临床化学常用分析方法

临床医学检验主管技师考试辅导临床医学检验主管技师考试辅导 临床化学临床化学 第 1 页 临床化学常用分析技术临床化学常用分析技术 临床化学常用分析方法临床化学常用分析方法 一 光谱分析 分光光度技术 一 光谱分析 分光光度技术 利用各种化学物质所具有的发射 吸收或散射光谱谱系的特征 来确定其性质 结构或含量的技术 称为光谱分析技术 具有灵敏 快速 简便等特点 是生物化学分析中最常用的分析技术 发射光谱分析 荧光分析法和火焰光度法 吸收光谱分析 可见及紫外光分光光度法 原子吸收分光光度法 散射光谱分析 比浊法 二 二 电泳分析 在直流电场中 带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳 三 离心技术三 离心技术 离心技术分为制备离心技术和分析离心技术 制备离心技术主要用于物质的分离 纯化 而分析离心 技术主要用来分析样品的组成 四 四 层析技术 层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术 所有的层析系统都由固定相和流动相组成 五 五 电化学分析技术 利用物质的电化学性质 测定化学电池的电位 电流或电量的变化进行分析的方法称为电化学分析法 包括电位法 电导法 电容量分析法 离子选择电极法 离子选择电极 ISE 能对某特定离子产生响应 在一定范围内 其电位与溶液中 特定离子活度的对数呈线性关系 因此可用离子选择电极来定量分析某些离子的活度或浓度 例题 用于分离不同分子大小蛋白质的方法是 临床医学检验主管技师考试辅导临床医学检验主管技师考试辅导 临床化学临床化学 第 2 页 A 琼脂糖凝胶电泳 B 凝胶层析 C 密度梯度离心法 D 免疫比浊法 E 电化学分析法 答疑编号 700812140101 正确答案 B 血清酶催化活性浓度和代谢物浓度检测技术血清酶催化活性浓度和代谢物浓度检测技术 一 酶反应动力学原理一 酶反应动力学原理 酶反应动力学主要研究酶催化反应的过程与速率 以及各种影响酶催化速率的因素 定量时的观察对 象是总单位时间内底物的减少或产物增加的量 当底物 S Km 时 公式可近似为 V Vmax 从理论上说只有测定的是酶 Vmax 反应速度才和酶量 成正比 二 酶活性的定义及单位二 酶活性的定义及单位 在实验规定的条件下 温度 最适 pH 最适底物浓度时 在 1 分钟内催化 1 mol 底物发生反应所 需的酶量作为 1 个酶活力国际单位 U 习惯用 U L 来表示体液中酶活性浓度 三 测定酶活性浓度的两大类方法三 测定酶活性浓度的两大类方法 一 固定时间法 取样法 二 连续监测法 酶耦联法 指示酶 辅助酶 三 影响酶活性测定的因素 1 底物浓度的影响 底物的种类和浓度 多种底物中 Km 最小的底物往往是此酶的生理底物 2 反应体系的最适 pH 缓冲液的种类和浓度 临床医学检验主管技师考试辅导临床医学检验主管技师考试辅导 临床化学临床化学 第 3 页 3 温度的控制 37 四 代谢物浓度酶法测定四 代谢物浓度酶法测定 一 代谢物酶促终点法测定 1 一步法 最简单的底物法测定 2 酶促耦联法 工具酶 指示酶 辅助酶 在临床生化测定中 最常用的耦联指示系统有两个 一个是脱氢酶系统 另一个为氧化酶系统 脱氢酶系统 测定 NAD 或 NADP 在 340nm 处的吸光度增高或下降来计算被测物的浓度 但会受到内源 性脱氢酶及其底物如乳酸脱氢酶和乳酸 丙酮酸的干扰 二 动力学法测定 实际操作中 测定两个固定时间的吸光度差值 只要此期间待测物消耗 5 就可以采用标准浓度对照法计算样本浓度 所以动力学法有时又称为固定时间法 与终点法相比 动态法测定中