肝抗体谱产品预期用途

1 自身免疫性肝病自身免疫性肝病 ALD 检测试剂盒预期用途检测试剂盒预期用途 一 产品预期用途 一 产品预期用途 本品基于酶免斑点方法 蛋白芯片技术检测血清中的抗肝抗原抗体 将 AMA M2 M2 3E BPO Sp100 PML gp210 LKM 1 LC 1 SLA LP 和 Ro 52 等 9 种抗原 固定在膜上制备成蛋白芯片 此蛋白芯片用来捕捉被测样本中的相应抗体 IgG 并利用 过氧辣根化物酶标记抗 IgG 抗体来检测样品中的不同抗原 IgG 类抗体 抗肝抗原抗体检测在临床上是自身免疫性疾病诊断的重要工具 通过对 9 种抗肝抗原 抗体的检测 可有助于适用于自身免疫性肝炎 AIH 原发性胆汁性肝硬化 PBC 不 明原因的转氨酶增升高等自身免疫性肝病的辅助诊断和鉴别 能够为临床医生诊断自身免 疫疾病提供重要的参考依据 二 与产品预期用途相关的背景情况 二 与产品预期用途相关的背景情况 一 产品检测指标的筛选及临床意义 一 产品检测指标的筛选及临床意义 自身免疫性肝病 ALD 是一类原因不明的以肝脏为靶器官的自身免疫性疾病 主要包括 以肝细胞胞实质损害为主的自身免疫性肝炎 autoimmune hepatitis AIH 和以胆管病变为 主的原发性胆汁性肝硬化 primary billiary cirrhosis PBC 原发性硬化性胆管炎 primary sclerosingcholangitis PSC 以及这三种疾病中任意两者之间的重叠综合征 overlap syndromes 等自身免疫性肝病 自身免疫性肝炎患者大多数起病比较隐匿 临床表现 为 ALT 超 过正常 2 7 倍 有 轻微黄疸 在临床表现上基本与其他类型肝炎相似 在实验 室检测方面 自身免疫性肝炎的主要特点为血清中存在一系列高滴度的 自身抗体 所以自 身抗体检测是诊断 ALD 最直接最准确的方法 常见的自身抗体有 AMA M2 SMA Sp100 PML gp210 LKM 1 LC 1 SLA LP 和 Ro 52 等 以下就简述这 些相关抗体与相关疾病的关系 1 AMA M2 AMA 可分为 M1 M9 共 9 个亚型 与 PBC 密切相关的是 M2 M4 M8 M9 其中 M2 诊断 PBC 的特异性最高 M2 的靶抗原为线粒体上 2 氧酸 2 脱氢酶复合体 2 OADC 的一些成分 2 OADC 包括丙酮酸脱氢酶复合体 E2 亚单位 PDC E2 支链二酮酸脱氢酶复合体 E2 亚单位 BCOADC E2 2 酮戊二酸脱氢酶复 合体 E2 亚单位 OGDC E2 以及二氢硫辛酰胺脱氢酶结合蛋白 E3BP 最常见的反应 是针对 PDC E2 PDC 的抗原表位主要位于内酯酰区和部分外酯酰区 在 PBC 病人血 清中阳性率为 95 BCOADC 和 OGDC 的抗原表位位于酯酰区 阳性率分别为 38 39 88 采用重组技术表达融合蛋白 BPO 该蛋白具有 BCOADH E2 PDH E2 OGDH E2 的 3 个硫辛酰基结合功能区 24 三种抗原之间无交 叉反应 其联合检测阳性率可达 95 99 以线粒体内膜上的 2 酮酸脱氢酶复 合物为靶抗原的 AMAM2 亚型抗体 是 PBC 患者的高度特异性自身抗体 敏感性为 95 98 特异性达 97 有学者认为当 AMAM2 亚型抗体高滴度时 确诊 PBC 不再需要肝组织活检病理证实 在自身免疫性肝炎 非肝脏原发性免疫性疾病 6 进行性系统性硬化症患者和干燥综合征患者 PBC 重叠症 其它慢性肝脏疾病 其它风湿性疾病 如系统性红斑狼疮 患者中可检测到低滴度的 AMA 2 SP100SP100 抗 Sp100 抗体靶抗原为分子量 100KD 的可溶性酸性磷酸化核蛋白 Sp100 该抗体在 PBC 中特异性约为 97 其敏感性为 10 30 抗 Sp100 抗体亦少见 于风湿性自身免疫病患者 但阳性率低 一般 3 且阳性患者多与 PBC 密切相关 并在临床上常出现于肝损伤之前 如原发性干燥综合征 硬皮病等 抗 SP100 抗体 与 PBC 的临床表现密切相关 该抗体阳性的 PBC 患者出现肝硬化的几率明显增加 血清中胆红素升高 患者病情进展速度快 预后较差 抗 Sp100 抗体在 AMA 阴性 PBC 患者中的阳性率 60 显著高于 AMA 阳性者 20 该抗体对 AMA 阴性的 PBC 患者的诊断具有重要意义 3 PMLPML 抗 PML 抗体靶抗原为异常表达于前髓 早幼粒 白血病细胞的蛋白 约 90 的 PBC 患者可同时检测到抗 PML 抗体和抗 SP100 抗体 两者具有相同的敏感性和特异 性 且出现抗 Sp100 抗体和抗 PML 抗体的 PBC 患者病情进展快 预后较差 以上说 明 在 PBC 中这种特殊的抗 Spl00 抗体和抗 PML 抗体实际上预示了 PBC 的早期诊断 提高了 PBC 检出率 并且具有高度特异性 是检测 PBC 的重要诊断标志 4 gp210gp210 抗 gp210 抗体的靶抗原为位于核孔复合物上的 210KD 跨膜糖蛋白 所识别 的表位是 gp210 羧基末端上的 15 个氨基酸残基 该自身抗体被一致认为是 PBC 的 高度特异性抗体 以 gp210 抗原决定簇的重组蛋白或合成多肽作为抗原 应用免疫 印迹法或 ELISA 法检测抗 Gp210 抗体 其诊断 PBC 的特异性可高达 99 敏感性 3 为 10 41 约 1 4 10 40 的 PBC 患者中 抗 gp210 抗体可与 AMA 同时 出现 抗 gp210 抗体也存在于 20 47 AMA 阴性的 PBC 患者中 对于临床 生化 和组织学表现疑诊 PBC 而 AMA 阴性的患者 或 AMA 阳性而临床症状不典型 存在重 叠综合征 如与干燥综合征重叠 的患者 抗 gp210 抗体检测有重要价值 抗 gp210 抗体与 PBC 患者的肝外临床表现具有一定的相关性 抗体阳性较阴性患者发生关节 炎的几率增高 抗 gp210 抗体的存在及抗体滴度一般不随患者诊断的时间及临床过 程而变化 但抗体阳性与阴性患者的预后有显著性差异 阳性患者死于肝衰竭者明 显多于阴性者 抗 gp210 抗体可能作为一种独立的预后指标 阳性提示患者预后不 良 5 LKM 1LKM 1 抗 LKM 抗体包括三种与微粒体酶细胞色素 P450 反应的亚型抗体 其中抗 LKM 1 抗体被认为是 型 AIH 的特异性抗体 其靶抗原已被证实为细胞色素 P4502D6 CYP2D6 主要是分子量为 50KDa 的微粒体抗原结构表位 抗 LKM 1 抗体 为 型 AIH 血清特异性抗体 敏感性为 90 在 AIH 中检出率较低 约 10 左右 AIH 中抗 LKM 1 抗体阳性患者 多具典型自身免疫现象 大多为儿童和青年女性 自身抗体滴度较高 血清免疫球蛋白显著增高 病情比较严重 慢性丙型肝炎患者 中约 2 10 也可检测到抗 LKM 1 抗体 HCV 感染伴有抗 LKM 1 抗体阳性患者 大多年龄较大 女性并不多见 自身抗体滴度较低 血清免疫球蛋白不高 病情为 慢性肝炎表现 抗 LKM 1 抗体阳性与否对该病的治疗有参考意义 在给 HCV 感染患 者进行干扰素治疗之前应先检测抗 LKM 1 抗体 如果阳性应慎用干扰素 因为有研 究表明抗 LKM 1 抗体高滴度阳性的 HCV 感染患者应用干扰素后病情恶化 其机制可 能是由于干扰素刺激肝脏产生了自身免疫反应 6 LC 1LC 1 抗 LC 1 抗体被认为是 型 AIH 的另 个标记抗体 属器官特异性而非种属特 异性自身抗体 识别的靶抗原存在于肝细胞的细胞溶质中 其成分为亚甲基转移酶 环化脱氢酶 这是 种分子量为 58KD 的肝脏特异性代谢酶 抗 LC 1 抗体为 型 AIH 的特异性抗体 在 型 AIH 患者中的阳性率约为 30 在 型 AIH 患者的血清 中可与抗 LKM 1 抗体同时存在 也可作为唯一的自身抗体出现 在临床上 抗 LC1 抗体多见于年龄小于 20 岁的年轻 AIH 患者 年龄大于 40 岁的 AIH 患者少见 该抗 体的滴度与 型 AIH 的疾病活动性具有相关性 对疾病的早期治疗有很大的帮助 为 AIH 的疾病活动标志及预后指标 4 7 SLA LPSLA LP 目前认为 SIA 和 LP 是同 抗原 SIA LP 抗原是分子量为 50KDa 的细胞溶 质分子 被称为 UGA 抑制物 tRNA 相关蛋白 抗 LP 抗体和抗 SLA 抗体合称为抗 SLA LP 抗体 为 I 型 AIH 高度特异性抗体 虽然抗 SLA LP 抗体的确切功能和作 用还不清楚 但已发现它与疾病严重程度相关 参与了 AIH 的发病过程 与 AIH 的 发病机制有关 AIH 存在种类较多的自身抗体 但多数自身抗体并非 AIH 特异性抗 体 抗 SLA LP 抗体为少数公认的 AIH 高度特异性自身抗体 在 AIH 所有相关自身 抗体中最具有诊断价值 抗 SLA LP 抗体在 AIH 中的阳性率为 10 30 可单 独存在 也可与 SMA 或 ANA 同时存在 而且多出现在 ANA SMA 和抗 LKM 1 抗体阴 性的 AIH 患者血清中 抗 SLA LP 抗体阳性患者多为年轻女性 有高免疫球蛋白血 症 约 30 的 I 型 AIH 仅该抗体阳性 而缺乏所有其他自身抗体标志 但对免疫 抑制治疗有效 抗 SLA LP 抗体测定对发现这一部分 AIH 患者有重要意义 8 RO 52RO 52 抗 SS A Ro52 抗体在自身免疫性疾病中是一个非特异性指标 与多种自 身免疫性疾病都有相关性 在很多疾病处于稳定期 控制好的情况下会显示阴性 如果阳性会提示复发或者优先于其它指标预警 起到预防提示作用 此指标合并其 它指标阳性 常会提示预后不好 二 二 与预期用途相关的临床适应症的背景情况介绍如下 与预期用途相关的临床适应症的背景情况介绍如下 自身免疫性肝病 autoimmune liver diseases ALD 是一组由异常自身免疫介导的 肝胆损伤 根据其临床表现 生化 免疫学 影像学和组织病理学特点 可简单分为以肝 炎为主型 即自身免疫性肝炎 autoimmune hepatitis AIH 和以胆系损害及胆汁淤积为 主型 即原发性胆汁性肝硬化 primary biliary cirrhosis PBC 和原发性硬化性胆管 炎 primary sclerosing cholangitis PSC 此外 还有这三种疾病中任意两者之间的 重叠综合征 overlap syndromes 主要以 AIH PBC 重叠综合征多见 上述疾病均可表现 为严重的肝脏病变 并可进展至肝硬化 1 自身免疫性肝炎 autoimmune hepatitis AIH 自身免疫性肝炎 AIH 是一种 累及肝脏实质的特发性疾病 临床以高 球蛋白血症 波动性黄疸 特征性循环自身抗体 及内分泌失常为特点 可发展为肝硬化 患者或一级亲属常伴有其他被认为具有自身免疫 基础的疾病 特别是甲状腺疾病及风湿性关节炎 AIH 无明确病因 形态学特征以界面性 肝炎和从门脉向周围肝实质内分布密集的淋巴 浆细胞为主的炎性浸润 伴有门脉周围肝细 胞的碎片状坏死 缺少提示为其他肝病的典型改变如胆道损害 AIH 常为隐形爆发 疲劳 5 不适 关节痛 波动性黄疸 右上腹痛或昏睡 没有特殊体征 偶有一些病情严重的病例 其表现几乎和急性或暴发性病毒性肝炎相似 相当多的患者可无明显的肝病征兆或症状 目前 AIH 的发病机制尚未明了 分类仍有争议 根据自身抗体的不同 有多种 AIH 分 型方法 临床上沿用多年的方法是将 AIH 分为 3 个亚型 1 型 AIH 的特点是血清中以 ANA 和 或 SMA 抗体为主 1 型是最常见的类型 2 型 AIH 以 LKM 1 和较少出现的 LKM 3 为 主 多见于儿童患者 阳性率为 30 如发病年龄更早 起病就更为严重 也更易发展为 肝硬化 3 型 AIH 以抗 SLA LP 为主 2 原发性胆汁性肝硬化 primary biliary cirrhosis PBC 原发性胆汁性肝硬化 primary biliary cirrhosi PBC 是以肝内细小胆管非化脓性进行性破坏伴门脉炎症性改 变为主要特征 并有长期持续性肝内胆汁淤积 最终导致纤维化和肝硬化的慢性进展性 自 身免疫性疾病 PBC 在中老年女性中多见 近年来 该病在城市人口中有增高的趋势 这 种趋势可能与人们对疾病认识的加深和诊断技术的增高 特别是对自身免疫性肝病相关 自 身抗体筛选的临床应用有关 但也不排除该病发病率增加的可能 PBC 的病因不明 该病 常合并其他器官 自身免疫性疾病 在该病中几乎所有患者均存在特异性身抗体和自身反应 性 T 细胞反应 因此被称为是一种器官特 异性的自身免疫性疾病 在疾病的早期治疗选用 的是熊脱氧胆酸 DCA 其在临床中显示了很好的治疗效果 而在疾病的晚期通常使用的 是肝移植的方法 术后患者生活质量较高 临床上可将 PBC 分为三型 无症状 PBC A PBC 症状性 PBC s PBC 混合 型 PBC CAH PBC 叉可根据病程分为 无症状期 皮肤瘙痒期 黄疽期 血清总胆 红素 34 2 mmool L 晚期 多在 3 个月内死亡 PBC 的诊断包括肝功能检测 检测碱性磷酸酶 天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶 血清脂质的检测 AMA 和 ANA 的检测以及与其它慢性炎症性肝脏疾病 如慢性病毒性肝炎 自身免疫性肝炎或者原发性硬化性胆管炎 的区别诊断 但目前临床出现 AMA M2 阴性 PBC 患者 SP100 GP210 PML 的抗体检测指标的出现 弥补了上述检测缺陷 同时这几个指 标联合检测显著提高了 PBC 患者的检出率和准确性 6 三 相关的临床或实验室诊断方法三 相关的临床或实验室诊断方法 自身免疫病的实验室诊断包括免疫学实验检查和其他实验室检查 免疫学检查有细胞 免疫和体液免疫检测 由于检测抗原特异性 T 细胞技术较为繁琐 临床实验室难于常规开 展 所以实际上有关自身免疫病的特异性实验室诊断主要是自身抗体的检测 所有自身免 疫病均具有特异或相对特异的自身抗体 为自身抗体检测的广泛应用奠定了基础 检测自 身抗体的常用方法包括免疫双扩散法 DID 免疫荧光测定法 IIF 免疫印迹法 WB 免疫斑点法 IB 酶联免疫吸附法 ELISA 蛋白芯片法 Protein chip 等 这些检 测方法各有特点 也都存在一定的局限 1 免疫双扩散法 免疫双扩散法 DID 免疫双扩散法是经典的检测 ENA 抗体的方法 此方法是通过抗原与抗体在琼脂 或琼 脂糖 凝胶中扩散形成沉淀线 然后通过对沉淀线的鉴别和用阳性血清作对照来进行判断 该方法的优点是价格低廉 特异性高 但操作费时费力 需要用肉眼来观察沉淀环 结果 判断带有一定的主观性 对实验室技术人员技术水平和经验要求较高 操作结果一致性较 差 2 间接免疫荧光法 间接免疫荧光法 IIF 间接免疫荧光分析法是检测自身抗体的常用技术 其实验基质是 HEp 2 细胞或不同灵 长类肝脏组织冰冻切片 含有完整的抗原谱 许多组织经 IIF 着染可提示自身抗体存在 但不能对自身抗体种类进行客观评价 结果阳性时应进一步做特异性抗核抗体项目检查 且对 IIF 着染的鉴定有一定的主观性 因不同观察者 新老组织切片不同而有所不同 对 试验技术人员要求较高 3 免疫印迹法 免疫印迹法 WB 免疫印迹法是一种将凝胶电泳 抗原抗体反应和免疫固定技术结合在一起的生物化学 实验技术 主要用于抗 ENA 抗体谱的检测 从抗原的蛋白质多肽水平识别不同的抗核抗 体 该方法的特异性和敏感性较免疫双扩散法高 且一次检测能同时完成对多种特异性抗 核抗体的识别和过筛 但抗原经 SDS PAGE 后发生