高度特异性分离纯化带有标签的重组膜蛋白

产品名称 产品名称 PureCube Rho1D4 Agarose 德国生产商介绍德国生产商介绍 德国 Cube Biotech 是一家专注于蛋白纯化产品的生产商和服务商 尤其擅长于蛋白纯化及膜蛋白纯化 Cube Biotech 研发团队拥有逾 40 年经验致力于膜蛋 白的表达 纯化和结晶等研究 在生物医学研究相关的人体膜蛋白等方面 如 转运蛋白或 G 蛋白偶联受体 GPCRs 等有效的药物设计取决于膜蛋白结构信息的表达 依托在蛋白和 膜蛋白生物化学和有机化学等技术的实力 Cube Biotech 将专用于膜蛋白纯化的 Rho1D4 系列产品产业化 现已与全球多家高校实验室 科研机构 制药企业成为紧密的长期合作 伙伴 推进了欧美膜蛋白研究以及生物制药的进展 德国 Cube Biotech 系列产品应用已刊 登在 美国化学会 应用材料与界面 ACS Applied Materials Interfaces 等期刊 并且 PureCube Rho1D4 琼脂糖产品应用已被 Springer 旗下 Human Press 出版社出版的 Methods in Molecular Biology Series 分子生物学方法系列实验指南丛书 所采用 产品简介产品简介 PureCube Rho1D4 Agarose 是针对 Rho1D4 标签膜蛋白的亲和层析产品 Rho1D4 纯化体系是基于 Rho1D4 抗体与融合蛋白表面 Rho1D4 表位的高特异性结合而研 发的 适用于膜蛋白的纯化 具有 Rho1D4 表位序列标签的膜蛋白可以通过 PureCube Rho1D4 Agarose 利用 Rho tag 高特异性来纯化 德国 Cube Biotech 技术团队依托在蛋 白和膜蛋白生物化学和有机化学等技术的实力 将专用于膜蛋白纯化的 Rho1D4 系列蛋白 纯化体系的免疫亲和产品产业化 产品优势 产品优势 1 德国制造 欧美领先膜蛋白纯化产品供应商 2 结合能力可高达 3 4mg mL 3 高度特异性分离纯化带有标签的重组膜蛋白 4 可重复再生使用 5 有效的膜蛋白研究解决方案 可配合 Nanodisc 产品使用 6 PureCube Rho1D4 琼脂糖产品应用已被 Springer 旗下 Human Press 出版社出版的 Methods in Molecular Biology Series 分子生物学方法系列实验指南丛书 所采用 Mattle D et al 2015 Mammalian Expression Purification and Crystallization of Rhodopsin Variants Beata Jastrzebska ed Rhodopsin Methods and Protocols Methods in Molecular Biology vol 1271 Chapter 3 DOI 10 1007 978 1 4939 2330 4 3 Springer Science Business Media New York 产品详解 产品详解 对膜蛋白提取有高特异性和高产量对膜蛋白提取有高特异性和高产量 每个批次的 PureCube 凝胶均是按照严格的质量标准体系生产并严格检验 以确保每一批 分装的产品都有高的蛋白结合能力 通过与特异性抗原表位相互作用 辅以优化过的纯化 操作步骤 能使目标蛋白在洗脱组分中有高产出量 图 1 是对 CXC 趋化因子受体 4 CXCR4 的纯化溶于 Fos Choline 14 的带标签蛋白通过大肠杆菌表达 再经由含 PureCube Rho1D4 琼脂糖的层析柱纯化 用 Rho1D4 多肽作为洗脱液 4 次洗脱组分每 毫升共收集到 0 8mg 1 0mg 0 85mg 和 0 6mg 目标蛋白 蛋白印迹结果说明 CXCR4 大约是 65 kDa 和 35 kDa 这些条带是 39 7 kDa 膜蛋白的二聚体和单体 单体 二聚体 的分离以及去除洗脱肽段 可以通过排阻层析的方法实现 图图 1 用 用 PureCube Rho1D4 琼脂糖纯化琼脂糖纯化 CXCR4 大肠杆菌裂解液 TL 溶解在 Fos Choline 14 中 溶解的组分 SF 与装有 Rho1D4 抗体的免疫亲和层析柱相结合 平衡组分中没有测得损失目标蛋白 经分光光度计测定 CXCR4 在洗脱组分 E1 E4 中 得浓度范围在 0 6 1 0mg mL 什么是什么是 Rho1D4 Rho1D4 是细胞内牛视紫红质 C 末端的最后九位氨基酸 Rho1D4 得名于与该序列特异性 结合的单克隆抗体 该表位通过与 Rho1D4 抗体结合可作为针对膜蛋白的高特异性纯化标 签 表表 1 是有文献报道的使用是有文献报道的使用 Rho1D4 系统纯化膜蛋白的纯度和产率 系统纯化膜蛋白的纯度和产率 尽管很多用 Rho1D4 系 统纯化的膜蛋白均为 G 蛋白偶联受体家族 该系统也可以有助于辨别其他如转运体之类的 膜蛋白 IAC 免疫亲和层析 SEC 排阻层析 在 20 世纪 80 年代发现 Rho1D4 表位和配对抗体 当时通过将抗体偶联到 Sepharose 上 来纯化在猴肾细胞中表达的牛视紫红质 自此 Rho1D4 系统 标签 偶联抗体的亲和基 质 洗脱肽 开始用于少量膜蛋白的纯化 包括 G 蛋白偶联受体 GPCR ATP 结合转 运体 溶质反向转运体和一个四次跨膜蛋白 蛋白表达系统纯度产率 所有回收蛋白 采取的纯化步骤 hVN1R1 G 蛋白偶联受体 可诱导的 HEK293S 细胞系 哺乳动物 90 1mg 1g 细胞Rho1D4 IAC SEC FPR3 G 蛋白偶联受体 可诱导的 HEK293S 细胞系 哺乳动物 90 2mg 6g 细胞Rho1D4 IAC SEC TAAR5 G 蛋白偶联受体 可诱导的 HEK293S 细胞系 哺乳动物 90 1mg 9g 细胞Rho1D4 IAC SEC OR131 2 G 蛋白偶联受体 可诱导的 HEK293S 细胞系 哺乳动物 90 2 9mg 10g 细胞Rho1D4 IAC centrifugation hOR17 4 G 蛋白偶联受体 可诱导的 HEK293S 细胞系 哺乳动物 90 7 5mg 2 5L 培养物Rho1D4 IAC SEC hOR17 4 G 蛋白偶联受体 无细胞小麦胚芽提取物70 0 3mg mL 反应溶液 Rho1D4 IAC SEC CD81 四次跨膜蛋白 可诱导的 HEK293S 细胞系 哺乳动物 95 26 g 3 10 7 个细胞 Rho1D4 IAC AE1 溶质载体 S 啤酒系 BJ545793 2 5mg 18L 培养物 Rho1D4 IAC 图图 2 假设有 假设有 3 个跨膜域的膜蛋白 个跨膜域的膜蛋白 Rho1D4 标签加到膜蛋白 C 端 它的序列是 T E T S Q V A P A 通过转基因修饰在目标膜蛋白的 C 端 或 N 端 加上 Rho1D4 标签 如图 1 一旦配有 该序列 即可用装载有 Rho1D4 抗体的亲和基质捕获目标蛋白 并随后通过添加过量 Rho1D4 多肽 产生竞争性结合基质表面抗体来洗脱目标蛋白 用此方法洗脱比改变 pH 值等方式更加温和 Rho1D4 系统的一大优势是抗体与表位相互作用特异性非常高 而其另一大优势是洗脱目 的蛋白收率相当高 利用 Rho1D4 纯化的目标蛋白可用于功能性研究 如配体结合的特性 蛋白与蛋白间的相互作用 纯度是从低浓度经一步 Rho1D4 IAC 在反应溶液中得出的 产率是在洗脱成分浓缩并过 SEC 柱后计算 技术参数 技术参数 粒径大小32 60 m 蛋白结合能力 4mg mL pH 稳定性4 5 9 0 推荐流速0 5 2 0mL min 保存温度 4 8 相关产品相关产品 1 所有 PureCube 系列琼脂糖产品均提供用于自动液相色谱系统 如 FPLC 的预 装柱 提供 1mL 2 用于稀释样品或用于 pull down 实验 我们推荐使用 PureCube Rho1D4 Magbeads 磁珠 3 Rho1D4 抗体 这种抗体作为分离物质来生产 PureCube 的 Rho1D4 琼脂糖 也可 以在 Western Blot 实验或者 ELISA 实验中检测 rho tagged 蛋白 4 Rho1D4 多肽 在洗脱缓冲液中 Rho1D4 多肽竞争结合到亲和层析凝胶上然后释 放标签蛋白 相对于改变洗脱液的 pH 值来说提供了更温和的洗脱环境 Cube Biotech 提供了一系列的 Rho1D4 肽段 这些肽段已经被 PureCube Rho1D4 琼脂 糖验证 5 配合 Nanodisc 产品使用 是有效的膜蛋白提取解决方案 Rho1D4 多肽可以单独购买 也可以购买 PureCube Rho1D4 套装 详情请参见订货信息 以及公司官网 订货信息订货信息 33101PureCube Rho1D4 Agarose 1 ml 33102PureCube Rho1D4 Agarose 5 ml 33103PureCube Rho1D4 Agarose 10 ml 33301PureCube Rho1D4 Cartridge 1x1 ml 33305PureCube Rho1D4 Cartridge 1x5 ml 33199Rho Starter Set 1 PureCube Rho1D4 Agarose 1 ml Rho1D4 peptide 5 mg 33299Rho Starter