临床第次实验mqf

第五次实验,实验目的,1、认识支原体集落、螺旋体形态2、了解性病的防治方法3、观察真菌形态、培养特性,1、检查牙垢中螺旋体（1份/人）2、真菌检查法（1份/人）3、观察梅毒螺旋体形态（示教）4、观察支原体集落（示教）5、HIV（录象）,实验内容,一、检查牙垢中螺旋体,螺旋体是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状，多数比细菌大，介于细菌与原虫之间，无鞭毛，但有轴丝（壁与膜之间），运动活泼的G-原核细胞型微生物，广泛分布于自然界与动物体，种类多，多为非致病性，仅少数对人致病，对人致病的有钩端螺旋体、回归热螺旋体和梅毒螺旋体等。 正常人口腔牙龈部寄居有奋森氏螺旋体，并与梭形杆菌共存，当机体抵抗力下降时（如病后），这两种菌大量繁殖，梭形杆菌协同奋森氏螺旋体可引起奋森咽峡炎、奋森氏口炎、牙龈炎和口腔坏疽等。,材料,牙签 、 生理盐水、玻片染液 结晶紫、碘液、 95%酒精、 稀释石碳酸复红,方法,1玻片一张，放生理盐水1-2环，用牙签取牙垢少许与生理盐水混合制成涂片2待涂片干后火焰固定, 革兰氏染色,镜检,牙垢螺旋体检查涂片制备,标本涂片-干燥-固定-结晶紫初染1分钟-水洗-碘液媒染1分钟-水洗-95%酒精脱色-水洗-稀释石碳酸复红染液复染30秒钟-水洗-自干或烘干、印干-镜检（油镜）,二、真菌检查法,真菌（fungux）是一大类具有细胞壁和典型细胞核不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。真菌的形态有单细胞和多细胞两大类，单细胞真菌呈圆形或卵圆形常见于酵母菌，类酵母菌以出芽方式繁殖。多细胞真菌大多长出菌丝与孢子，各种多细胞真菌的菌丝与孢子形态不同，菌落特征也不同，是鉴别真菌的重要标志。,真菌基本形态单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。,烟曲霉,白假丝酵母,真菌的菌落白假丝酵母：菌落圆形，较大，白色菌落底层有假菌丝多细胞真菌：观察气生菌丝，营养菌丝，表面隆起，浅沟及菌落基底颜色。,白假丝酵母(血平板),黄曲霉,原理,直接涂片检查 用显微镜直接检查标本中有无菌丝及孢子的存在，对皮肤丝状菌的感染可作初步诊断，本法简单迅速易行。,材料,标本:脚皮等 试剂:10KOH其他:玻片、镊子、酒精灯等,方法 KOH透明法,（1）取脚皮少于玻片上，加二滴10%KOH溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。（2）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用高倍镜证实,注意：盖玻片倾斜45度慢慢盖上，不能产生气泡！,标本片制备,真菌检查镜下观,报告：“找到菌丝或孢子”“找到发外孢子”“找到发内菌丝”,各种操作步骤,牙垢螺旋体检查:标本涂片-干燥-固定-结晶紫初染1分钟-水洗-碘液媒染1分钟-水洗-95%酒精脱色(淡紫色到无色)-水洗-稀释石碳酸复红染液复染30秒钟-水洗-自干或烘干、印干-镜检（油镜）,真菌检查法:（1）取脚皮少许于玻片上，加二滴10%KoH溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。（2）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用高倍镜证实,五、观察梅毒螺旋体形态,梅毒螺旋体：Fontana镀银染色，菌体非常细小，弯曲，螺旋状，呈棕褐色，有紧密螺旋。,六、支原体,支原体是一类没有细胞壁，呈多形性，能在无生命的培养基中生长繁殖的最小微生物。大小介于细菌和病毒之间。普通染色不易着色，用Giemsa染色着色较浅。革兰染色为阴性。营养要求较高，需要在含1020%马血清和酵母浸液的培养