血清miR101、miR204对胃癌的诊断价值及其与幽门螺旋杆菌感染的关系.doc

血清miR101、miR204对胃癌的诊断价值及其与幽门螺旋杆菌感染的关系 叶消化肿瘤杂志渊电子版冤曳圆园员9年9月第11卷第3期允阅蚤早韵灶糟燥造渊耘造藻糟贼则燥灶蚤糟灾藻则泽蚤燥灶冤袁September圆园员9袁灾燥造11袁晕燥援3血清miR-101尧miR-204对胃癌的诊断价值及其与幽门螺旋杆菌感染的关系袁锡裕袁李庆贤袁黄东袁龚时文南方医科大学附属东莞市人民医院普外科袁广东东莞523000揖摘要铱目的检测胃癌患者血清中miR-101尧miR-204的表达水平袁探讨其与胃癌患者临床病理特征及幽门螺旋杆菌渊Hp冤感染的关系袁评价血清miR-101尧miR-204对胃癌的诊断价值袁为胃癌的临床诊断提供参考遥方法选取东莞市人民医院普外科xx年5月2018年2月收治的72例胃癌患者作为此次研究的观察组袁另选取70例慢性浅表性胃炎患者作为此次研究的对照组遥检测两组患者Hp感染情况以及血清中miR-101尧miR-204的表达水平遥分析血清miR-101尧miR-204表达水平与Hp感染以及胃癌患者临床病理特征的关系袁采用受试者工作特征曲线渊ROC冤分析其对胃癌的诊断价值遥结果观察组血清miR-101尧miR-204表达水平均明显低于对照组袁差异有统计学意义渊P0.05冤遥两组Hp感染为阳性的患者血清miR-101尧miR-204表达水平均明显低于Hp感染为阴性的患者袁差异有统计学意义渊P0.05冤遥观察组患者中有淋巴结转移的患者以及TNM分期为IIIIV期的患者的血清miR-101尧miR-204表达水平明显降低渊P0.05冤遥血清miR-101诊断胃癌的敏感度和特异度分别为71.35%和84.61%袁血清miR-204诊断胃癌的敏感度和特异度分别为70.41%和82.83%袁血清miR-101联合miR-204诊断胃癌的敏感度和特异度分别为73.76%和88.62%遥结论血清中miR-101尧miR-204的表达水平在Hp感染为阳性以及病情程度较为严重的胃癌患者中明显降低袁其可作为胃癌诊断的新型标志物遥揖关键词铱血清曰miR-101曰miR-204曰胃癌曰诊断曰幽门螺旋杆菌曰感染Diagnostic value of serum miR-101and miR-204in gastric cancer andits relationshipwith Heli鄄cobacter pylori infectionYUAN Xi-yu,LI Qing-xian,HUANG Dong,GONG Shi-wenDepartment ofGeneral Surgery,Affiliated DongguanPeople爷s Hospital,Southern MedicalUniversity,Dongguan523000,China揖粤遭泽贼则葬糟贼铱韵遭躁藻糟贼蚤增藻To observethe expressionof miR-101and miR-204in the serum of gastriancer patients,to explorethe relationshipwith theclinical featuresof gastric cancer patientsand theinfectionof Helicobacter pylori渊Hp冤,to evaluatethe diagnosticvalue of serummiR-101and miR-204in gastriancer,and providereference forclinical diagnosis of gastric cancer.Methods72cases ofgastric cancerwhowere treatedin ourhospital fromMayxxto February2018were selected as the observation group ofthis study,and70cases ofchronic superficialgastritis wereselectedasthe control group.The Hp infectionand theexpression levels of miR-101and miR-204in thetwo groupswere detected.The serum levels ofmiR-101and miR-204in theobservation group and the controlgroup,receiver operatingcharacteristiurve渊ROC冤was usedto analyzethe diagnosticvalueofgastric cancer.Results Theserumlevelsof miR-101and miR-204in theobservation groupwere significantly lower than those in thecontrolgroup,the differencesarestatistically significant渊P0.05冤.In thetwo groups,theserummiR-101and miR-204levelsofthepatients withpositive Hp infection weresignificantlylowerthanthose with negativeHpinfection,and thedifferenceswere statisticallysignificant渊P0.05冤.The levelsof miR-101and miR-204in patientswithlymph nodemetastasis in theobservationgroupandthosewithTNM stageIIIIV stagewere significantlydecreased渊P0.05冤遥本研究经我院伦理委员会批准通过遥1.2纳入排除标准观察组纳入标准院淤患者均经胃镜病理证实袁且首次诊断为胃癌曰于采用手术治疗曰盂均未经生物治疗尧放疗尧化疗等遥对照组纳入标准院淤患者均经胃镜病理证实为慢性浅表性胃炎曰于处于炎症反应稳定期遥两组均排除院淤合并其它恶性肿瘤者曰于合并血液尧免疫系统性疾病者曰盂肝尧肾尧心功能不全者曰榆近半年服用过非甾体类抗炎药尧抗生素尧胃黏膜保护剂等患者遥1.3研究方法1.3.1Hp感染检测咱6暂采用13C呼气试验检测所有研究对象的Hp感染情况院受试者均于空腹状态下服用13C尿素胶囊袁30min后采用红外能谱仪进行呼气试验袁呼出气13C原子峰超出基线5%即为Hp感染阳性遥1.3.2血清标本采集采集观察组患者手术前1d的空腹静脉血5ml袁以及对照组患者行胃镜检查后3d的空腹静脉血5ml袁置于抗凝管中遥3000r/min离心15min后取上清液置于-80益条件下保存待测遥1.3.3血清miR-101尧miR-204检测渊1冤提取总RNA院冷冻保存的血清标本于冰上复溶混匀后取200滋l置于EP管袁加入800滋l Trizol试剂渊invitrogen冤颠倒混合均匀曰将裂解液加入EP管中静置袁随后加入氯仿渊北京鑫鼎鹏飞科技发展有限公司冤200滋l袁振荡30s尧静置10min袁离心15min袁去上层水后加入新的EP管中曰加入异丙醇试剂渊广州市麒旭化工有限公司冤并静置袁离心10min去除上清液曰加入1ml100%乙醇洗涤尧离心5min袁去除上清液曰在室温下使沉淀中的RNA自然干燥袁Rnase-free水20滋l溶解RNA沉淀袁将溶液置于-80益条件下保存待测遥渊2冤RNA纯度及质量浓度鉴定院取总RNA溶液5滋l袁加入Rnase-free dd水稀释20倍袁用分光光度计测定260nm尧280nm波长吸光度值袁当其比值渊A260/A280冤=2.0依0.1时认为纯度合格遥渊3冤PCR反转录反应院按照反转录试剂盒渊杭州主诺生物科技有限公司冤说明书配置总体积为10滋l的反应体系袁分别在16益30min尧42益30min尧85益5min的条件下进行反应袁每个反应设一复孔遥95益10s尧60益33s条件下循环40次进行PCR扩增曰加入premix尧探针袁以合成的cDNA为模板进行反应袁将U6sRNA作为内参袁采集荧光检测miR-101尧miR-204表达水平袁表达水平进行2-2吟吟Ct计算并进行对数转换遥gastric cancerwere70.41%and82.83%respectively.The sensitivityand specificityofserummiR-101bined withmiR-204for thediagnosisofgastric cancerwere73.76%and88.62%,respectively.Conclusion Theexpression levelsof miR-101and miR-204in serumare significantlylower inpatientswith positiveHpinfectionand moresevere patientswith gastriancer,which canbe usedas anew markerforthediagnosisofgastriancer.揖运藻赠憎燥则凿泽铱Serum;miR-101;miR-204;Gastric cancer;Diagnosis;Helicobacter pylori;Infection237叶消化肿瘤杂志渊电子版冤曳圆园员9年9月第11卷第3期允阅蚤早韵灶糟燥造渊耘造藻糟贼则燥灶蚤糟灾藻则泽蚤燥灶冤袁September圆园员9袁灾燥造11袁晕燥援3Hp感染阳性阴性tP例数3139-miR-1011.121依0.2721.695依0.3477.5460.001miR-2040.912依0.1671.549依0.29811.3020.001表2对照组患者血清miR-101尧miR-204表达与Hp感染的关系渊曾依泽冤Hp感染阳性阴性tP例数5616-miR-1010.493依0.1160.857依0.1837.5350.001miR-2040.338依0.1040.697依0.1917.2190.001表3观察组患者血清miR-101尧miR-204表达与Hp感染的关系渊曾依泽冤1.4统计学方法研究数据采用SPSS20.0软件进行统计处理袁计数资料以率渊%冤表示袁采用字2检验袁计量资料以均值依标准差渊曾依泽冤表示袁采用t检验遥此外袁应用ROC曲线分析血清miR-101尧miR-204对胃癌的诊断价值遥P0.05为差异有统计学意义遥2结果2.1Hp感染检测结果观察组患者Hp感染检测结果阳性56例袁阳性率为77.78%曰对照组患者Hp感染检测结果阳性31例袁阳性率为44.29%遥观察组Hp感染阳性率明显高于对照组渊字2=16.777袁P=0.000冤遥2.2血清miR-101尧miR-204检测结果观察组血清miR-101尧miR-204表达水平均明显低于对照组袁差异有统计学意义渊P0.05冤遥2.3血清miR-101尧miR-204表达与Hp感染的关系对照组Hp感染为阳性的患者血清miR-101尧miR-204表达水平均明显低于Hp感染为阴性的患者袁差异有统计学意义渊P0.05冤袁见表2遥观察组Hp感染为阳性的患者血清miR-101尧miR-204表达水平均明显低于Hp感染为阴性的患者袁差异有统计学意义渊P0.05冤袁而与淋巴结转移和TNM分期有关渊P0.05冤遥有淋巴结转移的患者以及TNM分期为IIIIV期的患者的血清miR-101尧miR-204表达水平明显降低渊P0.05冤遥见表4遥2.5血清miR-101尧miR-204对胃癌的诊断价值以本研究的观察组渊阳性样本冤和对照组渊阴性样本冤资料为样本袁建立ROC分析模型袁探讨血清miR-101尧miR-204对胃癌的诊断价值袁结果表明院血清miR-101诊断胃癌的ROC曲线下面积渊AUC冤为0.834渊95%CI院0.7640.937冤袁诊断阈值为0.80渊理论阈值取整冤袁对应的敏感度和特异度分别为71.35%和84.61%曰血清miR-204诊断胃癌的AUC为0.817渊95%CI院0.7160.902冤袁诊断阈值为0.65渊理论阈值取整冤袁对应的敏感度和特异度分别为70.41%和82.83%曰此外袁建立上述二指标联合诊断模式渊串联联合诊断冤袁以本研究样本结果进行统计袁结果显示院血清miR-101联合miR-204诊断胃癌的敏感度和特异度分别为73.76%和88.62%袁提示联合诊断和两指标独立应用效果相近袁并无明显的提高遥ROC曲线见图1遥组别对照组观察组tP例数7072-miR-1011.441依0.3070.574依0.15321.2060.001miR-2041.267依0.2810.448依0.11622.5860.001表1两组血清miR-101尧miR-204检测结果比较渊曾依泽冤性别年龄渊岁冤分化程度淋巴结转移TNM分期男女逸60约60高分化中低分化是否IIIIIIIV例数42303834195345272151miR-1010.586依0.1410.557依0.1350.552依0.1370.594依0.1280.607依0.1290.562依0.1310.482依0.1460.727依0.1530.683依0.1470.529依0.134t0.8761.3391.2906.7714.309P0.3840.1850.2010.0010.001miR-2040.431依0.1070.472依0.0980.461依0.0960.434依0.0920.501依0.1480.429依0.1360.289依0.1320.713依0.1040.584依0.1270.392依0.112t1.6591.2151.93514.2366.357P0.1020.2280.0570.0010.001表4观察组患者血清miR-101尧miR-204表达与临床病理特征的关系渊曾依泽冤238叶消化肿瘤杂志渊电子版冤曳圆园19年9月第11卷第3期允阅蚤早韵灶糟燥造渊耘造藻糟贼则燥灶蚤糟灾藻则泽蚤燥灶冤袁September圆园员9袁灾燥造11袁晕燥援33讨论Hp定植于人体胃部袁是一种呈螺旋状的需氧革兰氏阴性菌遥世界卫生组织国际癌症研究中心在1994年将Hp列为I类致癌原咱7暂袁近年来许多学者就Hp感染与胃癌的关系进行了报道遥Cai H等人咱8暂发现胃癌患者的Hp抗原的血清阳性率与胃癌发病率相关袁可作为胃癌发生的预测指标遥Piao JY等人咱9暂观察到胃癌中Hp感染在转录激活因子3渊STAT3冤的活化起到重要作用袁其可能通过触发Stat3的磷酸化袁进一步使Stat3炎性信号通路激活袁从而影响到胃癌的发生尧发展及预后遥曾涛等人咱10暂的报道认为Hp感染量增大时胃癌患者的生存状况变差袁且Hp感染与患者的临床病理特征存在一定联系遥本研究中观察组Hp感染阳性率为77.78%袁明显高于对照组的44.29%袁提示胃癌患者具有较高的Hp感染率遥结合上述相关研究咱810暂可推测控制Hp感染是预防胃癌的一个重要环节遥miRNA的表达可影响细胞的增殖尧分化以及细胞内部的物质能量代谢袁目前的研究咱11暂已发现多种miRNA的异常表达对胃癌的发生尧发展起到抑癌或致癌的作用遥本研究中袁观察组血清miR-101尧miR-204表达水平均明显低于对照组袁且两组中Hp感染为阳性的患者miR-101尧miR-204表达水平均明显低于Hp感染为阴性的患者袁提示miR-101尧miR-204表达水平的下降可能导致胃癌发生风险的增加袁同时Hp感染可能是miR-101尧miR-204表达水平下降的重要影响因素遥推测其原因袁miR-101是一种具有抑癌作用的miRNA袁研究发现袁其在乳腺癌咱12暂尧结直肠癌咱13暂等多种恶性肿瘤中可通过抑制多种靶基因的表达起到抑制癌细胞增长的作用遥miR-204在不同肿瘤中发挥着不同的作用袁其在前列腺癌咱14暂尧肾癌咱15暂等肿瘤中呈高表达袁可促进肿瘤的增殖和转移袁但在大肠癌咱16暂尧鼻咽癌咱17暂等肿瘤中的表达下调袁起到抑癌基因的作用袁而在胃癌中袁miR-204已被证实具有抑癌的作用咱18暂遥当胃癌发生时袁患者血清miR-101尧miR-204表达受到抑制袁抑癌作用降低遥此外袁Hp感染可能通过促进胃癌患者尿素酶尧细胞空泡毒素等物质的分泌袁进一步刺激胃黏膜组织加剧炎症反应尧激活免疫系统咱19暂袁从而导致miR-101尧miR-204表达水平进一步降低遥本研究进一步观察发现袁有淋巴结转移以及TNM分期较高的胃癌患者的血清miR-101尧miR-204表达水平明显降低袁说明miR-101尧miR-204对胃癌的发展具有调控作用遥miR-101对癌细胞上皮-间质转化过程具有抑制作用袁可以有效阻止这一过程中细胞间黏附蛋白的减少袁从而阻止癌细胞的转移尧扩散咱20暂遥另有研究表明咱21暂袁B淋巴细胞瘤-2渊Bcl-2冤的miRNA上存在着能与miR-204相结合的3爷-UTR袁因此miR-204可通过下调Bcl-2的表达袁对胃癌细胞的增殖起到抑制作用遥因此袁当血清miR-101尧miR-204表达水平下降时袁其对胃癌患者癌细胞的增殖尧转移的抑制作用也明显降低遥而miR-101尧miR-204究竟通过何种图1血清miR-101及miR-204诊断胃癌的ROC曲线239叶消化肿瘤杂志渊电子版冤曳圆园员9年9月第11卷第3期允阅蚤早韵灶糟燥造渊耘造藻糟贼则燥灶蚤糟灾藻则泽蚤燥灶冤袁September圆园员9袁灾燥造11袁晕燥援3信号通路或分子机制对胃癌细胞的增殖尧转移进行调节仍有待于进一步的实验研究予以明确遥ROC曲线分析显示袁血清miR-101尧miR-204诊断胃癌具有较高的特异度和敏感度袁但联合诊断渊串联模式冤的敏感度仅为73.76%袁提示血清miR-101尧miR-204对胃癌有一定的诊断价值袁可与其它诊断方法结合进行诊断遥综上所述袁miR-101和miR-204作为抑癌基因参与了胃癌的发生发展过程袁Hp感染以及病情的加重都可导致胃癌患者miR-101尧miR-204表达水平下降遥miR-101尧miR-204在不同病情的胃癌患者血清中的表达有显著差异袁其水平可作为胃癌患者病情的判断依据遥同时miR-101尧miR-204的检测具有非侵入性尧易于操作等优点袁易于成为新的胃癌诊断的标志物遥参考文献许林利,查名宝,李晟,等.中医药干预对78例进展期胃癌生存期影响的单因素和多因素分析咱J暂.安徽中医药大学学报,xx,36渊6冤:14-17.Chen 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