 01 秋水仙素溶液0 5ml等待2 4h 处死 每四人领取一只小鼠抓住小鼠尾巴将其转移到实验台上颈椎脱臼法 一手按住鼠头 另一手抓住鼠尾靠近根部用力向后拉 将脊髓与脑髓拉断 注意小鼠咬手 缓慢加力 解剖 剪去腿部附近皮毛 取出股骨胫骨 剃去周围肌肉组织 每人一节腿骨 收集骨髓细胞 剪去骨两端 注射器吸生理盐水 0 85 NaCl溶液 针头插入骨腔反复冲洗几次 用1 5ml离心管收集骨髓细胞 不要多次重复吸取含有细胞的生理盐水 总体积不要超过1 5ml 离心 离心条件 2000rpm5min注意用相同溶液配平用注射器小心吸取上清 弃去 离心管内可以留少许液体 低渗处理 目的 使细胞内张力增大 细胞更容易破裂 染色体更分散 低渗液配方 0 075MKCl溶液离心收集细胞 去上清 加入1 5ml37 低渗液 振荡 轻弹管壁 使细胞分散 在37 培养箱中保温低渗30min 做好标记 固定 目的 终止细胞生长过程及一切生理生化反应 维持细胞结构不变 固定液配方 甲醇 乙酸 3 1离心收集细胞 去上清 沿管壁缓慢加入1 5ml固定液 离心2min 去上清 加入1 5ml固定液 振荡使细胞分散 室温固定30min 重悬 离心收集细胞 保留150ul固定液 可根据细胞量调整 振荡使细胞分散 滴片 目的 使细胞膜破裂 细胞核或核内染色体分散在载玻片上方法 从40cm以上的高度将细胞悬液滴在预冷的载玻片上 滴两滴 载玻片1 3和2 3处 滴加悬液时载玻片可适当倾斜 30度角 滴完后立即用嘴吹散细胞空气干燥注意 用废片和水练习动作冰片表面用滤纸擦拭干净 染色 水洗 镜检 染料 石碳酸品红染液覆盖所有细胞 载玻片下垫纸巾染色5min水洗 用较小的水流冲洗载玻片背面 流水将从载玻片边缘带走染液滤纸擦干载玻片背面水分 空气干燥 无需盖玻片 镜检10倍镜下锁定目标细胞 40倍镜下观察染色体 中期分裂相特点 染色体浓缩成棒状 着丝点在染色体末端可见三种形状的中期染色体 结果展示 注意事项 安全 老鼠咬手 染液和固定液不要接触皮肤离心前注意配平标记自己的样品管水洗过程中要时刻记住载玻片的样品面和背面待玻片完全干燥后再镜检 课堂及实验报告要求 课上完成实验记录 实验步骤 现象 教师签字课后补充完成全部实验报告 目的 原理 结果 讨论等其他细节 实验结果的要求 中期染色体照片 尽量找分散度适中 染色体数目完整 背景干净的区域拍照
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