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农杆菌介导转化法 08 1 一 简介 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌 它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位 并诱导产生冠痪瘤或发状根 根想农杆菌和发根农杆菌细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒 其上有一段T DNA 农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后 可将T DNA插入到植物基因组中 因此 农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系 人们将目的基因插入到经过改造的T DNA区 借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合 然后通过细胞和组织培养技术 再生出转基因植株 农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中 近年来 农杆菌介导转化在一些单子叶植物 尤其是水稻 中也得到了广泛应用 二 原理 农杆菌主要有两种 根癌农杆菌和发根农杆菌 根癌农杆菌能在自然条件下趋化性地感染140多种双子叶植物或裸子植物的受伤部位 并诱导产生冠瘿瘤 引发冠瘿瘤的原因是 Ti质粒上的T DNA上有8个左右的基因在植物细胞内表达 指导合成一种非常寻常的化合物冠瘿碱 进而引起转化细胞癌变 而发根农杆菌则诱导产生发状根 其特征是大量增生高度分支的根系 根癌农杆菌的Ti质粒和发根农杆菌的Ri质粒上有一段T DNA 农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后 可将T DNA插入到植物基因组中 因此 农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系 被誉为 自然界最小的遗传工程师 可以通过将目的基因插入到经过改造的T DNA区 借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移和整合 然后通过细胞和组织培养技术 得到转基因植物 三 操作方法 1 获取目的基因 用限制酶切割下目的基因 2 基因表达载体的构建 将目的基因与载体 大多数选用质粒 用DNA连接酶连接起来 3 将目的基因导入受体细胞 将含目的基因的重组质粒导入农杆菌 农杆菌为受体细胞 4 目的基因的检测与鉴定 用DNA分子杂交技术 分子杂交技术 抗原 抗体杂交 个体生物学几种方法进行检验 根据要求选取不同方法 5 最后将成功表达的细胞导入植物体内 对植物体进行个体生
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