常用培养基概念及配方

LB 培养基 是微生物学实验中最常用的培养基 用于一般细菌培养 特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养 用于培养大肠杆 菌 枯草杆菌等细菌 分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基 加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆 PDA 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 即 Potato Dextrose Agar Medium 依次对应马铃薯 葡萄糖 琼脂的英文 宜培养酵母菌 霉菌 蘑菇等真菌 改良 MC 培养基 用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数 原理 大豆蛋 白胨 牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源 维生素和生长因子 葡萄糖和 乳糖为可发酵糖类提供碳源 乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶 解 以辨别乳酸菌 琼脂是培养基的凝固剂 中性红为 pH 指示剂 MRS 培养基 乳酸菌培养基 由多种成分组成 适用于乳酸菌的生长 用来分离培养乳酸菌的一类培养基 一种常用的培养基 宜培养分离 乳酸菌 由于该培养基十分适于乳酸菌的生长 而且抑制其他菌的生 长 因此具有分离乳酸菌的功能 当乳酸菌长成后在培养基上显黄色 之后会变淡黑色 以此分离乳酸菌 乳酸菌 凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为 乳酸菌 这是一群相当庞杂的细菌 目前至少可分为 18 个属 共有 200 多种 除极少数外 其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重 要生理功能的菌群 其广泛存在于人体的肠道中 目前已被国内外生 物学家所证实 肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系 乳酸菌 指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢 革兰氏染色阳性细菌的总 称 常见菌种有双歧杆菌 保加利亚乳杆菌 嗜热链球菌和嗜酸乳杆 菌等 自配高浓度污水 葡萄糖5550 mg L NH4 2SO4 1170 mg L KH2PO4 170 mg L COD为5000 mg L 自配污水 葡萄糖555 mg L NH4 2SO4 117mg L KH2PO4 17 mg L CaC12 0 08 mg L MgSO4 1 534 mg L NaHCO3 550 8 mg L FeC13 6H2O 0 25 mg L C0D 500 mg L 氨氮为30 mg L 一 LB 培养基配制 1 升 LB 培养培养基需 蛋白胨 10g L 酵母粉 5 g L Nacl10 g L 单 双去离子水 琼脂 15 20g L 配制液体培养基不需要加 配制固体培 养基时加入 pH 值用 5mol L NaOH 溶液调至 7 2 7 4 用精密 pH 试 纸测定 配置完后在高压锅内高压灭菌 21min 二 YPD 培养基配制 酵母菌培养基 1 溶解酵母膏 酵母粉 yeast extract 10g L 蛋白胨 peptone 20g L 于单 双去离子水中 如制平板加入 20g L 琼脂粉 配制固体培养 基 2 高压灭菌 121 C 20min 3 加入 20g L 葡萄糖 dextrose 或 glucose 葡糖糖溶液灭菌后加入 防止与蛋白胨反应 注 葡萄糖 酵母粉 蛋白胨溶液混合后在高温下可能会发生化学反 应 导致培养基成分变化 所以要分别灭菌后再混合 葡萄糖可以过 滤除菌 也可以 115 15min 灭菌 三 MRS 培养基配制 乳酸菌培养基 蛋白胨 peptone 10g L 牛肉膏 beef extract 10g L 酵母菌粉 yeast extract 5g L 醋酸钠 乙酸钠 5g L 磷酸氢二钾 2g L 柠 檬酸铵 2g L 硫酸镁 0 2g L 硫酸锰 0 2g L 琼脂 20g L 吐温 80 1ml L 葡萄糖 20g L 因葡萄糖与蛋白胨发生反应因此需单独配制 pH 值用冰乙酸调至 6 2 6 6 用 pH 试纸 仪器均可 250 微升 L 四 琼脂糖凝胶配制 凝胶板大孔为 60ml 两小孔为 30ml 梳子有 5 微升 10 微升等 琼脂糖粉 10g 12g L TBE0 5 Tris 硼酸 是一种 PCR 技术中用到 的缓冲液 成分及终浓度 5 最终 pH 8 25 或 8 3 用蒸馏水稀释 至 0 5 1 琼脂糖凝胶的制备 称取 0 3g 琼脂糖 置于三角瓶中 加入 30ml TBE 或 TAE 缓液 置于三角瓶中 加入 30ml TBE 或 TAE 缓液 置于三 角瓶中 加入 30ml TBE 或 TAE 缓液 将该三角瓶置于微波炉加热至琼 脂糖溶解 将冷却至 65 左右的琼脂糖凝胶液 加入溴化乙锭 凝胶 染料 充分混匀 2 胶板的制备 取有机玻璃内槽 洗净 晾干 将有机玻璃内槽置于一水平位置 模具上 安好挡板 放好梳子 吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘 任其凝固 在距离底板 0 5 1 0mm 的位置上放置梳子 以便加入琼脂 糖后可以形成完好的加样孔 如果梳子距离玻璃板再近 则拔出梳子 时孔底将有破裂的危险 破裂后将使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏 将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中 使胶液缓慢地展开 直到在 整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层 凝胶的厚度在 3 5mm 之间 检 查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡 室温下静置 30min 左右 待 凝固完全后 轻轻拔出梳子 在胶板上即形成相互隔开的上样孔 制 好胶后将铺胶的有机玻璃内槽放在含有 0 5 1 TAE Tris 乙酸 或 TBE Tris 硼酸 工作液的电泳槽中使用 没过胶面 1mm 以上 五 培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称 即 Potato Dextrose Agar Medium 依次对应马铃薯 葡萄糖 琼脂的英文 一种常用的培养基 宜培养酵母菌 霉菌 蘑菇等真菌 配制配方 马铃薯200克 葡萄糖20克 琼脂15 20克 自来水1000毫 升 自然 PH 配制步骤 其做法是称取200g 马铃薯 洗净去皮切成小块 加水 煮烂 煮沸20 30分钟 能被玻璃棒戳破即可 用四层纱布过滤 再 据实际实验需要加葡萄糖和琼脂 继续加热搅拌混匀 稍冷却后再补 足水分至1000毫升 分装试管 加塞 包扎 灭菌 121 20分钟左 右后取出试管摆斜面 冷却后贮存备用 其他事项 1 培养基经灭菌后 必须放在37C 温箱培养24h 无菌生长者方可 使用 2 PDA 培养基一般不需要调 pH 对于要调节 pH 的培养基 一般用 pH 试纸测定其 pH 如果培养基偏酸或偏碱时 可用 lmol LNaOH 或 lmol L