实验七--食品中金黄色葡萄球菌的检验

实验七实验七 食品中金黄色葡萄球菌的检验食品中金黄色葡萄球菌的检验 一 实验目的要求一 实验目的要求 1 了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义 2 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性 3 掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断 4 掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术 二 原理二 原理 葡萄球菌在自然界分布极广 空气 土壤 水 饲料 食品 剩饭 糕点 牛奶 肉 品等 以及人和动物的体表粘膜等处均有存在 大部分是不致病 也有一些致病的球菌 金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种 可引起皮肤组织炎症 还能产生肠毒素 如果在食 品中大量生长繁殖 产生毒素 人误食了含有毒素的食品 就会发生食物中毒 故食品中 存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险 检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有 实际意义 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶 使血浆凝固 多数致病菌株能产生溶血毒素 使血琼 脂平板菌落周围出现溶血环 在试管中出现溶血反应 这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌 的重要指标 三 试剂和仪器三 试剂和仪器 一 最先准备的器材 一 最先准备的器材 规格名称数量用途 1 500ml 广口瓶1 个稀释样品 2 500ml 三角瓶1 个制生理盐水 3 250ml 三角瓶3 个制培养基等 4 10 100mm 试管6 支血浆凝固酶试验 5 1ml 移液管2 支 6 10ml 移液管2 支 7 直径为 90 mm 平皿12 套制血平板 B P 平板 8 250ml 量筒1 支 二 应灭菌的其它器材 二 应灭菌的其它器材 剪刀 1 把不锈钢汤匙 1 把称量纸适量 三 应制备的培养基 三 应制备的培养基 培养基总量所用容器 1 无菌水50ml 瓶1 瓶250ml 三角瓶 全班共用 2 0 85 生理盐水70ml 瓶1 瓶250ml 三角瓶 全班共用 3 0 85 生理盐225ml 瓶1 瓶500ml 三角瓶 4 7 5 NaCl 肉汤50ml 瓶1 瓶250ml 三角瓶 5 普通营养琼脂100ml 瓶1 瓶250ml 三角瓶 6 B P 培养基95ml 瓶1 瓶250ml 三角瓶 7 兔血液5ml 四 实验内容四 实验内容 一 一 增菌培养法 增菌培养法 样品处理样品处理 选择性增菌选择性增菌 选择性平板分离选择性平板分离 血浆凝固酶试验鉴别血浆凝固酶试验鉴别 结果报告结果报告 第一天第一天 样品处理和增菌培养样品处理和增菌培养 一 一 样品处理 样品处理 固体或半固体食品 固体或半固体食品 以无菌操作称取 25g 样品 放入装有 225mL 灭菌生理盐水的灭菌 均 质杯内 于 8000r min 均质 1 2min 制成 1 10 样品匀液 液体食品液体食品 用灭菌吸管吸取 25mL 样品 放入装有 225mL 灭菌生理盐水的灭菌玻璃 瓶内 瓶内预置适当数量的玻璃珠 经充分振摇制成 1 10 样品匀液 二 二 增菌培养 增菌培养 接种操作接种操作 吸取 5mL 稀释液接入 7 5 NaCl 肉汤肉汤或胰蛋白胨肉汤中 37 C 培养 24 小 时 培养 培养 放于 36 1 培养 24h 培养结果 培养结果 在 NaCl 肉汤肉汤中呈混浊生长 胰蛋白胨肉汤中有时液体澄清 菌量多时呈混 浊生长 第二天第二天 接种选择性平板进行分离培养接种选择性平板进行分离培养 一 一 接种选择性平板 接种选择性平板 取增菌液 1 环 划线接种于血平板血平板或B P平板平板 二 二 培养 培养 放于 36 1 培养 24h 第三天第三天 观察分离结果 镜检 做血浆凝固酶试验观察分离结果 镜检 做血浆凝固酶试验 一 一 观察分离结果 观察分离结果 结果结果 金黄色葡萄球菌 在血平板血平板上呈 金黄或白色菌落 大而凸起 表面光滑 周 围有溶血圈 在 Baird Parker 平板平板上 菌落为圆形 直径 2 3mm 颜色灰或黑色 周围有 一浑浊带 在其外层有一透明圈 二 二 革兰氏染色 镜检 革兰氏染色 镜检 操作 革兰氏染色操作 革兰氏染色 镜检镜检 结果 结果 金黄色葡萄球菌 革兰氏阳性 显微镜下呈葡萄状排列无芽胞 直径 0 5 1 m 三 三 结果报告 结果报告 综合形态特征 血平板情况以及血浆凝固酶试验结果 判别检样有否金黄色葡萄球菌 作出报