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文档简介

ELISA实验技术,徐 骎口腔临床免疫教研室口腔肿瘤生物实验室,本次实验课内容：,ELISA方法检测人血管内皮生长因子 VEGF 因子 方法： ELISA双抗体夹心法,实验课目的：,掌握ELISA方法的基本原理和特点掌握ELISA方法的分类掌握双抗体夹心法的基本实验操作,概况,酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) 1971年由瑞典学者Engrall和Perlmann, 荷兰学者weeman和Schuurs报道 开创了运用酶标记免疫技术进行液体标本中 微量物质测定的实验方法,ELISA方法的基本原理蛋白结合到固相载体表面，并保持其免疫活性结合成酶标抗原或抗体，并保持免疫活性和酶活性酶标的蛋白与相应的抗体或抗原反应后，酶催化底物形成有色物质，其颜色的深浅与标本中的抗原或抗体的量直接相关,ELISA方法的特点,灵敏 特异 简便 快速 稳定 实验过程耗时短,ELISA方法的基本类型,抗原测定法 竞争法 双抗体夹心法 改良双抗体夹心法 抑制性测定法 抗体测定法 间接法,竞争法,洗涤,洗涤,待测抗原,酶标抗原,双抗体夹心法,洗涤,洗涤,洗涤,待测抗原,间接法,洗涤,洗涤,洗涤,待测抗体,酶标抗抗体,实 验 要 点,标准品及样品制备 ELISA 实验步骤 实验结果分析,标准品 对倍稀释法 (31.25-1000pg/ml 梯度)标本 患者血清 （1500rpm 离心，10min）,标准品及标本样品制备,ELISA实验步骤,洗板步骤,甩尽孔内液体，吸水纸上拍干每空加洗涤液 350ul，30秒甩尽孔内液体，吸水纸上拍干重复3次,ELISA实验结果分析,标准品和标本的OD值减去空白孔的OD值绘制标准曲
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