玉米淀粉检测作业指导书.

1 天 津 市 鸿 禄 食 品 有 限 公 司 玉玉 米米 淀淀 粉粉 检检 测测 作作 业业 指指 导导 书书 2 目目 录录 第一章第一章 玉米淀粉水分的测定玉米淀粉水分的测定 第二章第二章 玉米淀粉酸度的测定玉米淀粉酸度的测定 第三章第三章 玉米淀粉灰分的测定玉米淀粉灰分的测定 第四章第四章 玉米淀粉斑点的测定玉米淀粉斑点的测定 第五章第五章 玉米淀粉细度的测定玉米淀粉细度的测定 第六章第六章 玉米淀粉脂肪的测定玉米淀粉脂肪的测定 第七章第七章 玉米淀粉蛋白质的测定玉米淀粉蛋白质的测定 第八章第八章 玉米淀粉白度的测定玉米淀粉白度的测定 第九章第九章 玉米淀粉大肠菌群的检测玉米淀粉大肠菌群的检测 第十章第十章 玉米淀粉菌落总数的测定玉米淀粉菌落总数的测定 3 第一章第一章 玉米淀粉水分的测定玉米淀粉水分的测定 执行标准 GB T 12087 一 2008 代替 GB T 12087 1989 淀粉水分的测定 烘箱法 1 范围 本标准规定了在常压条件下 采用烘箱在 130 烘干淀粉测定水分的方法 本标准适用于干燥的天然淀粉和变性淀粉的水分测定 本标准不适用于某些特殊淀粉的水分测定 如含有在 130 时不稳定物质的淀粉 2 原理 将试样放在温度为 130 133 的恒温烘箱内 于常压下烘干 90min 测定试样损失的质量 3 仪器 实验室常用仪器和下列仪器 3 1 分析天平 感量 0 001g 3 2 烘盒 用在测试条件下不受淀粉影响的金属 例如铝 制作 并有大小合适的盒盖 其有 效表面能使试样均匀分布时质量不超过 0 3g cm2 适宜尺寸为直径 55mm 65mm 高度 15mm 30mm 壁厚约 0 5mm 3 3 恒温烘箱 配有适当的空气循环装置的电加热器 能够使得测试样品周围的空气温度均 匀保持在 130 133 范围内 烘箱的热功率应能保证在烘箱温度调到 131 时 放入最大 数量的试样后 在 30min 内烘箱温度回升到 131 从而保证所有的样品同时干燥 3 4 干燥器 内置有效的干燥剂和一个使烘盒快速冷却的多孔厚隔板 4 试验样品 测试样品应没有任何结块 硬块 并应充分混匀后使用 样品应放在防潮 密闭的容 器内 测试样品取出后 应将剩余样品储存在相同的容器中 以备下次测试时再用 5 分析步骤 5 1 烘盒恒质 取干净的空烘盒 放在 130 烘箱内烘 30min 60min 取出烘盒置于干燥器内冷却至室 温 取出称量 再烘 30min 重复进行冷却 称量至前后两次质量差不超过 0 005g 即为恒 质 m0 5 2 样品及烘盒称量 精确称取 5g 士 0 25 g 充分混匀的试样 倒入恒质后的烘盒内 使试样均匀分布在盒 底表面上 盖上盒盖 立即称量烘盒和试样的总质量 m1 在整个过程中 应尽可能减 少烘盒在空气中的暴露时间 5 3 测定 称量结束后 将盒盖打开斜靠在烘盒旁 迅速将盛有试样的烘盒和盒盖放入已预热到 130 的恒温烘箱内 当烘箱温度恢复到 130 时开始计时 样品在 130 133 的条件下 烘 90 min 然后取出 并迅速盖上盒盖 放入干燥器中 在干燥器中 烘盒不可叠放 烘 盒在干燥器中冷却 30min 45min 至室温 然后将烘盒从干燥器内取出 在 2min 内精确称量 出样品和带盖烘盒的总质量 m2 对同一样品应进行两次平行测定 6 结果计算 按式计算 X m1 m2 100 m1 m0 式中 X 试样水分含量 mO 恒质后的空烘盒和盖的总质量 单位为克 g ml 干燥前带有样品的烘盒和盖的总质量 单位为克 g m2 干燥后带有样品的烘盒和盖的总质量 单位为克 g 4 如果两次平行测定结果的绝对差值没有超过 8 1 中给定的重复性的限度 则取两次测定结 果的算术平均值为最终测定结果 第二章第二章 玉米淀粉酸度的测定玉米淀粉酸度的测定 执行标准 GB T5009 53 2003 淀粉类制品卫生标准的分析方法 1 淀粉酸度 定义 淀粉酸度以 10 0g 试样消耗氧氧化钠溶液 0 1000mol L 的体积 mL 表示 2 试剂 2 1 氢氧化钠标准滴定溶液 c NaOH 0 1000mol L 2 2 酚酞指示液 称取 0 50g 酚酞溶解在乙醇 95 中并定容至 50 Oml 3 分析步骤 称取 5 0g 经研磨均匀的试样 置于 250 mL 锥形瓶中 加 30 0 mL 40 0mL 水 摇匀 使成糊状 加 5 滴酚酞指示液 用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至初现粉红色 0 5 min 不 褪色即为终点 4 结果计算 X V 2 c 0 1000 式中 X 一试祥酸度 0T y 试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积 单位为毫升 mL c 氢氧化钠标准滴定溶液浓度 单位为摩尔每升 mol L 0 1000 氢氧化钠标准滴定溶液 c NaOH O 1000mol L 的浓度 单位为摩尔每升 mol L 计算结果保留三位有效数字 5 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10 5 第三章第三章 玉米淀粉灰分的测定玉米淀粉灰分的测定 执行标准 GBT22427 1 2008 淀粉灰分测定 1 玉米淀粉灰分的测定 根据本标准规定的方法 将样品进行灰化后得到的残留物 2 原理 将样品在 900 高温下灰化 直到灰化样品的碳完全消失 得到样品的残留物 3 仪器 3 1 坩埚 由铂或在该测定条件下不受影响的材料制成 平底 容量为 40mL 最小可用表面 积为 15cm2 3 2 干燥器 内有有效充足的干燥剂和一个厚的多孔板 3 3 灰化炉 有控制和调节温度的装置 可提供 900 25 的灰化温度 3 4 分析天平 感量 0 0001g 3 5 电热板或本生灯 4 操作过程 4 1 坩埚预处理 不管是新的或是使用过的坩埚 必须先用沸腾的稀盐酸洗涤 再用大量自来水洗涤 最后用蒸馏水冲洗 将洗净的坩埚置于灰化炉内 在 900 25 下灼烧 30min 并在干燥器内冷却至室温 称重 精确至 0 0001g 4 2 称样 根据对样品灰分含量的估计 迅速称取样品 2g 10g 精确至 0 0001g 将样品均匀分 布在坩埚内 不要压紧 注 马铃薯淀粉 小麦淀粉以及大米淀粉至少称 5g 而玉米淀粉和木薯淀粉需要称 10 g 4 3 炭化 将钳祸置于灰化炉口 电热板或者本生灯上 半盖坩埚盖 小心加热使样品在通气情 况下完全炭化 直至无烟产生 燃烧会产生挥发性物质 耍避免自燃 自燃会使样品从坩埚中溅出而导致损失 4 4 灰化 炭化结束后 即刻将柑祸放人灰化炉内 将温度升高至 900 25 保持此温度直 至剩余的碳全部消失为止 一般 1h 可灰化完毕 打开炉门 将坩埚移至炉口冷却至 200 左右 然后将坩埚放入干燥器中使之冷却至室温 准确称重 精确至 0 0001g 每次放入干燥器的坩埚不得超过四个 4 5 测定次数 应进行平行实验 5 结果计算 5 1 计算方法 若灰分含量以样品残留物的质量占样品质量的百分比表示 计算公式见式 1 X m1 m0 100 1 若灰分含量以样品残留物的质量占样品干基质量的百分比表示 计算公式见式 2 X m1 100 100 m0 100 H 2 式中 X 一一样品的灰分含量 6 m1一一灰化后残留物的质量 单位为克 g m0 样品质量 单位为克 g H 一一样品按 GB T 22427 2 的规定方法测定的水分含量 取平行实验的算术平均值为结果 得到的结果之差应符合 7 2 对重复性的要求 实验结果保留两位小数 5 2 重复性 在灰分含量 质量分数 不大于 1 时 平行实验结果的绝对差值不应超过 0 02 在灰分 含量 质量分数 大于 1 时 绝对差值则不应超过算术平均值的 2 若重复性超出上述两种限值 应再重新做两次测定 6 实验报告 实验报告应列出 实验方法 实验得到的结果 进行重复性实验得到的两种实验结果 还应列出所有未列出的操作环节以及任何偶然可能影响实验结果的环节 实验报告应包括完全测试试样必需的所有信息 7 第四章第四章 玉米淀粉斑点的测定玉米淀粉斑点的测定 执行 GB T 22427 4 2008 淀粉斑点检验方法 1 范围 本标准规定了肉眼观察测定淀粉斑点的方法 本标准适用于干燥的粉末状淀粉和变性淀粉 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 斑点 spot 在规定条件下 用肉眼观察到的杂色点 3 原理 通过肉眼观察样品 读出斑点的数量 4 仪器 4 1 透明板 刻有 10 个方形格 1cm 1cm 的无色透明板口清洁 无污染 4 2 平板 白色 清洁 无污染 可均匀分布样品 5 操作过程 5 1 样品预处理 样品应充分混匀 5 2 称样 称取样品 10g 均匀分布在平板上 5 3 计数 将透明板盖到已均匀分布的样品上 并轻轻压平 在较好的光线下 眼与透明板的距 离保持 30cm 用肉眼观察样品中的斑点 并进行计数 记下 10 个空格内样品的斑点总数 量 注 分析人员的裸眼视力或矫正视力应在 1 0 以上 5 4 测定次数 应进行平行实验 6 结果计算 6 1 计算方法 结果以每平方厘米的斑点的数量表示 见式 1 X C 10 1 式中 X 样品的斑点 单位为个每平方厘米 个 cm2 C l0 个空格内斑点的总数 单位为个 取平行实验的算术平均值为结果 结果保留一位有效数字 6 2 重复性 平行实验结果的绝对差值 不应超过 1 0 若超出上述限值 应重新测定 7 实验报告 实验报告应列出 实验方法 一 实验得到的结果 进行重复性实验而得到的两种实验结果 8 还应列出所有未列出的操作环节以及任何偶然可能影响实验结果的环节 实验报告应包括完全测试试样必需的所有信息 第五章第五章 玉米淀粉细度的测定玉米淀粉细度的测定 执行 GB T 22427 5 2008 淀粉细度测定 1 范围 本标准规定了筛分法测定淀粉细度的方法 本标准适用于干燥的粉末状淀粉和变性淀粉 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 2 1 细度 fineness 用分样筛筛分样品 通过分样筛得到的筛下物质量与样品总质量的比值 3 原理 用分样筛进行筛分 通过分样筛得到样品质量的过程 4 仪器 4 1 天平 感量 0 1g 4 2 分样筛 金属丝编织筛网 根据产品要求选用规定的孔径 4 3 检验筛 金属丝编织筛网 根据产品要求选用规定的孔径 振动频率 1420 次 min 振幅 2mm 5mm 4 4 橡皮球 直径 5mm 5 操作过程 5 1 人工筛分法 5 1 1 样品预处理 样品应充分混匀 5 1 2 称样 称取样品 50g 精确至 0 1g 5 1 3 筛分 均匀摇动分样筛 直至筛分不下为止 称量筛下物 精确至 0 1g 5 2 标准检验筛筛分法 仲裁法 5 2 1 样品预处理 样品应充分混匀 5 2 2 称样 称取样品 50g 精确至 0 1g 5 2 3 筛分 将样品均匀地倒入检验筛中 放入橡皮球 5 个 固定筛体 振摇 10min 后 称量筛下 物 精确至 0 1g 5 3 测定次数 应进行平行实验 6 结果计算 6 1 计算方法 细度以筛下物占样品总质量的百分比表示 计算公式见式 1 X m1 m0 100 1 9 式中 X 样品细度 M 样品过筛的筛下物质量 单位为克 g m0 样品总质量 单位为克 g 取平行实验的算术平均值为结果 结果保留一位小数 6 2 重复性 平行实验结果的绝对差值 不应超过质量分数的 0 5 若超出上述限值 应再重新测定 7 实验报告 实验报告应列出 实验方法 实验得到的结果 进行重复性实验而得到的两种实验结果 还应列出所有未列出的操作环节以及任何偶然可能影响实验结果的环节 实验报告应包括完全测试试样必需的所有信息 10 第六章第六章 玉米淀粉脂肪的测定玉米淀粉脂肪的测定 执行 GB T 12309 1990 工业玉米淀粉 1 原理 用乙醚将样品中的脂肪抽提出来 干燥后 得到徉品的总脂肪剩余物质量占原样品质 量的百分率 2 仪器 a 索氏提取器 Soxhlet b 电水浴锅 c 烘箱 3 试剂与材料 a 无水乙醚 b 滤纸筒及脱脂滤纸 4 试验程序 精确称取绝十样品 5g 精确至 0 0001g 用经过干燥的脱脂滤纸将样品包好 置于滤 纸筒中 放入索氏提取器抽提筒内 将抽提筒与经过干燥的已知质量的抽提瓶连好 将乙 醚倒入抽提筒内至虹吸管高度上边 使乙醚虹吸下去 两次后 再倒入乙醚至虹吸管高度 2 3 处 装上冷凝管 在 65 蒸馏水的水浴上回流抽提 4h 取出滤纸筒 回收乙醚 至抽 提瓶中残留液为 1 2 mL 时 取下抽提瓶 在水浴上驱除残余的乙醚 洗净瓶外部 置于 105 烘箱中 烘至恒重 前后两次称量之差不得超过 0 2mg 取较小称量结果 5 计算 X7 m1 m2 100 m0 式中 X7 样品的脂肪 m1 抽提瓶和残留物的质量 g m2一 抽提瓶的质量 g m0一一绝干样品的质量 g 6 允许差 同一样品两次测定值之差应小于 0 5 最终结果保留二位小数 11 第七章第七章 玉米淀粉蛋白质的测定玉米淀粉蛋白质的测定 执行标准 GB T 12309 1990 工业玉米淀粉 微量定氮法 1 仪器设备 微量定氮装置如图 B1 所示 2 蒸馏 将消化好并冷却至室温的样品溶液全部转移到 100mL 容量瓶中 用水定容至刻度 摇 匀 向 100mL 接收瓶内加入 20mL2 硼酸溶液和一滴混合指示液 将接收瓶置于冷凝管下口 使下口浸入硼酸溶液中 再取 10mL 定容后的样品液 沿小玻璃杯移入反应室 并用少量 水冲洗小玻璃杯 塞紧棒状玻璃塞 向小玻璃杯 5 中加入 40mL400 氢氧化钠溶液 提 起玻璃塞 使氢氧化钠溶液缓慢流入反应室 6 立即塞紧玻璃塞 并在小玻璃杯中加水 使之密封 通入蒸气蒸馏 5min 降低接收瓶的位置 使冷凝管管口离开液面 继续蒸馏 12 1min 用少量水冲洗冷凝管管口 洗液并入接收瓶中 取下接收瓶 3 滴定 用 0 1mol L 盐酸标准溶液滴定收集液至刚刚出现紫红色为终点 同时做空白试验 4 计算 X V1 V0 0 014 C 6 25 100 m 0 1 式中 X 食品中蛋白质含量 V1一一样品试验消耗盐酸标准溶液的体积 mL V0 空白试验消耗盐酸标准溶液的体积 mL C 一一盐酸标准溶液的浓度 mol L 0 014 1mLlmol L 盐酸溶液相当于氮的质量 g m 样品质量 g 6 25 氮换算为蛋白质的系数 5 允许差 同一样品两次滴定 消耗盐酸标准溶液体积之差应小于 0 1mL 计算结果保留二位小 数 13 第八章第八章 玉米淀粉白度的测定玉米淀粉白度的测定 执行标准 GB T 22427 6 2008 淀粉白度测定 1 范围 本标准规定了用光反射式白度仪测定淀粉白度的方法 本标准适用于干燥的粉末状淀粉和变性淀粉 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 2 1 白度 whiteness 在规定条件下 样品表面蓝光反射率与标准白板表面光反射率的比值 3 原理 通过样品对蓝光的反射率与标准白板对蓝光的反射率进行对比 得到样品的白度 4 仪器 4 1 白度仪 波长可调至 457nm 有合适的样品盒及标准白板 读数须精确至 0 1 4 2 压样器 5 操作过程 5 1 样品预处理 样品应充分混匀 5 2 样品白板的制作 按白度仪所提供的样品盒装样 并根据白度仪所规定的方法制作样品白板 5 3 白度仪操作 按所规定的操作方法进行 用标有白度的优级纯氧化镁制成的标准白板进行校正 5 4 测定 用白度仪对样品白板进行测定 读取白度值 5 5 测定次数 应进行平行实验 6 结果表示 6 1 表示方法 白度以白度仪测得的样品白度值表示 取平行实验的算术平均值为结果 保留一位小数 6 2 重复性 平行实验结果的绝对差值 不应超过 0 2 若超出上述限值 应重新测定 7 实验报告 实验报告应列出 实验方法 实验得到的结果 进行重复性实验而得到的两种实验结果 还应列出所有未列出的操作环节以及任何偶然可能影响实验结果的环节 实验报告应包括完全测试试样必需的所有信息 14 第九章第九章 玉米淀粉大肠菌群的检测玉米淀粉大肠菌群的检测 执行标准 GB4789 3 2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验大肠菌群计数 1 1 设备和材料设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外 其他设备和材料如下 恒温培养箱 36 1 冰箱 2 5 恒温水浴箱 46 1 天平 感 量 0 1 g 均质器 振荡器 无菌吸管 1 mL 具 0 01 mL 刻度 10 mL 具 0 1 mL 刻 度 或微量移液器及吸头 无菌锥形瓶 容量 500 mL 无菌培养皿 直径 90 mm pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸 菌落计数器 2 2 培养基和试剂培养基和试剂 2 1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨 Lauryl Sulfate Tryptose LST 肉汤 见附录 A 中 A 1 2 2 煌绿乳糖胆盐 Brilliant Green Lactose Bile BGLB 肉汤 见附录 A 中 A 2 2 3 结晶紫中性红胆盐琼脂 Violet Red Bile Agar VRBA 见附录 A 中 A 3 2 4 磷酸盐缓冲液 见附录 A 中 A 4 2 5 无菌生理盐水 见附录 A 中 A 5 2 6 无菌 1 mol L NaOH 见附录 A 中 A 6 2 7 无菌 1 mol L HCl 见附录 A 中 A 7 第一法第一法 大肠菌群大肠菌群 MPNMPN 计数法计数法 3 3 检验程序检验程序 大肠菌群 MPN 计数的检验程序见图 1 15 图图 1 1 大肠菌群大肠菌群 MPNMPN 计数法检验程序计数法检验程序 6 6 操作步骤操作步骤 6 1 样品的稀释 6 1 1 固体和半固体样品 称取 25 g 样品 放入盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐 水的无菌均质杯内 8000 r min 10000 r min 均质 1 min 2 min 或放入盛有 225 mL 磷 酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中 用拍击式均质器拍打 1 min 2 min 制成 1 10 的样品匀液 6 1 2 液体样品 以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐 水的无菌锥形瓶 瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠 中 充分混匀 制成 1 10 的样品匀 液 6 1 3 样品匀液的 pH 值应在 6 5 7 5 之间 必要时分别用 1 mol L NaOH 或 1 mol L HCl 调节 6 1 4 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1 10 样品匀液 1 mL 沿管壁缓缓注入 9 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中 注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面 振 摇试管或换用 1 支 1 mL 无菌吸管反复吹打 使其混合均匀 制成 1 100 的样品匀液 6 1 5 根据对样品污染状况的估计 按上述操作 依次制成十倍递增系列稀释样品匀 液 每递增稀释 1 次 换用 1 支 1 mL 无菌吸管或吸头 从制备样品匀液至样品接种完毕 全过程不得超过 15 min 6 2 初发酵试验 每个样品 选择 3 个适宜的连续稀释度的样品匀液 液体样品可以选择原液 每个稀 释度接种 3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨 LST 肉汤 每管接种 1mL 如接种量超过 1 mL 则 用双料 LST 肉汤 36 1 培养 24 h 2 h 观察倒管内是否有气泡产生 24 h 2 h 产气者进行复发酵试验 如未产气则继续培养至 48 h 2 h 产气者进行复发酵试验 未 产气者为大肠菌群阴性 6 3 复发酵试验 用接种环从产气的 LST 肉汤管中分别取培养物 1 环 移种于煌绿乳糖胆盐肉汤 BGLB 管中 36 1 培养 48 h 2 h 观察产气情况 产气者 计为大肠菌群阳性 管 6 4 大肠菌群最可能数 MPN 的报告 按 6 3 确证的大肠菌群 LST 阳性管数 检索 MPN 表 见附录 B 报告每 g mL 样品 中大肠菌群的 MPN 值 第二法第二法 大肠菌群平板计数法大肠菌群平板计数法 7 7 检验程序检验程序 大肠菌群平板计数法的检验程序见图 2 8 8 操作步骤操作步骤 16 8 1 样品的稀释 按 6 1 进行 8 2 平板计数 图图 2 2 大肠菌群平板计数法检验程序大肠菌群平板计数法检验程序 8 2 1 选取 2 个 3 个适宜的连续稀释度 每个稀释度接种 2 个无菌平皿 每皿 1 mL 同时取 1 mL 生理盐水加入无菌平皿作空白对照 8 2 2 及时将 15 mL 20 mL 冷至 46 的结晶紫中性红胆盐琼脂 VRBA 约倾注于每 个平皿中 小心旋转平皿 将培养基与样液充分混匀 待琼脂凝固后 再加 3 mL 4 mLVRBA 覆盖平板表层 翻转平板 置于 36 1 培养 18 h 24 h 8 3 平板菌落数的选择 选取菌落数在 15 CFU 150 CFU 之间的平板 分别计数平板上出现的典型和可疑大肠 菌群菌落 典型菌落为紫红色 菌落周围有红色的胆盐沉淀环 菌落直径为 0 5 mm 或更 大 8 4 证实试验 从 VRBA 平板上挑取 10 个不同类型的典型和可疑菌落 分别移种于 BGLB 肉汤管内 36 1 培养 24 h 48 h 观察产气情况 凡 BGLB 肉汤管产气 即可报告为大肠菌 群阳性 8 5 大肠菌群平板计数的报告 经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以 8 3 中计数的平板菌落数 再乘以稀释倍 数 即为每 g mL 样品中大肠菌群数 例 10 4 样品稀释液 1 mL 在 VRBA 平板上有 100 个典型和可疑菌落 挑取其中 10 个接种 BGLB 肉汤管 证实有 6 个阳性管 则该样品 的大肠菌群数为 100 6 10 104 g mL 6 0 105CFU g mL 附录附录 A A 规范性附录 规范性附录 培养基和试剂培养基和试剂 A 1A 1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨 月桂基硫酸盐胰蛋白胨 LSTLST 肉汤 肉汤 A 1 1 成分 胰蛋白胨或胰酪胨 20 0 g 氯化钠 5 0 g 乳糖 5 0 g 磷酸氢二钾 K2HPO4 2 75 g 磷酸二氢钾 KH2PO4 2 75 g 月桂基硫酸钠 0 1 g 蒸馏水 1 000 mL pH 6 8 0 2 A 1 2 制法 将上述成分溶解于蒸馏水中 调节 pH 分装到有玻璃小倒管的试管中 每管 10 mL 121 高压灭菌 15 min A 2A 2 煌绿乳糖胆盐 煌绿乳糖胆盐 BGLBBGLB 肉汤 肉汤 A 2 1 成分 蛋白胨 10 0 g 乳糖 10 0 g 牛胆粉 oxgall 或 oxbile 溶液 200 mL 0 1 煌绿水溶液 13 3 mL 蒸馏水 800 mL 17 pH 7 2 0 1 A 2 2 制法 将蛋白胨 乳糖溶于约 500 mL 蒸馏水中 加入牛胆粉溶液 200 mL 将 20 0 g 脱水牛 胆粉溶于 200 mL 蒸馏水中 调节 pH 至 7 0 7 5 用蒸馏水稀释到 975 mL 调节 pH 再 加入 0 1 煌绿水溶液 13 3 mL 用蒸馏水补足到 1 000 mL 用棉花过滤后 分装到有玻璃 小倒管的试管中 每管 10 mL 121 高压灭菌 15 min A 3A 3 结晶紫中性红胆盐琼脂 结晶紫中性红胆盐琼脂 VRBAVRBA A 3 1 成分 蛋白胨 7 0 g 酵母膏 3 0 g 乳糖 10 0 g 氯化钠 5 0 g 胆盐或 3 号胆盐 1 5 g 中性红 0 03 g 结晶紫 0 002 g 琼脂 15 g 18 g 蒸馏水 1 000 mL pH 7 4 0 1 A 3 2 制法 将上述成分溶于蒸馏水中 静置几分钟 充分搅拌 调节 pH 煮沸 2 min 将培养基 冷却至 45 50 倾注平板 使用前临时制备 不得超过 3 h A 4A 4 磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液 A 4 1 成分 磷酸二氢钾 KH2PO4 34 0 g 蒸馏水 500 mL pH 7 2 A 4 2 制法 贮存液 称取 34 0 g 的磷酸二氢钾溶于 500 mL 蒸馏水中 用大约 175 mL 的 1 mol L 氢氧化钠溶液调节 pH 用蒸馏水稀释至 1 000 mL 后贮存于冰箱 稀释液 取贮存液 1 25 mL 用蒸馏水稀释至 1 000 mL 分装于适宜容器中 121 高压灭菌 15 min A 5A 5 无菌生理盐水无菌生理盐水 A 5 1 成分 氯化钠 8 5 g 蒸馏水 1 000 mL A 5 2 制法 称取 8 5 氯化钠溶于 1 000 mL 蒸馏水中 121 高压灭菌 15 min A 6A 6 1mol L1mol L NaOHNaOH A 6 1 成分 NaOH 40 0 g 蒸馏水 1000 mL A 6 2 制法 称取 40 g 氢氧化钠溶于 1 000 mL 蒸馏水中 121 高压灭菌 15 min A 7A 7 1 1 mol Lmol L HClHCl 18 A 7 1 成分 HCl 90 mL 蒸馏水 1 000 mL A 7 2 制法 移取浓盐酸 90 mL 用蒸馏水稀释至 1 000 mL 121 高压灭菌 15 min 附录附录 B B 规范性附录 规范性附录 大肠菌群最可能数 大肠菌群最可能数 MPNMPN 检索表 检索表 B 1B 1 大肠菌群最可能数 大肠菌群最可能数 MPNMPN 检索表 检索表 每 g mL 检样中大肠菌群最可能数 MPN 的检索见表 B 1 表表 B 1B 1 大肠菌群最可能数 大肠菌群最可能数 MPNMPN 检索表 检索表 19 第十章第十章 玉米淀粉菌落总数的测定玉米淀粉菌落总数的测定 执行标准 GB4789 2 2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验菌落总数测定 1 1 设备和材料设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外 其他设备和材料如下 恒温培养箱 36 1 30 1 冰箱 2 5 恒温水浴箱 46 1 天平 感量为 0 1 g 均质器 振荡器 无菌吸管 1 mL 具 0 01 mL 刻度 10 mL 具 0 1 mL 刻度 或微量移液器及吸头 无菌锥形瓶 容量 250 mL 500 mL 无菌 培养皿 直径 90 mm pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸 放大镜或 和菌落计数器 2 2 培养基和试剂培养基和试剂 2 1 平板计数琼脂培养基 见附录 A 中 A 1 2 2 磷酸盐缓冲液 见附录 A 中 A 2 2 3 无菌生理盐水 见附录 A 中 A 3 3 3 检验程序检验程序 菌落总数的检验程序见图 1 图图 1 1 菌落总数的检验程序菌落总数的检验程序 20 4 4 操作步骤操作步骤 4 1 样品的稀释 4 1 1 固体和半固体样品 称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无 菌均质杯内 8000 r min 10000 r min 均质 1 min 2 min 或放入盛有 225 mL 稀释液 的无菌均质袋中 用拍击式均质器拍打 1 min 2 min 制成 1 10 的样品匀液 4 1 2 液体样品 以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌锥形瓶 瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠 中 充分混匀 制成 1 10 的样品匀液 4 1 3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1 10 样品匀液 1 mL 沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中 注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面 振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀 制成 1 100 的样品匀液 4 1 4 按 6 1 3 操作程序 制备 10 倍系列稀释样品匀液 每递增稀释一次 换用 1 次 1 mL 无菌吸管或吸头 4 1 5 根据对样品污染状况的估计 选择 2 个 3 个适宜稀释度的样品匀液 液体样品 可包括原液 在进行 10 倍递增稀释时 吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内 每个稀释度 做两个平皿 同时 分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照 4 1 6 及时将 15 mL 20 mL 冷却至 46 的平板计数琼脂培养基 可放置于 46 1 恒温水浴箱中保温 倾注平皿 并转动平皿使其混合均匀 4 2 培养 4 2 1 待琼脂凝固后 将平板翻转 36 1 培养 48 h 2 h 水产品 30 1 培养 72 h 3 h 4 2 2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时 可在凝固后的琼脂表面 覆盖一薄层琼脂培养基 约 4 mL 凝固后翻转平板 按 6 2 1 条件进行培养 4 3 菌落计数 可用肉眼观察 必要时用放大镜或菌落计数器 记录稀释倍数和相应的菌落数量 菌落计 数以菌落形成单位 colony forming units CFU 表示 4 3 1 选取菌落数在 30 CFU 300 CFU 之间 无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数 低 于 30 CFU 的平板记录具体菌落数 大于 300 CFU 的可记录为多不可计 每个稀释度的菌 落数应采用两个平板的平均数 4 3 2 其中一个平板有较大片状菌落生长时 则不宜采用 而应以无片状菌落生长的平板 作为该稀释度的菌落数 若片状菌落不到平板的一半 而其余一半中菌落分布又很均匀 即可计算半个平板后乘以 2 代表一个平板菌落数 4 3 3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时 则将每条单链作为一个菌落计数 5 5 结果与报告结果与报告 5 1 菌落总数的计算方法 5 1 1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内 计算两个平板菌落数的平均 值 再将平均值乘以相应稀释倍数 作为每 g mL 样品中菌落总数结果 5 1 2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时 按公式 1 计算 式中 N 样品中菌落数 C 平板 含适宜范围菌落数的平板 菌落数之和 n1 第一稀释度