DB37T 3852-2019 银杏培育指南 组培育苗

ICS65.020.01B 05DB37山东省地方标准DB37/T 38522019银杏培育指南组培育苗Guidebook for Ginkgo biloba cultivationTissue culture for seedlings2019 - 12 - 31发布2020 - 01 - 31实施山东省市场监督管理局发布DB37/T 38522019前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省自然资源厅提出并组织实施。本标准由山东省林业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东农业大学、山东省林木种质资源中心。本标准主要起草人：孙霞、邢世岩、单超、鲁仪增、孙立民、门晓妍、张谦、曹钟允、许楠、李影、董遥、倪召欣。3银杏培育指南组培育苗1 范围本标准规定了银杏组培育苗的外植体采集和消毒、培养基配制与保存、接种、瓶苗培养、炼苗与移栽、质量标准、商品苗包装、运输和档案管理等技术要求。本标准适用于银杏的组培育苗。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6001育苗技术规程LY/T 1882林木组织培养育苗技术规程3 外植体采集和消毒3.1 外植体采集外植体主要包括茎尖、茎段和胚。选取12年生生长健壮、具有品种典型性状的优良单株，取幼苗外围当年生幼嫩枝条，采集时间在34月；胚取当年种仁，种子采集时间为10月上中旬，沙藏贮存70 d90 d。种核除去外种皮、中种皮和内种皮，分离出种胚。3.2 外植体消毒3.2.1 茎尖和茎段茎尖和茎段剪去叶片，用肥皂水擦洗，然后用自来水冲洗干净，无菌操作台下依次用70 %酒精消毒30 s，含有吐温20的0.1 %氯化汞消毒8 min10 min，无菌水冲洗35次，然后用无菌滤纸吸去茎尖和茎段表面的水分。3.2.2 种胚种胚先用肥皂水擦洗，然后用自来水冲洗干净，无菌操作台下依次用70 %酒精消毒30 s，含有吐温20的0.1 %氯化汞消毒6 min8 min，无菌水冲洗35次，然后用无菌滤纸吸去种胚表面的水分。3.3 外植体制备3.3.1 茎尖和茎段在无菌环境下，剪取0.5 cm1.0 cm长的茎尖或1 cm2 cm长的茎段，每段留12个腋芽或顶芽，转入已消毒的培养皿中备用。3.3.2 胚将已消毒的种胚，转入培养皿中备用。4 培养基配制与保存培养基的配制与保存执行LY/T 1882标准。5 接种在无菌状态下，将培养皿中的外植体用镊子直插式接种于培养瓶中，每瓶接种23个。封口膜要及时捆绑，并将品种代号、培养基类型、个人编号以及接种日期标示在瓶上。6 瓶苗培养6.1 初代培养茎段外植体的初代培养使用芽诱导培养基，配方为MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.5 mg/L+0.20 % AC；胚外植体的初代培养使用MS培养基，pH 5.86.0。培养温度为25 2 ，置于1 500 lx2 000 lx的光照条件下培养10 d15 d，光照8 h/d12 h/d。6.2 增殖培养外植体增殖35倍后，剪成1.0 cm2.0 cm带芽小段，转入新的增殖培养基中。培养基配方为MS+NAA 0.10.5 mg/L+6-BA 0.12.0 mg/L+0.25 % AC。培养条件同初代培养。增殖周期为30 d45 d。6.3 复壮继代培养810代后进行复壮。6.4 生根培养选择生长健壮、叶色正常，高3 cm5 cm的嫩茎接种于生根培养基中，培养基配方为1/2MS+IBA 0.5 mg/L。培养条件同初代培养。7 炼苗与移栽7.1 瓶苗炼苗选取有活力，生长健壮，叶色正常，根数5条，根长0.8 cm的组培苗，温室自然光闭口炼苗23周，开口炼苗5 d9 d，温度保持25 3 。7.2 出瓶驯化洗净组培苗残留的培养基，移栽到无纺布容器中驯化。栽培基质采用细河沙+珍珠岩+草炭土，其体积比为1:1:2，使用前12 h24 h用0.5 %0.7 %的高锰酸钾消毒。驯化期间保持温度20 30 ，空气湿度70 %80 %，光照强烈时可使用遮光度60 %70 %的遮阳网遮阳。小苗长出新叶后，每7 d10 d喷施叶面肥一次。7.3 移栽经过25 d30 d驯化即可移栽至大田。7.4 苗期管理执行GB/T 6001标准。8 质量标准8.1 组培苗质量标准苗木粗壮、挺直、有活力，具原品种特性。苗高3 cm5 cm，叶片3片，大小协调、有层次感、色泽正常。根35条，根长适中，长势好。同一批次达标的组培苗在90 %以上，且培养基无污染。8.2 移栽苗的质量标准苗木健壮、挺拔，形态完整，具原品种特性。苗高5 cm10 cm，地径0.2 cm。叶片6片，大小协调，色泽正常。根系完整、发达。同一批次达标的组培苗在90 %以上，无检疫性病虫害。9 包装、运输9.1 包装瓶苗保留在培养瓶中，出瓶苗洗去琼脂后装入塑料小盒，移栽苗统一泡沫箱包装。可再加外包装。9