叶绿体色素含量的测定

叶绿体色素含量的测定叶绿体色素含量的测定 分光光度法分光光度法 中文摘要 中文摘要 本实验利用菠菜叶作为原料用 80 的丙酮提取叶绿体色素 应用分光光度计在某一特 定波长下所测定的吸光度 带入公式计算出色素溶液中各色素浓度 英文摘要 英文摘要 In this experiment we used spinach leaves as raw material and used 80 of acetone to extract pigments from them and apply spectrophotometer at a particular wavelength to determine absorbance then take the absorbance into the formula to calculate concentration of each pigment 实验原理 实验原理 利用 80 丙酮提取叶绿体色素 叶绿素 a 叶绿素 b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长 分别是 663nm 646nm 和 470nm 根据分光光度计测定的吸光度值 可以计算出丙酮提取液中叶绿体色素含量 实验目的 实验目的 掌握分光光度法对叶绿素 a 叶绿素 b 叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方 法 实验器材和试剂 实验器材和试剂 1 材料 菠菜叶片 2 用具 分光光度计 天平 研钵 漏斗 剪刀 容量瓶 烧杯 滤纸 滴管等 3 试剂 80 丙酮 石英砂和碳酸钙 实验步骤 实验步骤 1 叶绿体色素的提取叶绿体色素的提取 取新鲜菠菜叶片 0 5 克 擦干 去中脉 剪碎放入研钵 加入少许石英砂和 CaCO3 再加入 80 丙 酮 3ml 研磨成匀浆 再加 80 丙酮 10ml 静置 10 分钟 用漏斗滤去残渣 用丙酮反复冲洗研钵 残渣至无色 用容量瓶定容至 50ml 2 吸光度的测定吸光度的测定 取光径 1cm 比色杯 注入上述叶绿素提取液 以 80 丙酮注入另一同样的比色杯内作 为空白对照 在波长 663 646 和 470nm 下测定吸光度 3 结果计算结果计算 依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式 分别计算出叶绿素 a b 的浓度及其叶绿素 总浓度和类胡萝卜素的浓度 计算公式计算公式 80 丙酮提取液中色素浓度的计算 Ca 叶绿素 a 12 2A663 2 81A646 Cb 叶绿素 b 20 13A646 5 03A663 CT 叶绿素 Ca Cb 17 32A646 7 18A663 Cx c 类胡萝卜素 1000A470 3 27Ca 104Cb 229 叶绿体色素含量叶绿体色素含量 实验结果 实验结果 波长吸光度平均值 663nm0 8190 8160 8170 817 646nm0 4140 4240 4210 420 470nm0 8280 8460 8470 840 Ca 叶绿素 a 12 2 0 817 2 81 0 420 8 7872mg L Cb 叶绿素 b 20 13 0 420 5 03 0 817 4 3451mg L CT 叶绿素 Ca Cb 13 1323mg L Cx c 类胡萝卜素 1000 0 840 3 27 8 7872 104 4 3451 229 1 5693mg L Ca 叶绿素 a 含量 8 7872mg L 0 05L 1 0 5g 0 8787 87 87mg g Cb 叶绿素 b 含量 4 3451mg L 0 05L 1 0 5g 0 4345 43 45mg g Cx c 类胡萝卜素 含量 1 5693mg L 0 05L 1 0 5g 0 1569 15 69mg g 实验讨论 实验讨论 1 叶绿素 a b 在蓝色区也有吸收峰 能否用这一吸收峰波长进行叶绿素的定量分析 为 什么 定量分析的吸收峰必须要稳定 还要有强的吸收 另外 还需要考虑干扰的问题 光 合色素除了叶绿素外还有类胡萝卜素 类胡萝卜素主要吸收蓝光 为了排除干扰 要选用 红光 2 为什么提取叶绿素时干材料一定要用 80 的丙酮 而新鲜的材料可以用无水丙酮提取 或积 样品鲜重 或干重 面 稀释倍数 提取液体积 色素浓度 2 1 mg LLmg 在植物缺水时 植物体中的叶绿素含量会降低 干材料与新鲜材料相比水分含量较少 用无水丙酮提取不如 80 丙酮下提取效果好 叶绿素的提取除了丙酮也可以用其他的提取试剂 石油醚 乙醇 乙醚 乙醇 乙醚 从菠菜叶中提取叶绿体色素时 用丙酮研磨法提取叶绿素的效率比石油醚 乙醇萃取 法高 乙醚研磨法提取叶绿素的效果明显不如丙酮 用石油醚研磨法的效果最次 这表明 最佳的提取剂为丙酮 其次为石油醚一乙醇 但用混合溶剂提取的叶绿素的纯度要比用单 一溶剂提取的高 生产中可根据实际需求进行合理选用 不同有机溶剂用直接浸提法和 Arnon 法从菠菜叶片中提取叶绿素的效率不同 有人做 过此类提取实验 结果表明 用丙酮 乙醇浸提法提取叶绿素的效率比丙酮 乙醇 Arnon 法 高 甲醇 乙醚浸提法提取叶