发酵染菌应急预案

发酵染菌应急预案 发酵部分 一 染菌确认与报告 1 染菌确认 a 连续 3 个样品镜检发现有杂菌且有增多趋势 无菌试验样品发现染菌 发酵各项理化指 标有明显异常变化的 可判断为染菌 b 怀疑染菌的罐 在不影响正常生产安排的前提下 继续培养 且取无菌样进行肉汤培养 同时做平皿划线分离 直到结论明确 2 染菌报告 发酵车间员工发现染菌和疑似染菌的情况 必须立即报告车间主任 发酵车间主任了解情 况后做初步判断 并通知菌种车间 中试车间及生产部经理 共同判断 分析 发酵车间应首先发现本车间的发酵染菌情况 否则车间主任和工艺员应负有责任 二 染菌现象描述 对染菌罐样品 应做以下描述 1 发现染菌的时间 确定从哪一个样品开始发现染菌 或怀疑染菌 之后的样品有没有同样的现象 杂菌量 有无变化 2 镜检描述 菌体形态 结合美兰和品红两种染色方法染色同时判断 比较所染杂菌与生产菌变化情况 的形态 染色深浅 大小 数量 与生产菌比较 注 镜检应观察 5 个视野以上 Bt 杆菌肽发酵液样品应稀释 10 倍再涂片镜检 3 理化指标 pH 变化情况 菌浓变化情况 对效价的影响 发酵液气味 附样品描述记录 染菌分析记录表 生产批号 罐号 取样时间 镜检情况 备注 分析讨论情况 结论 签名 年 月 日 处理措施 签名 年 月 日 预防措施 签名 年 月 日 三 染菌检查与分析 1 思想认知 发生染菌情况后 各车间负责人应实事求是 主动查找车间范围内的问题 杜绝本位主义 做到通力协作 齐心分析 查阅书籍 逻辑推理 认真检查 严格试验 广泛讨论 不辞 辛苦 2 染菌原因初步分析 a 种子罐早中期染菌 母瓶种子带菌 空气过滤器 漏菌 灭菌不到位 接种操作不严密 其他意外事件 如停电 阀门坏等 b 发酵罐早中期染菌 种子罐带菌 空气过滤器 漏菌 灭菌不到位 移种操作不严密 补料操作或补料液有问题 其他意外事件 如停电 阀门坏 设备漏等 3 杂菌分离 培养 对已确定染菌和隐性染菌的罐批 应取染菌发酵液 或疑似染菌的发酵液 无菌样 在平 皿上标明样品的品名 来源与取样时间 然后在超净工作台上进行平皿划线分离 在 37 恒 温箱内培养 每天在灯光下检查有无杂菌生长 观察杂菌菌落特征 并涂片镜检 确定所 染杂菌的类型 4 杂菌耐热性实验 取染菌发酵液 或疑似染菌的发酵液 4 瓶 标明品名 来源与取样时间取 1 瓶作对照 另 3 瓶分别在 110 115 121 灭菌 30 分钟 然后将四个样品定量接入肉汤培养基 在 37 恒温箱内培养 观察肉汤的培养情况 5 设备检查 a 空气净化系统 打开预 精过滤器壳体 拆检过滤器橡皮垫圈 检查是否有老化 断裂而失去密封效能 拆检预 精过滤器滤芯 检查是否有老化 断裂 滤芯外观孔目是否有堵塞 变形现象 拆检结束 安装壳体并对过滤器法兰接口 排污阀 空气取样阀 压力表丝口 空气阀 焊接缝等进行试压 试漏 密封性能需达到无泄漏标准 且预滤 精滤的压差应在 0 05MPa 的范围之内 b 罐体 阀门试漏 准备好洗衣粉水 刷子 盖好罐盖 关闭排气阀 开启进气阀 给发酵罐加压 当罐压 0 10MPa 时 即可对该罐进行试漏 试压试漏方法 试外漏时 把洗衣粉水喷涂在阀门阀盖 法兰或丝口上 及阀门整体外部 和管路焊缝等可能泄漏的地方 试内漏时 关闭待试阀门 把洗衣粉水喷涂在阀门排气管 孔上 经涂抹部分如有气泡产生 可以确定有漏点 应及时复检 c 蛇管 夹层试漏 放尽罐内积水 开空气吹干或用布擦干罐内壁 将蛇管 夹套内充满水 注意观察是否有水渗 出 也可将夹套内的水放尽 将压缩空气通入蛇管 夹套内 用洗衣粉水喷涂 注意观察 是否有气泡冒出 6 无菌试验 发现染菌的设备处理后应做无菌试验 a 培养基配方 原料名称 配比 酵母粉 0 5 玉米浆 3 葡萄糖 1 氯化钠 0 5 消前 pH6 5 7 0 b 培养条件 37 2 48hr 以上 注 消后应取样涂片镜检 作为镜检对照 7 菌种车间接种后 将肉汤培养基 15 20ml 倒入接种瓶中 与残留液混合 37 恒温 箱内培养 48hr 以上 8 环境检查与清洁 a 超净工作台沉降菌检测 b 菌种 发酵车间环境清洁 三 染菌处理 1 染菌料液的处理 参照 发酵异常现象的处理 SOP 2 设备处理 在染菌料液处理完后 在再次投料之前 先彻底清洗染菌发酵罐罐体 附件 同时进行严密 程度检查 以防渗漏 然后用甲醛等化学物质熏蒸处理 再用蒸汽灭菌 包括各种附属设备 四 预防措施与基础研究 1 空气系统 定时放水 保持干燥 定期拆检 在过滤器灭菌时要防止过滤介质被冲翻或烧灼 还要防止发酵液倒流入空气过滤器 内 2 设备检修 发酵罐及其附属设备应做到无 渗漏 无 死角 定期试漏 无菌操作室和菌种培养间定期消毒 以保持无菌状态 定期用甲醛熏消 3 操作要求 发酵罐放罐之后 对罐体和附属设备进行全面清洗和检查 清除罐内的残渣 除尽罐壁上的污 垢 清除罐内附件处的堆积物 培养基配制时要防止物料结块或带入异物 配料罐和输送料液系统要定时清洗消毒 对进入无菌室的全部物料 器械实行灭菌 4 人员培训 a 对新员工培训 应采取学徒制 指定有资质的技术工当师傅 并对新员工的学习进程做 好跟踪考核 保证其操作水平 b 对员工进行划线分离 无菌取样等基本操作培训 保证操作的准确性 一致性 c 定期开展岗位操作竞赛 对员工的操作质量进行考核 提高员工进行日常操作培训的积 极性 5 整理出公司各发酵产品正常生产时各周期的典型镜检照片各一套 收集典型的染菌料 液镜检照片和各种杂菌的镜检照片 6 研究不同的杂菌单独培养时的情况 如形态 生长速度 培养基成分 培养温度 通 气 计数式接种量等因素的影响 7 研究不同的杂菌和生产菌种混合培养时的情况 重点是观察在不同的混合时间混合