荧光PCR法检测GBS的临床意义-贵州

THE CLINICAL SIGNIFICANCE OF TESTING GBS BY FQ-PCR,荧光PCR法检测 GBS的临床意义,国家-地方联合工程实验室钟菲菲,呵护生命 健康护航,B族链球菌的介绍,20世纪30年代国外学者 Fry报道了3例死于GBS引起的产后心内膜炎病例, 由此证实了GBS为人类致病菌。,20世纪60年代首次发现其可以导致严重的新生儿感染，引起新生儿死亡。,20世纪70年代，GBS已被证实为围产期母婴感染的主要致病菌之一，在围产医学中占有不可忽视的地位。,表面蛋白质Ag,荚膜多糖Ag(C抗原),肽聚糖,磷壁酸,B族链球菌(group B streptococcus,GBS)学名无乳链球菌，为革兰氏阳性球菌，寄居于阴道和直肠，属于条件致病菌。,B族链球菌的介绍,根据其是否溶血分：不完全溶血、完全溶血、不溶血3种。,根据其致病血清分：I a、I b、 I c、 II、 I V和V，其毒力荚膜多糖抗原、脂磷壁酸、神经氨酸酶等有关（发达国家（60%）发展中国家I b、 I c、 II（74%）。,(分娩前五周内检测，阴性预测值为95-98%)。,健康女性1535% 的生殖道和消化道中存在GBS菌落,而且种族、人群有明显区别。,GBS定植表现为一过性,间歇性或持久性,导致孕妇不同时期GBS检测结果不同。,性生活活跃,多次妊娠,妊娠期间糖尿病等因素更容易获得GBS。,B族链球菌流行病学,B族链球菌危害,母婴传播是新生儿感染的主要途径，母婴传播发生在临产，新生儿暴露于有族链球菌产道，可吞进和吸入细菌。,GBS阳性的孕妇中新生儿感染率,GBS对孕妇的危害,抑制乳酸杆菌生长，pH值升高，利于杂菌。,胎膜早破羊膜腔感染，早产、晚期先兆流产。,GBS对绒毛膜的吸附力及穿透力最强，宫内感染的主要原因。,GBS,胎膜早破,早产,刺激子宫收缩,GBS对孕妇的危害,关于263例高危孕妇的研究,GBS感染患者治疗后的情况如下: 早产62例中有13例GBS感染经治疗后，其中6例至37周后分娩，时间最长1个月，新生儿体重达2 600 g；胎膜早破早产136例中有31例GBS感染经治疗后，其中6例延长了孕周， 最长延长15天，达足月分娩；晚期先兆流产38例中有9例GBS感染，经过治疗，4例早产，孕周增长最长的达6周（24周入院至302周剖宫产结束分娩，早产儿体重1 800 g经抢救存活，随访6个月目前情况良好）。：经GBS干预治疗后,可延长孕周,使胎儿获得宫内生长机会，增加存活率和生存质量,降低极低出生体重儿和围产儿死亡率,减少母婴感染率及其并发症。,参考文献：中国妇幼保健2009年第24卷 B族溶血性链球菌感染与胎膜早破、早产、晚期先兆流产的关系与干预刘剑等.,GBS对孕妇的危害,GBS对新生儿的危害,症状包括呼吸窘迫，呼吸暂停，以败血症最常见，肺炎和脑膜炎是早发型的形式早期病死率高达50，近年来，为4-6无症状带菌母亲分娩传播。主要为足月儿 和 近 足 月儿 。,早发型感染危害,James Hanley. Neonatal infections: group B streptococcusJ. Clinical Evidence.,GBS对新生儿的危害,新生儿B族链球菌感染死亡1例分析,新生儿出生后3h吃奶差，反应欠佳；出生后8h情况加重，四肢微凉、体温正常；出生后13h呼吸急促、反应低下、刺激不哭。以败血症、呼吸功能不全、新生儿肺炎急转儿科；出生后21h病情进一步加重，提示严重感染、酸中毒、低钙及心肌受损；出生后38h出现呼吸表浅、暂停等；出生后41h呼吸首先停止，然后心跳停止，经抢救无效死亡。,资料来源：中国实用妇科与产科杂志2008年10月第24卷第10期 新生儿B族链球菌感染死亡1例分析,北京儿童医院新生儿肺炎死亡病例中B族链球菌的检测,收集200 例1953年至2004年间新生儿肺炎死亡病例回顾研究。死亡的200例肺炎患儿，有130例查实GBS阳性感染，高达65%。130例GBS阳性患儿，有74名7d，56名7d。早发型中29名为早产儿。200例患儿中，75例有完整临床资料。其中35例可查到一项或多项与GBS感染有关的危险因素，如早产，低体重，胎膜早破，羊水异常等，GBS检测结果均为阳性。结论：GBS是新生儿肺炎死亡病例中的重要病原，尤其在早发型肺炎病例中GBS感染占很大比重。,中华儿科杂志2006年11月第44卷第11期新生儿肺炎死亡病例中B族链球菌的检测,新生儿误诊分析1例,西南某三甲军区医院政委孙女出生后出现感染，经临床科室、检验科经验判断，疑似MRSA感染，建议临床使用万古霉素。政委不认可该结果。后经过荧光PCR法快速检测，确诊为B族链球菌感染，而临床的症状与链球菌感染表现相近，经过B族链球菌治疗方案后，2天即痊愈。,GBS对新生儿的危害,常表现为隐匿发病，最初为脑膜炎，如发烧，昏睡呕吐等，多伴败血症病死率约15%，但存活者30%-50%严重后遗症，痴呆、脑积水，智力障碍等。感染一般系医院内感染，90%主要是型引起发病多为产科并发症的早产儿和低体重儿，发病率是足月的7倍，若发生脓毒血症，病死率高。,晚发型感染危害,新生儿B族链球菌脑膜炎13例临床分析和随访,温州某医院2005年至2013年5月收治的13例新生儿B族链球菌脑膜炎的临床资料进行回顾性分析。13例患儿治愈7例，好转自动出院4例，因严重并发症死亡2例。出院1个月后1例早发型伴脑积水早产儿在家中死亡。 7例随访至1024个月：3例早发型患儿中，生长发育正常2例，运动发育落后1例；4例晚发型患儿，生长正常发育1例，运动发育落后2例，癫痫发作1例。结论：新生儿GBS脑膜炎住院时间长，死亡率高，易出现神经系统并发症和后遗症。,中华儿科杂志2014年2月第52卷第2期,90年代美国新生儿的发病率,1996年GBS的预防共识准则,1996年预防GBS的共识准则概述了两种方法，对确定需要的IAP妇女。基础筛查：在35-37周的胃肠道，泌尿生殖道基于风险的方法： 早产，胎膜早破18小时 或产时发热T38C,美国CDC预防共识准则,2011年,2014年,2010年,2015年,孕前和孕期保健指南（第一版）：建议在孕35-37周进行B族链球菌的筛查。,围产期GBS预防指南：所有孕妇于35-37周筛查。,早产临床诊断与治疗指南：筛查宫颈阴道GBS感染有可能预防早产。,胎膜早破的诊断与处理指南：明确指出胎膜早破是B 族溶血性链球菌上行性感染的高危因素，是导致孕妇产时及产褥期感染、胎儿感染及新生儿感染的重要病原菌，应重视GBS感染的防治。,中华医学会妇产科学分会,美国疾病预防控制中心建议,权威指南共识,全球常规筛查GBS的地区,中国部分省份及香港，日本等,德国、法国、西班牙、波兰、瑞士、意大利、比利时、捷克、斯诺文尼亚等,美国、加拿大,澳大利亚,肯尼亚,阿根廷,GBS检测方法,在羊血培养基上培养48h后的GBS菌落 ：形成灰白、光滑、圆形突起小菌落有明显的溶血圈。,GBS培养法,荧光PCR仪给出客观的判别标准,阳性,弱阳,阴性,PCR检测方法,B族链球菌核酸检测试剂盒（荧光PCR法）,优点：简便快捷、灵敏度高（物理破碎）重复性好、特异性强（分子信标）闭管操作、避免污染,国内首家，发明专利,GBS核酸检测试剂盒适用,生殖道分泌物和直肠分泌物,标本类型,荧光PCR法的取材方法,新生儿鼻咽拭子的取材方法,GBS感染检查时机及治疗方案,新生儿：母亲阳性、出生后有高危疑似GBS感染症状、同产房内有阳性者,不需要干预,GBS（+）,对症治疗,GBS（-）,产时高危因素：分娩时37 周，产时发热38 ,胎膜早破12小时,进行GBS检测,不需要干预,GBS（+）,立即干预,GBS（-）,不需要干预,孕3537周取阴道和直肠拭子检测上次新生儿GBS感染史本次妊娠有菌尿症,GBS（+）,立即干预,产前干预,有症状,无症状,GBS（-）,2010 GBS预防医疗指南：抗生素治疗方案,有无青霉素过敏,青霉素G，首次剂量500万单位,然后每4小时250300万单位，直至分娩或者氨苄西林，首次剂量2g，然后每4个小时1g，直到分娩,病人在接受青霉素或头孢菌素时有无出现下列任一症状？过敏症、血管性水肿、呼吸窘迫、荨麻疹,头孢唑啉，首次剂量2G，然后每8个小时1g，直到分娩,是否对红霉素和克林霉素敏感,万古霉素每12小时1g（静脉注射）直至分娩,克林霉素每8小时900mg（静脉注射）直至分娩,国内治疗推荐,3,2,1,中华医学会妇产科学分会产科学组,青霉素G 首次剂量480 万单位静脉滴注,240 万单位/4 h 直至分娩。或氨苄青霉素,负荷量2 g 静脉滴注,然后每4 小时1 g 的剂量静脉滴注直至分娩,对青霉素过敏者则选用头孢唑啉,2 g 作为起始剂量静脉滴注,然后每8 小时1 g 直至分娩。,对头孢菌素类过敏者则用红霉素500 mg,每6 小时1