实验四 茶叶中茶多酚含量的测定.doc

.实验四 茶叶中茶多酚含量的测定高锰酸钾直接滴定法一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作二、原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。三、仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80烘箱或水浴中加热磺化46h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在7080水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。四、测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。同时做空白测定。五、结果计算 X= 式中：X茶多酚的含量，% ，B空白消耗的高锰酸钾毫升数，mLA样品消耗的高锰酸钾毫升数，mL -高锰酸钾的浓度，%m样品的质量g， V1测定用供测试液的体积，mL ，V2-供测试液的体积，mL实验三 茶叶中茶多酚含量的测定酒石酸铁比色法一、实验目的：1、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。2、进一步熟悉721分光光度计的使用。二、原理：茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的2035，由约30种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。按其化学结构分为四类：（1）儿茶素类，属黄烷醇类；（2）黄酮及黄酮醇类；（3）花白素及花青素，即羟基-4-黄烷醇及其钾盐；（4）醋酸及缩酚酸类。其中以黄烷醇类化合物最重要（占多酚的80左右）。纯儿茶素一般为白色无定形粉末，在空气中极易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。对热、酸较稳定，2%的溶液加热至120 并保持30min，无明显变化。在碱性条件下易氧化变质。实验表明，茶多酚清除活性氧自由基作用的活性，为等量维生素C的493倍，且能有效消除脂质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显著功效。还有研究表明，茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、霍乱、金黄色葡萄球菌等有害菌的作用；具有较强的抗放射性作用，以及在抗衰老，抑制瘤细胞，预防心脑血管疾病等方面都显示出很好的效应，是一种有开发前景的天然抗氧化剂。1988年7月我国已批准茶多酚作为食品添加剂。国内已建立了茶多酚工业化生产线，并开发研制出了茶多酚的第二代产品即儿茶素（TC）。茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法测定。该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。三、仪器与试剂：仪器：分光光度计试剂：（1）酒石酸铁溶液：称取 FeSO47H2O 1.000g，含 4个结晶水的酒石酸钾钠5.000g，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至1000mL（2）pH7.5的磷酸缓冲液：60.2g Na2HPO412H2O ，5.00gNaH2PO42H2O，加蒸馏水溶解后用蒸馏水稀释至1000mL四、步骤： （l）样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品1g于200mL三角烧瓶中，加入沸水80mL，在沸水浴中浸提30min，然后过滤、洗涤，滤液倒人100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。（2）测定：吸取样品溶液 1mL于 25mL容量瓶中，加蒸馏水4mL，加酒石酸铁溶液5mL，摇匀，再加入pH7.5磷酸缓冲液稀释至刻度。以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白。选择540nm波长和1cm的比色杯测定吸光度。五、计算： 式中：茶多酚的含量，%，A样品溶液的吸光度值，T样品溶液的总体积，mL V测定用样品溶液的量，mL，m样品质量，g 3.913用1cm比色杯，当吸光度为1.0时，试液中茶多酚的浓度为3.913mg/mL六、说明及注意事项：1、磷酸盐缓冲液在常温下容易生长霉菌，放冰箱中保存或临用时现配。2、样品溶液制备中的注意事项：（1）较透明的样液，如果味茶饮料，将样液充分摇匀后，直接取样测定。（2）较浑浊的样液，如果汁茶饮料、奶茶饮料等，称取充分混匀的样液25mL于50mL容量瓶中，加95%的乙醇15mL充分混匀，放置15min，用水定容至刻度，过滤。（3）含有碳酸气的样液，如农夫汽茶，量取充分混匀的样液100mL于250mL的烧杯中，称取其总量，于电炉上加热至沸，在微沸状态下加热10min，以将二氧化碳排除，放冷，用水补足原来的质量，摇