甘蔗生理生化测定指标.doc

此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 土壤含水量的测定 1 土壤速效氮 磷 钾的测定 2 一 土壤速效 N 的测定 碱解扩散法 2 二 土壤速效 P 的测定 4 三 土壤速效 K 的测定 NH4OAC浸提 火焰光度计测定法 5 土壤有机质测定 稀释热法 6 光合作用强度测定 8 1 LI 6400 测定系统测定植物光合 8 2 TPS 1 光合作用测定系统操作方法 10 叶绿素含量的测定 11 植物组织中自由水和束缚水含量 相对含水量的测定 13 植物根系活力的测定 TTC 法 16 植物伤流液中糖和氨基酸的鉴定 18 膜透性的测定 20 植物组织中丙二醛含量的测定 20 脯氨酸含量的测定 22 过氧化物酶活性的测定 25 过氧化氢酶活性的测定 26 硝酸还原酶的测定 29 酸性 中性转化酶 30 植物组织中可溶性蛋白质含量的测定 33 考马斯亮蓝 G 250 染色法 33 植物组织中可溶性糖含量的测定 蒽酮比色法 34 叶片全 N P K 的测定 36 一 样品的消化 36 二 叶片 N P K 的测定 37 叶片全 N 的测定 37 叶片全 P 的测定 38 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 叶片全 K 的测定 39 土壤含水量的测定土壤含水量的测定 一 基本原理 用取土钻从田间取来土样 在 100 105 恒温条件下 烘烤到干燥状 态 并用烘干前后的重量求出土样的含水量占烘烤土样多采用电热恒温干 燥箱 它能控制适宜的烘烤温度 因此测定结果比较准确 使用较广 但 缺点是测定时间长 有的使用红外干燥箱 虽然缩短了烘土时间 但因温 度较高 容易影响测定精度 采用简易加热设备的 则因烘烤温度不易控 制 精度较差 称重烘干法是人工取土 劳动强度较大 又不能定点观测 土壤湿度的连续变化 往往某些有机质在此温度时能逐渐分解而失重或氧 化而增重 因此 用此法只能测得近似的水分含量 由于该法的准确度和 精密度通常已达到土壤分析的要求 故测定土壤水分仍以烘箱法为准 二 仪器设备 铝盒 土钻 天平 坩埚钳 干燥器 电子天平 分析天平 电热式 恒温箱 三 测定步骤 1 在野外土壤水分观测点用土钻取样装入铝盒 取湿土重量一般以 30 50g 为宜 太少容易产生太大误差 每个观测点应作三次重复 2 称铝盒重 取有编号的铝盒一个 洗净 放入恒温箱中 敞开盖子 在 105 110 烘干 30 分钟 用坩埚钳取出放在干燥器中盖好盖子 冷却到室 温 大约 20 分钟 在分析天平上称重 然后再烘 20 分钟称重 直到恒重 为止 此为铝盒重 W1 3 取代表性样品约 15 20 克装入铝盒 在室内将装有土样的铝盒称重 在 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 电子天平上用一张小纸称风干土壤样品 并将土壤平铺上述已知重铝盒中 盖上盖子 在分析天平上称量出铝盒加湿土的质量 W2 每个样品至少重 复三次 4 揭开铝盒盖 放入烘箱中 在 105 下烘至恒重 6 8h 用坩埚钳从烘箱 中取出铝盒 盖好盒盖后放入底部有 CaCl2的干燥器中约 30 分钟 如无干 燥器则可放入磁盘或木盘中待至不太烫手时称质量 然后 再将样品放入 烘箱中烘烤 2 3 小时 马上在分析天平上称重称量 即铝盒加烘干土的重 量 W3 一直到前后两次称量相差不超过 0 05 克时为止 三 结果计算 以烘干土壤为基础水分的百分数 23 31 W W 100 W W 土壤含水量 以风干土壤为基础水分的百分数 23 21 W W 100 W W 土壤含水量 式中 W2 湿土 铝盒重 g W3 烘干士 铝盒重 g W1 铝盒重 g 土壤速效氮 磷 钾的测定土壤速效氮 磷 钾的测定 一 土壤速效 N 的测定 碱解扩散法 1 原理 用 1 0N 氢氧化钠水解土壤样品 使土壤潜在有效氮 转化为氨 气状态 不断逸出 由硼酸吸收 用标准酸滴定 然后计算出水解性氮的 含量 2 仪器及试剂配制 主要仪器 扩散皿 半微量滴定管 恒温箱 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 试剂配制 1 1 0N 氢氧化钠 称取化学纯氢氧化钠 40 克 用水解溶解后冷却定容 1 升 2 硼酸指示剂液 称取硼酸 H3BO3 20 克加水 900 毫升稍稍加热溶 解 冷却 加混合指示剂 0 099 克溴甲酚绿和 0 066 克甲基红溶于 100 毫 升乙醇中 20 毫升 然后以 0 1N 氢氧化钠调节溶液至红紫色 PH 约 5 0 最后加入水稀疏至 1000 毫升 使溶液混合均匀 贮存于塑料瓶中 3 0 005mol L 1 2H2SO4 标准溶液 量取 H2SO4 化学纯 2 83mL 加蒸馏水稀释至 5000mL 然后用标准碱或硼酸标定之 此为 0 020mol L 1 2H2SO4 标准溶液 再将此标准液准确地稀释 4 倍 即得 0 005mol L 1 2H2SO4 标准液 4 碱性胶液 取阿拉伯胶 40 0g 和水 50mL 在烧杯中热温至 70 80 搅拌促溶 约 1h 后放冷 加入甘油 20mL 和饱和 K2CO3水溶液 20mL 搅 拌 放冷 离心除去泡沫和不溶物 清液贮于具塞玻瓶中备用 3 操作步骤 取通过 60 号筛的风干样品 2 00 克于扩散皿外室 水平的轻轻旋转扩散 皿 使样品铺平 在扩散皿内室加入 2 硼酸指示剂液 2 毫升 然后在扩散 皿外室边缘涂上碱性甘油 盖上毛玻璃 并旋转数次 以使毛玻璃与皿边 完全粘住 再慢慢转开毛玻璃的一边 使扩散皿漏出一条缝 迅速加入 1 0N 氢氧化钠 5 毫升于扩散皿外室 立即用毛玻璃盖好 水平轻轻旋转扩 散皿 使溶液与土壤充分混匀 用橡皮筋固定 随后小心的放入 40 度的恒 温箱中 24 小时取出 以 0 01N 硫酸标准溶液滴定扩散皿内室硼酸溶液吸收 的氨量 终点是由蓝绿色转变红紫色 记下所用的标准酸量 V 4 计算结果 3 cV V Nmg kg10 m A 1 0 14 0 碱解氮 含量 式中 c 0 005mol L 1 2H2SO4 标准溶液的浓度 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 V 样品滴定时用去 0 005mol L 1 2H2SO4 标准溶液体积 mL V0 空白试验滴定时用去标准液体积 mL 14 0 氮原子的摩尔质量 g mol 1 W 样品质量 g 103 换算系数 二 土壤速效 P 的测定 鲍士旦主编 土壤农化分析 第三版 北京 中国农业出版社 2000 12 74 83 中性和石灰性土壤速效磷的测定 0 5M 碳酸氢钠法 1 原理 石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在 不能用酸溶液提取有效磷 一 般用碳酸盐的碱溶液 由于碳酸根的同离子效应 碳酸盐的碱溶液降低碳酸 钙的溶解度 也就降低了溶液中钙的浓度就有利于磷酸钙盐的提取 同时 碳酸盐的碱溶液 也降低了铝和铁的活性 有利于磷酸铝和磷酸铁的提取 2 仪器及试剂配制 主要仪器 往复振荡机 分光光度计 试剂配制 1 0 5M 碳酸氢钠浸提液 溶解 42 0 克碳酸氢钠于 800 毫升水中 以 0 5N 氢氧化钠调节浸提液 pH 至 8 5 此溶液暴于空气可因失去 CO2而使 pH 增高 可于液面加一层矿物油保存 贮存超过一个月 应检查 pH 是否 改变 2 无磷活性炭 活性炭常常含有磷 应做空白试验 检查有无磷存在 含磷较多 须用 2N HCl 浸泡过夜 用蒸馏水多次后 再用 0 5M 碳酸氢钠 浸泡过夜 在平瓷漏斗上抽气过滤 每次用少量蒸馏水冲洗多次 并检查 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 到无磷为止 含磷较少可直接用碳酸氢钠处理即可 3 磷标准溶液 准确称取 105 烘干过 4 8 小时的分析纯 KH2PO4 0 2197 克于小烧杯中 以少量水溶解 将溶液全部洗入 1000 毫升的容量 瓶中 然后加 H2SO4 5 毫升 用水定容至刻度摇匀 此溶液为磷标准溶液 50 g mL P 吸取 50 毫升此溶液稀释至 500 毫升 即溶液为磷标准溶液 5 g mL P 4 7 5N 硫酸钼锑贮存液 A 5g L 1酒石酸氧锑钾溶液 取酒石酸氧锑钾 0 5g 溶解于 100mL 水 中 B 钼酸铵 硫酸溶液 称取钼酸铵 10g 溶解于 450mL 水中 缓慢地 加入 153mL 浓 H2SO4 边加边搅 再将上述 A 溶液加入到 B 溶液中 最 后加水至 1L 充分摇匀 贮于棕色瓶中 此为钼锑抗混合液 5 钼锑抗混合显色剂 于 100 毫升钼锑贮存液中 加入 1 5 克左旋抗坏 血酸 此试剂有效期 24 小时 宜用前配制 3 操作步骤 称取通过 20 目筛的风干样品 5 00 克于 200 毫升三角瓶中 加入 0 5M 碳酸氢钠溶液 100 毫升 再加一角勺无磷活性炭 塞紧瓶塞 在振荡机上 振荡 30 分钟 立即用无磷滤纸过滤 滤液承接于 100 毫升三角瓶中 立 即用无磷滤纸过滤 滤液承接于 100mL 三角瓶中 吸取滤液 10mL 含磷 量高时吸取 2 5 5 0mL 同时应补加 0 5M 碳酸氢钠浸提液至 10mL 于 150mL 三角瓶中 再用滴定管准确加入蒸馏水 35mL 然后移液管加入钼 锑抗试 5mL 摇匀 放置 30min 后 用 880nm 或 700nm 波长波长进行比色 以空白液的吸收值为 0 读出待测液的吸收值 A 磷标准曲线绘制 分别取 5 P g mL 磷标准溶液 0 1 2 3 4 5mL 于 150mL 三角瓶 中 再加入 0 5M 碳酸氢钠 10mL 准确加水使各瓶的总体积达到 45mL 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 摇匀 最后加入钼锑抗试剂 5mL 混匀显色 同待测液一样进行比色 绘 成标准曲线 最后溶液中磷的浓度分别为 0 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 g mL 4 计算结果 3 V mg kg1000 m 10 ts k A 1 土壤中有效磷 P 含量 式中式中 p 由标准曲线计算出 P 的质量浓度 g mL V 显色时定容体积 ts 为分取倍数 即浸提液总体积与显色对吸取浸提液体积之比 m 风干土质量 g k 将风干土换算成烘干土质量的系数 103将 g 换算成 mg 三 土壤速效 K 的测定 NH4OAc 浸提 火焰光度计测定法 1 原理 以 NH4OAc 作为浸提剂与土壤胶体阳离子起交换作用 NH4OAc 浸提剂常用火焰光度计直接测出 为了抵消 NH4OAc 的干扰影响 标准钾 溶液也需要用 1N NH4OAc 配制 2 仪器及试剂配制 主要仪器 火焰光度计 往返式振荡机 试剂配制 1 1N 中性醋酸铵溶液 称取化学纯醋酸铵 77 09 克加水稀释 定容至 近 1L 用 HOAc 或 NaOH 调至 PH7 0 然后稀释至 1 升 2 钾的标准溶液的配制及标准曲线的绘制 准确称取烘干 105 4 6 小时 的分析纯 KCl 0 1907 克溶于水中 定溶至 1 升 即含 K100 g mL 然后分别准确吸取此 100 g mL K 标准液 0 2 5 5 0 10 0 15 0 20 0 40 0mL 放入 100mL 容量瓶中 用 1N 中性醋 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 酸铵溶液定容 即得 0 2 5 5 10 15 20 40 g mL K 标准系列溶液 3 操作步骤 称取通过 1 毫米筛孔的风干土 5 00 克于 100 毫升三角瓶中 加入 50 毫升 1N 中性 NH4OAc 溶液 塞紧橡皮塞 振荡 30min 用干的普通定性 滤纸过滤 滤液盛于小三角瓶中 同钾标准系列溶液一起在火焰光度计上 测定 记录其检流计上的读数 然后从标准曲线上求得其浓度 4 结果计算 1 1 V mg kgg mL W 土壤速效钾 待测液 式中 V 加入浸提液毫升数 W 样品烘干重 克 土壤有机质测定 稀释热法 土壤有机质测定 稀释热法 一 原理 稀释热法 水合热法 是利用浓硫酸和重铬酸钾迅速混和时所产生的 热来氧化有机质 以代替外加热法中的油浴加热 操作更加方便 由于产 生的热 温度较低 对有机质氧化程度较低 只有 77 二 仪器及试剂配制 仪器 试剂 1 1mol L 1 6K2Cr2O7 溶液 准确称取 K2Cr2O7 分析纯 105 烘干 49 04g 溶于水中 稀释至 1L 2 0 4mol L 1 6 K2Cr2O7 的基准溶液 准确称取 K2Cr2O7 分析 纯 在 130 烘 3h 19 613g 于 250mL 烧杯中 以少量水溶解 将全部洗 入 1000mL 容量瓶中 加入浓 H2SO4约 70mL 冷却后用水定容至刻度 充 分摇匀备用其中含硫酸浓度约为 2 5mol L 1 2 H2SO4 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 3 0 5mol LFeSO4溶液 称取 FeSO4 7H2O140 溶于水中 加入浓 H2SO415mL 冷却稀释至 1L 或称取 Fe NH4 2 SO4 6H2O196 1g 溶 解于含有 200mL 浓 H2SO4的 800mL 水中 稀释至 1L 此溶液的准确浓度 以 0 4mol L 1 6 K2Cr2O7 的基准溶液标定之 即准确分别吸取 3 份 0 4mol L 1 6 K2Cr2O7 基准溶液各 25mL 于 150mL 三角瓶中 加入邻啡 罗琳指示剂 2 3 滴 或加 2 羧基代二苯胺 12 15 滴 然后用 0 5mol LFeSO4溶液滴定至终点 并计算出 FeSO4的准确浓度 硫酸亚铁 FeSO4 溶液在空气中易被氧化需重新配制或以标准的 K2Cr2O7溶液每天 标定之 4 邻啡罗琳指示剂 称取邻啡罗琳 GB1293 77 分析纯 1 485g 与 FeSO4 7H2O0 695g 溶于 100mL 水中 5 浓硫酸 三 实验步骤 1 土样的测定 准确称取 0 5000g 土壤样品于 500mL 的三角瓶中 然后准确加入 1mol L 1 6K2Cr2O7 溶液 10mL 干土壤样品中 转动瓶子使之混合均匀 然后加浓 H2SO420mL 将三角瓶缓缓转动 1min 促使混合以保证试剂与 土壤充分作用 并在石棉板上放量约 30min 加水稀释至 250mL 加 3 4 滴邻啡罗琳指示剂 用 0 5mol LFeSO4标准溶液滴定至近终点时溶液颜色 由绿变成暗绿色 逐滴加入 FeSO4直至生成砖红色为上 用同样的方法做 空白测定 不加土样 2 结果计算 c VV3 0 1 33 g kg1000 3 1 0 10 土壤有机质 1 724 烘干土重 式中 1 33 为氧化校正系数 c 为 0 5mol LFeSO4标准溶液的浓 度 V0 空白滴定用体积 mL V 样品滴定用去体积 mL 10 3将 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 mL 换算为 L 3 0 1 4 碳原子的摩尔质量 g mol 1 724 土壤有机碳 换成土壤有机质的平均换算系数 光合作用强度测定光合作用强度测定 1 LI 6400 测定系统测定植物光合测定系统测定植物光合 实验原理实验原理 LI 6400 是一种开放型光合作用测定系统 即从进气口进入仪器主机 的气体经主机头部一分为二 25 进入参考气体红外分析仪 75 进入样品 气体红外分析仪 然后气体各自排出仪器 在光合作用测定过程中 有两种光源可供选择 一是自然光 用透明叶 室 二是自动光源 为红光 此时将叶室的透明部分换成含产生光的部分 用自动光源时需事先设定程序 用自动光源测定时可测定植物的最大光合 作用 Amax 即达到光饱和点时的光合作用 以及光合作用光照强度曲线 测定时 仪器根据参考气体与叶室气体 CO2浓度差 气体流速 叶面 积等参数计算光合作用或呼吸作用速率 根据参考气体与叶室气体 H2O 浓 度差 气体流速 叶面积等参数计算蒸腾速率 根据参考气体 H2O 与叶室 H2O 浓度与蒸腾速率计算叶面水分总导度 又据此以叶片两面的气孔密度 比率计算水分气孔导度即气孔导度 其倒数即为气孔阻力 根据气孔水分导 度 叶片两面气孔密度比率 叶面边界层阻力计算气孔对 CO2的导度 最 后 据气孔 CO2导度 蒸腾速率 参考气体 CO2浓度 光合速率计算胞间 CO2浓度 Ci LI 6400 能够测定的植物光合与水分生理指标有 净光合 呼吸 速 率 蒸腾速率 总气孔导度 气孔导度或气孔阻力 胞间 CO2浓度等 性能指标性能指标 LI 6400 主要性能指标有 工作温度 0 50 相对湿度 10 80 92 时仪器拒绝工作或停机 CO2 红外分析仪测定范围 0 3000 molmol 1 分辨 率 0 1 molmol 1 在 0 1500 molmol 1之间误差为 5 molmol 1 1500 3000 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 之间为 10 molmol 1 H2O 红外分析仪测定范围为 0 7kPa 或露点温度 Dew point 40 分辨率 0 001kPa 误差 0 006kPa 光感应器测定范围为 0 3000 molm 2S 1 分辨率 1 molm 2s 1 误差 7 基本操作要点基本操作要点 一 对 LI 6400 测定系统调零 1 开机预热 20 分钟 2 进入 Open 开机 状态 按 f3 键 进入 Calibration 标定 状态 3 将 CO2去除剂 碱石灰 和水分干燥剂 均在主机左 侧 上方的开关彻底打开 逆时针方向 这样气流经 CO2去除剂和水分干燥 剂后 变成无 CO2和 H2O 的空气进入红外分析部位 4 选择 FlowRateZero 流 速调零 调气体流速为 0 以电信号 1mVmin 1为准 用荧屏左右的上下 红色箭头键调节 下同 5 选择 IRGAZero 红外气体分析仪调零 首先调 CO2为零 再调 H2O 为零 用 f1 f2 f3 功能键调之 要求 CO2达到 0 1Lmolmol 1 H2O 0 01mmolmol 1 6 完成上述步骤后 将 CO2去除剂 和 H2O 干燥剂开关彻底关闭 顺时针方向 说明书上未提及此步骤 然后 将探头上进入样品分析室的塑料管 带黑色环者 打开 并与标准 CO2钢瓶塑 料管连接 7 选择 IRGASpan 红外气体分析仪调跨度 然后分别调 CO2 A 和 CO2 B 参考气体和样品气体 CO2红外分析仪 下同 用上下箭头调节 直至与标准气体 CO2 浓度相差 1Lmolmol 1 以内 8 完成上述标定后 选 择 StoreFlowRate 流速调零存盘 和 StoreZero SpanInformation 红外分析仪 调零 调跨度存盘 存储标定参数 这样仪器即可在标定的状态下工作 二 测定 1 在 Open 状态下 按 f4 键 进入 New Measurement 测定 状态 按数字 2 后用 f4 设定温度 与环境温度不要相差太大 用 f5 设置光强 2 打开叶室 夹 住被测植物叶片 使叶在叶室内的方向与其着生方向一致 用自动光源时不必 作此要求 3 待荧屏上 CO2 A CO2 B H2O A H2O B 光合作用 蒸腾 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 作用等显示的数据基本稳定后 约需 3 分钟 记录数据 4 记录数据在新的 测量模式下按 1 f1 打开一个文件 输入文件名 记录号 当进行下一 片叶测定时 用 remark 功能键重新做记录 5 按数字 1 观察仪器测定和存 储数据的次数 待完成给定的次数后 按 f3 关闭文件 进行下次测定 6 当所有的植物都测完以后 把仪器带回实验室 LI 6400 与 PC 微机兼容的 软件 将其装入计算机后可通过电缆将数据转入计算机 2 TPS 12 TPS 1 光合作用测定系统操作方法光合作用测定系统操作方法 1 连接叶室 气路 R A 与主机上的接口 R A 对应连接 2 打开主机电源时显示的第一个菜单是主菜单 1 REC 测定与记录 2 校正 3 数据输出 4 清除内存 5 时钟校正 6 诊断 按 1 选择叶室 1 标准叶室 2 通用型叶室 按 2 1REC 记录类型 A 用内部时钟设置时间进行自动记录 M 按 Record 键 进行手动记录 按 1 键可以在 A 和 M 之间转换 2INT 每次记录的时间间隔 FLO 叶室气体的流量 Y N 1 LIGHT 设置 SUN 为自然光 LAMP 为人工光源 2 LEAF AREA 输入夹入叶室内的实际叶面积 以 cm2为单位 Y N 1P 是小区号 用户输入 用于识别不同处理的测定记录 R 是记录号 如果改变小区号 记录号重新设置为 01 FREE RECORDS nnn 存储器能够存储测定结果的数量 Y 进入测定菜单状态 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 C 为参比 CO2浓度 nnn 为分析气与参比气 CO2浓度差值 Q 为量 子通量密度 H 为参比水蒸气压 nn n 为分析气与参比气水蒸气压之 间的差值 T 为叶室温度 X X 转换键 E 蒸腾速率 mmol m 2 s 1 G 气孔导度 mmol m 2 s 1 T 叶片温度 A 净光合速率 mol m 2 s 1 正值为净光合速率 负值为 呼吸速率大于光合速率 CI 细胞间隙 CO2浓度 在测定状态下按 1 2 3 返回到设置菜单 1 用于改变记录方式 2 用于 改变光源或叶面积 3 用于改变小区号 修改完毕 返回测定状态 按 Y 键 3 选择待测叶片夹入同化室 给以适当的光照 观察 CO2值变化 待 CO2值稳定后 40 秒左右 按 X 转换键 观察记录结果 或按 0 R 存储测定结果 一个叶片的测定结束 进行另一叶片的测定 测定结束 按 N 键返回到主菜单 关机 叶绿素含量的测定叶绿素含量的测定 张宪政主编 作物生理研究法 农业出版社 张宪政主编 作物生理研究法 农业出版社 1992 145 150 基本原理基本原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收 利用分光光度计在某一特 定波长测定其吸光度 即可用公式计算出提取液中各色素的含量 根据朗 伯 比尔定律 某有色溶液的吸光度 A 与其中溶质浓度 C 和液层厚度 L 成 正比 即 A CL 式中 比例常数 当溶液浓度以百分浓度为单位 液 层厚度为 1cm 时 为该物质的吸光系数 各种有色物质溶液在不同波长 下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得 叶绿素 a 和叶绿素 b 的光谱吸收锋虽然有明显的差异 但吸收曲线彼 此又有重叠 这种情况下 可根据 Lambert Beer 定律 通过代数方法 计 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响 最后分别得到两种组 分的含量 OD1 82 04Ca 9 27Cb 1 OD2 16 75Ca 45 6Cb 2 式中 Ca 为组分 a 叶绿素 a 的浓度 Cb 为组分 b 叶绿素 b 的浓度 将表中数值代入上式 1 2 经整理 得到下式 Ca 0 0127 OD1 0 00269 OD2 Cb 0 0229 OD2 0 00468 OD1 如果把 Ca Cb 的单位从原来的 g L 改为 mg L 则上式可改写为下列 形式 Ca 12 7 OD1 2 69 OD2 3 Cb 22 9 OD2 4 68 OD1 4 Ct Ca Cb 8 04 OD1 20 29 OD2 5 式中 Ct 为总叶绿素的浓度 单位是 mg L 利用式 3 4 5 可以计算叶绿素的量 一 材料 仪器设备及试剂 一 材料 新鲜 或烘干 的植物叶片 二 仪器设备 1 分光光度计 2 电子天平 感量 0 01g 3 棕色容 量瓶 4 定量滤纸 5 吸水纸 6 擦镜纸 三 试剂 96 乙醇 80 丙酮 去离子水或蒸馏水 二 实验步骤丙酮乙醇水混合液法 丙酮乙醇混合液法 1 取新鲜植物叶片 或其它绿色组织 或干材料 擦净组织表面污物 剪碎 去掉中脉 混匀 2 称取剪碎的新鲜样品0 5g 共2份 放入25mL的容量瓶中 然后加 入乙 醇 丙酮 水 4 5 4 5 1 的提取液到刻度 静置暗处提取12小时 准确称取0 1左右 放入具塞得三角瓶或刻度试管中 加混合提取液10ml 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 盖塞 在室温下 10 30度 暗处提取 直至材料变白 因材料不同需1 8h 对于少量样品如需短时间内测定 则应将三角瓶或试管放在50 60度 的水浴中快速提取20min 1h即可变白 3 取上清液在663nm和645nm波长下测定光密度 三 计算方法及公式 V 9mL 叶绿素a含量 W VAA 1000 69 2 7 12 645663 645663 22 90A 4 68A V b 1000W 叶绿素含量 645663 20 2A 8 02A V 1000W 叶绿素总含量 植物组织中自由水和束缚水含量 相对含水量的测定植物组织中自由水和束缚水含量 相对含水量的测定 一 原理 自由水未被细胞原生质胶体颗粒吸附而可以自由移动 蒸发和结冰 也可以作为溶剂 束缚水则被细胞原生成胶体颗粒吸附而不易移动 因而 不易被夺取 也不能作为溶剂 基于上述特点以及水分依据水势差而移动 的原理 将植物组织浸入高浓度 低水势 的糖溶液中一定时间后 自由 水可全部扩散到糖液中 组织中便留下束缚水 自由水扩散到糖液后 相 当于增加了溶液中溶剂 便增加了溶液的重量 同时降低了溶液的浓度 测定降低了的糖液的浓度 再根据原先已知的高浓度溶液的浓度及重量 可求出浓度降低了的糖液的重量 用浓度降低了的溶液的重量减去原来高 浓度溶液的重量即为植物组织中的自由本的重量 即扩散到高浓度溶液中 的水的重量 最后 用同样的植物组织的总含水量减去此自由水的含量 即是植物组织中束缚水的含量 二 仪器设备及试剂配制 仪器设备 阿贝折射仪 分析天平或电子顶载天平 感量 0 1mg 烘箱 干燥器 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 称量 瓶 打孔器 面积 0 5cm2左右 烧杯 瓷盘 托盘大平 感量 0 1g 量 筒 试剂 重量百分浓度为 60 65 的蔗糖溶液 用托盘天平称取蔗糖 60 65g 置 烧杯中 加蒸馏水 40 35g 使溶液总重量为 100g 溶解后备用 三 实验步骤 1 3 周祖贵 黎兆安主编 植物生理学实验指导 广西 大学内部资料 2005 5 6 1 植物组织中总含水量植物组织中总含水量的测定 1 取称量瓶 3 只 三次重复 下同 依次编号并分别准确称重分别准确称重 2 在田间选取生长一致的待测的植物数株 各选部位 长势 叶龄 一致的有代表性叶数片 用打孔器钻取小圆片 50 片 注意避开粗大的叶脉 立即装到上述称量瓶中 每瓶随机装入 50 片 盖紧瓶盖并精确称重精确称重 3 将称量瓶连同小圆片置烘箱中 105 下烘 15min 以杀死植物组织 细胞 再于 80 90 下烘至恒重 称重时须置干燥器中 持冷却后称 设称量瓶重量为 W1 称量瓶与小圆片的重量为 W2 称量瓶与烘干的小 圆片的重量为 W3 以上重量单位均为 g 下同 则植物组织的总含水量 可按下式计算 23 21 WW 100 WW 植物组织的总含水量 2 植物组织中自由水含量自由水含量的测定 1 另取称量瓶 3 个 编号并分别准确称重 2 用打孔器打取小叶圆片 150 片 植物材料的选取同上 立即随机 装入三个称量瓶中 每瓶装 50 片 盖紧瓶盖并立即称重 3 三个称量瓶中各加入 60 65 的蔗糖溶液 5mL 左右 再分别准确 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 称重 4 各瓶于暗处置 4 6h 经减压处理后 只需在暗处置 lh 其间不 时轻轻摇动 到预定的时间后 充分摇动溶液 用 WZS 1 阿贝折射仪分别 测定各瓶糖液浓度各瓶糖液浓度 同时测定原来的糖液浓度原来的糖液浓度 设称量瓶重量为 W1 称量瓶与小圆片的重量为 W2 称量瓶与小圆片及 糖液的重量为 W3 糖液原来的浓度为 C1 浸过植物组织后的糖液的浓度为 C2 则植物组织中自由水的百分含量可由下式算出 12 42 2 21 CC WW C 100 WW 植物组织中自由水的含量 3 植物组织中束缚水含量组织中束缚水含量的计算 植物组织中束缚水的含量 组织中总含水量 组织中自由水含量 4 植物相对含水量相对含水量的测定方法 张宪政主编 作物生理研究法 农业出张宪政主编 作物生理研究法 农业出 版社 版社 1992 119 120 根据邹琦主编的 植物生理学实验指导 蔗叶取样 称鲜重 G1 浸 水 5 6 小时 取出擦干 称重 再浸水 1 小时 取出擦干 称重 直至样品 饱和重量近似 得饱和鲜重 G2 然后烘干至恒重 称干重 G3 按下 式计算 GG 100 GG 13 23 相对含水量 自然饱和亏 自然饱和亏 100 相对含水量 植物根系活力的测定 植物根系活力的测定 TTCTTC 法 法 张宪政主编 作物生理研究法 农业出版社 张宪政主编 作物生理研究法 农业出版社 1992 142 143 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 一 原理 氯化三苯基四氮唑 TTC 是标准的氧化还原色素 氧化还原电位为 80mv 其氧化态无色并溶于水 还原态则是不溶于水的红色物质 TTCH 它在空气中不会自动氧化 相当稳定 所以可用 TTC 作为脱氢酶 如琥珀 酸脱氢酶 的氢受体 脱氢酶活性与根系活力成正相关 由红色生产物质 的量 还原力 即可测定根系活力 二 仪器设备及试剂 仪器设备 分光光度什 分析天平 感量 0 1mg 电于顶载天平 感量 0 1g 温箱 研钵 三角瓶 漏斗 量筒 吸量管 刻度试管 试管架 容量瓶 药勺 石英砂适量 烧杯 试剂 1 乙酸乙酯 分析纯 2 次硫酸钠 Na2S2O4 分析纯 粉末 3 1 TTC 溶液 准确称取 TTC1 0g 溶于少量水中 定容到 100mL 用时稀释至需要的浓度 4 磷酸缓冲液 1 15 mol L pH 7 5 1mol L 硫酸 用量简取比重 1 84 的浓硫酸 55 mL 边搅拌边加 入盛有 500mL 蒸馏水的烧杯中 冷却后稀释至 1000 mL 6 0 4mol L 琥珀酸 称取琥珀酸 4 72g 溶于水中 定容至 100mL 即 成 三 实验步骤 1 TTC 标准曲线的制作 取 0 4 TTC 溶液 0 2mL 放入 10 mL 容量瓶 加少许 Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的物质 再用乙酸乙酯定容至刻度 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 显匀 然后分别取此液 0 25mL 0 5mL 1 0mL 1 5mL 2 0mL 置 10mL 容 量瓶中 用乙酸乙酯定容至刻度 即得到含 25 g 50 g 100 g 150 g 200 g 的标准比色系列 以乙酸乙酯为 空白 在 485nm 波长下测定吸光度 绘制标准曲线 2 称取根尖样品 0 5g 放入 10mL 烧杯中 加入 0 4 TTC 溶液和磷酸 缓冲液的等量混合液 10mL 把根充分浸没在溶液内 在 37 下暗保温 1 3 h 此后加入 lmol L 硫酸 2mL 以停止反应 并准确计时 与此同时做一 空白实验 先加入硫酸后加入根样品 37 下暗保温 其溶液浓度 操作 步骤同上 3 把根取出 吸干水分后与乙酸乙酯 3 4mL 和少量石英砂一起在研 钵内磨碎 以提出红色物质 红色提取被移入试管 井用少量乙酸乙酯把 残渣洗涤二三次 皆移入试管 最后加乙酸乙酯使总量为 10 mL 用分光 光度计在波长 485nm 下比色 以空白试验作对照测出吸光度 查标准曲线 即可求出四氮唑还原量 4 结果计算 mgg h 四氮唑还原量 单位根鲜重的四氮唑还原强度 根重时间 修改后计算公式 时间 根重 还原量 还原速率 hg gTTC C TT 植物伤流液中糖和氨基酸的鉴定植物伤流液中糖和氨基酸的鉴定 王晶英 敖红等编 植物生理生化试验技术与原理 东北林业大学出版社 2003 99 101 植物根系是植物吸收水分和矿质元素的重要器官 也是许多重要物质 的合成和贮存器官 伤流液中含有糖 氨基酸 激素等许多物质 伤流量 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 的多少受土壤水分 温度 通气状况等外都因素的影响 也与植株生长 根系发达程度及生命活动强弱等内部因素有关 因此伤流液的数量和成分 可作为根系活力强弱的指标 一 原理 用蒽酮试剂处理可以鉴定伤流液中糖的存在 并可测定其含量 氨基 酸与茚三酮在水溶液中可发生显色反应 除脯氨酸与羟脯氨酸外 其他各 种氨基酸显色的色调与深浅相差不大 因此利用此应应可测定植物体氨基 酸的总量 二 仪器设备及试剂 仪器设备 分光光度汁 水浴锅及加热设备 引流玻管 移液管 橡 皮管管 刻度试管 刀片 试剂配制 1 蒽酮试剂 10g 蒽酮溶于 1000mL 稀硫酸 由 760mL 比重为 1 84 的硫酸用水稀释成 1000mL 2 95 乙醇 3 3 茚三酮乙醇溶液 4 500mg L 的谷氨酸标准溶液 三 实验步骤 1 伤流液的收集 选择生长健壮大小适合的植株 在离地面 3 5cm 处用刀片切去地上部 分 在地面断茎上套上橡皮管 将已弯好的引流玻管较短一端套入橡皮管 内 较长的一端插入刻度试管中或三角瓶中 整个过程要防止伤流液漏出 并用塑料薄膜封住管口以免伤流被蒸发或外界污物进入 用时剪一小口将 引流管插入 收集时间依具体情况而定 记录收集伤流液的时间和伤流液 量 计算伤流量 mL h 2 伤流液中可溶性糖的鉴定 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 取伤流液 1mL 和 1mL 蒸馏水分别加入两支干净试管中 再分别加入蒽 酮试剂 5mL 混匀 沸水浴中煮沸 5 10min 绿颜色出现即表示有糖的存 在 其深浅与糖的含量成正比 3 伤流液中氨基酸总量的测定 1 取 6 支试管按下表 加各种试剂 以制作标准曲线 试剂 123456 500mg l 谷氨酸 ml 00 10 20 30 40 5 3 茚三酮乙醇溶液 ml 0 50 50 50 50 50 5 蒸馏水 ml 1 51 41 31 21 11 0 谷氨酸含量 g 050100150200250 2 再取第七支试管加入伤流液 0 5mL 加蒸馏水 1mL 茚三酮乙醇溶 液 0 5mL 以测定伤流液中氦基酸含量 3 将上述已加好各种试剂的 7 只试管摇匀后 在沸水浴中准确加热 10 min 溶液变为蓝色 表示有氨基酸存在 取出后立即加入 5mL95 乙 醇 摇匀 冷却后以乙醇作空白对照 于 520nm 波长下测定吸光度 4 结果计算 g mL 被测出的氨基酸含量 伤流液中氨基酸含量 被测伤流液样品的体积 膜透性的测定膜透性的测定 周祖贵 黎兆安主编 植物生理学实验指导 广西大学内部资料 2005 119 120 一 原理 植物组织受到逆境伤害时 由于膜的功能受损或结构破坏而使其透性 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 增大 细胞内的各种水溶性物质包括电解质将有不同程度的外渗 将植物 组织浸入无离子水中 水的电导将因电解质的外渗而加大 伤害愈重 外 渗愈多 电导度的增加也愈大 故可用电导仪测定外液的电导度增加值而 得知伤害程度 二 仪器 N 个三角瓶 蒸馏水 胶头滴管 电导计 量筒 抽气室 电子天平 三 实验步骤 1 准确称取 1 000g 甘蔗叶片 约 1cm2 片 于三角瓶 加 30ml 水 称 重 带瓶 叶 水 抽气 20 分 静置 20 分 摇匀 测定电导率值 常温 下电导率值 记电导率单位 煮沸 10 分 冷却 加水至原总重 W 摇匀 测电导率 2 结果计算 100 处理外渗电导率值 电解质的相对外渗率 煮沸后电导率值 100 处理外渗电导率值 对照电导率值 伤害率 处理煮沸后电导率值 对照煮沸后电导率值 植物组织中丙二醛含量的测定植物组织中丙二醛含量的测定 周祖贵 黎兆安主编 植物生理学实验指导 广西大学内部教学材料 2005 114 115 赵世杰 植物组织中丙二醛测定方法的改进 植物生理学通讯 1991 30 3 207 210 一 原理 植物器官衰老时 或在逆境条件下 往往发生膜脂过氧化作用 丙二 醛 MDA 是其产物之一 通常利用它作为脂质过氧化指标 表示细胞膜 脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 MDA 在高温 酸性条件下与硫代巴比妥酸 TBA 反应形成在 532nm 波长处有最大光吸收的有色三甲基复合物 该复合物的吸光系数为 155 m mol L cm 并且在 600nm 波长处有最小光吸收 但是测定植物组织 中的 MDA 时受多种物质的干扰 其中最主要的是可溶性糖 糖与 TBA 显 色反应的最大吸收波长在 450nm 在 532nm 处也有吸收 植物受干旱 高 温 低温等逆境胁迫时可溶性糖增大 因此测定植物组织中的 MDA 时一定 要排除可溶性糖的干扰 此外在 532nm 波长处尚有非特异的背景吸收的影 响也要排除 低浓度的铁离子能显著增加 TBA 与蔗糖或 MDA 显色反应物 在 532nm 450nm 处的吸光值 所以在蔗糖 MDA 与 TBA 显色反应中需 要有一定的铁离子 在 450nm 532nm 600nm 波长处测定吸光值 即可计 算丙二醛含量 二 仪器设备及试剂配制 仪器设备 研钵 试管 可调加样器 恒温水浴锅 冷冻离心机 分光光度计 试剂配制 1 10 三氯乙酸 TCA 称取 10 0g 三氯乙酸 用蒸馏水定容至 100mL 2 0 6 硫代巴比妥酸 TBA 称取 TBA0 6g 用 5 三氯乙酸定容 至 100mL 三 实验步骤 1 取 1 0 g 植物样品 叶 根 加 10 TCA 3mL 和少量的石英砂 研磨 然后再加入 10 TCA7mL 冲洗研钵 所得匀浆在 4000r min 下离心 15min 2 取上清液 3mL 加 0 6 TBA 3mL 混合后在 100 水浴上煮沸 15min 冷却后再离心一次 3 分别测定上清液在 450nm 532nm 和 600nm 处的吸光度值 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 四 结果计算 由蔗糖 TBA 反应产物的最大吸收波长为 450nm 毫摩尔吸收系数为 85 4 10 3 MDA TBA 反应产物在 532nm 的毫摩尔吸收系数分别为 7 4 10 3和 155 10 3 532nm 非特异性吸光值可以在 600nm 波长处的吸光 值为代表 按双组分光度法原理 建立方程组 借此方程组可以求出 MDA 及可溶 性糖浓度 方程组 A450 85 4 10 3 C糖 A532 A600 155 10 3 CMDA 7 4 10 3 C糖 解得 C糖 11 71A450 mmol L CMDA 6 45 A532 A600 0 56A450 mmol L 1 按下式计算提取液中 MDA 浓度 MDA CmL MDAmol mL 反应液的体积 1000 提取液中浓度 L 测定时提取液用量 2 按下式计算样品中 MDA 浓度 1 MDAmolmL MDAmol g FW 提取液中浓度 L 提取液的体积 含量 植物组织鲜重 脯氨酸含量的测定脯氨酸含量的测定 张宪政主编 作物生理研究法 农业出版社 张宪政主编 作物生理研究法 农业出版社 1992 205 207 在逆境条件下 旱 盐碱 热 冷 冻 植物体内脯氨酸的含量显著 增加 植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性 抗旱性强 的品种往往积累较多酌脯氨酸 因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的 生理指标 另外 由于脯氨酸亲水性极强 能稳定原生质胶体及组织内的 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 代谢过程 因而能降低冰点 有防止细胞脱水的作用 在植物低温伤害的 研究中 人们把脯氨酸看作室一种防冻剂或膜稳定剂 其实质就是在冰冻 期间 可以防止细胞由于脱水而引起的伤害 在低温条件下 植物组织中 脯氨酸增加 可提高植物的抗寒性 因此 亦可作为抗寒育种的生理指标 一 原理 在酸性条件下 脯氨酸和茚三酮反应产生稳定的红色产物 该物质在 520nm 波长下有一最大吸收峰 可用分光光度计测定其含量 当用磺基水杨酸提取植物样品时 脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中 然后用酸性茚三酮加热处理后 溶液即成红色 再用甲苯处理 则色素全 部转移至甲苯中 色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低 在 520nm 波长下 比色测定吸光度 从标准曲线上查出 或用回归方程什算 脯氨酸的含量 二 仪器设备及试剂 仪器设备 分光光度计 研钵 小烧杯 容量瓶 大试管 普通试管 移液管 注射器 水浴锅 漏斗 温斗架 滤纸 剪刀 试剂 1 2 5 酸性茚三酮溶液 将 1 25g 茚三酮溶于 30mL 冰醋酸和 20mL6mol L 磷酸 6mol L 磷酸 用 85 的磷酸 36 7ml 定容 100ml 中 搅拌加热 70 溶解 贮于棕色试剂瓶中于冰箱中保存 2 3 磺基水杨酸 3g 磺基水杨酸加蒸馏水溶溶解后定容至 100mL 3 冰醋酸 4 甲苯 5 100 g mL 脯氨酸标准溶液 在分析天平上精确称取 25 mg 脯氨 酸 倒入小烧杯内 用少量蒸馏水溶解 少量乙醇溶解 然后倒入 250mL 此文档收集于网络 如有侵权 请联系网站删除 此文档仅供学习与交流 容量瓶中 加蒸馏水定容至刻度 此标准液中每毫升含脯氨酸 100 g 三 实验步骤 1 标准曲线的绘制 1 系列脯氨酸浓度的配制 取 7 个 50mL 容量瓶 分别盛入 100 g mL 脯氨酸标准溶液 0 0 5mL 1 0mL 1 5mL 2 0mL 2 5mL 及 3 0mL 用蒸馏水定容至刻度 摇匀 各瓶的脯氨酸浓度分别为 0 g mL 1 g mL 2 g mL 3 g mL 4 g mL 5 g mL 及 6 g mL 2 取 7 支试管 分别吸取 2mL 系列标准浓度的脯氨酸溶液及 2mL 冰醋酸和 2mL 酸性茚三酮溶液 每管在沸水浴中加热 30min 冷却后各试 管准确加入 4mL 甲苯 振荡 30s 静置片刻 使色素全部转至甲苯溶液 用移液枪轻轻吸取各管上层脯氢酸甲苯溶液至比色杯中 以甲苯溶液为空 白对照 于 520nm 彼长处进行比色 2 样品的测定 准确称取不同处理的植物叶片 0 5g 分别置试管中 然后向各管分别 加入 5mL3 的磺基水杨酸溶液 加塞在沸水浴中提取 10min 提取过程 中要经常摇动 冷却后 吸取 2mL 提取液于另一干净的带塞试管中 加 入 2ml 水 2mL 冰醋酸及 4mL 酸性茚三酮试剂 每管在沸水浴中加热 60min 溶液即呈红色 冷却后各试管