病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则

病毒感染的检查方法与防治原则,第24章,第一节 病毒感染的检查方法,病毒感染的检查,一般原则：特异、敏感、快速、简便方法1根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。2根据可疑病毒的生物学性状，机体免疫应答和临床过程以及病人当前所处的时机，确定实验诊断方法。,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清,二、病毒的分离与鉴定,一般程序：,标本,无菌处理,动物接种鸡胚培养细胞培养,指标阳性指标阴性,病毒鉴定,盲传23代,指标阴性,病毒阴性,（一）病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养 分类 悬浮细胞培养 原代细胞细胞种类 二倍体细胞 传代细胞系,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,2.鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity）接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒,2、鸡胚培养,优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂,3.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒,1病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； 形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,（二）病毒的鉴定,2.病毒形态学鉴定,电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大,3.病毒血清学鉴定,鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集（血凝试验） 病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集 （血凝抑制试验）,(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） 多种病毒鉴定(3)凝胶免疫扩散试验 多种病毒鉴定,4.病毒分子生物学鉴定,抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序,（三）病毒数量与感染性测定,1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）,2.蚀斑形成试验 3.50组织细胞感染量,感染性病毒量,(四) 新病毒的鉴定,核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学鉴定 血清学鉴定 基因测序和生物对比,四、病毒感染的快速诊断,数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）,（一）形态学检查,电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵体,（二）病毒成分检测,1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序,（三）病毒感染的血清学诊断,应用：采取标本分离病毒为时已晚目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等,1.中和试验（neutralizing test）,病毒中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用,2.补体结合试验,用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。,3.血凝抑制试验 流感疫苗接种后效果观察及流感流行病学调查,4、早期抗体检测,可诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒 EBV早期抗原抗体 EAV核心抗原抗体 早期抗原的抗体 EAV衣壳抗原抗体,第二节 病毒感染的特异性预防,微生物及其代谢产物 生物制品 动物免疫血清 免疫细胞 细胞因子 防治和诊断感染性疾病,疫苗: 死疫苗(killed vaccine)如白百破、伤寒、流脑、乙脑、流感、钩端螺旋体等。可激发HI，安全、方便；但抗原性改变，效果差，需多次注射；反应重）。 活疫苗（living vaccine）如BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎和麻疹疫苗等。可激发HI、CMI； 多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。联合疫苗在试用中。 基因工程疫苗：目的基因 原核或真核细胞 基因产物 （如乙肝疫苗）,导入,人工培养,一、人工主动免疫常用生物制品,重组载体疫苗： 蛋白质抗原基因 减毒的病毒或细菌 基因整合 基因产物 疫苗合成疫苗： 根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。 缺点是免疫原性弱、只激发B细胞引起HI，因为抗病毒依赖CMI）。,转入,培养,表达,亚单位疫苗： 除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。如脑膜炎球菌和流感杆菌表面的特异性多糖+ 吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒） 、流感疫苗、乙肝疫苗等，这种疫苗防止减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。DNA疫苗： 即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的T细胞，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。,转基因植物疫苗： 将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种。如食用西红柿，获得乙肝疫苗的接种。治疗疫苗： 葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作用，后者是打破免疫耐受。 类毒素： 细菌外毒素+0.3%0.4%甲醛 类毒素(毒性消失,保留抗原性).如白百破疫苗.,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-、 细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞,第三节 病毒感染的治疗,核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素