常见真菌的分离与鉴定

常见真菌的分离与鉴定常见真菌的分离与鉴定 上海长征医院皮肤科真菌室 徐 红 你知道真菌具有的共同特征吗 2005 年年 6 月月 13 19 日全国各地举行了第日全国各地举行了第 8 届中国护足周 主题是届中国护足周 主题是 积极治疗足病 杜绝积极治疗足病 杜绝 家庭传染家庭传染 在中国在中国 每每 2 个人中就有个人中就有 1 人罹患足病 其中成年人发病比例高达人罹患足病 其中成年人发病比例高达 75 超过 超过 60 的足的足 病为真菌感染 其中足癣发病率为病为真菌感染 其中足癣发病率为 45 2 甲真菌病 甲真菌病 俗称甲癣俗称甲癣 占占 15 5 40 的足癣患者是的足癣患者是 被家人传染的 在真菌患者中只有被家人传染的 在真菌患者中只有 23 8 寻求治疗 其中寻求治疗 其中 50 的患者症状稍有好转就不继续的患者症状稍有好转就不继续 治疗 治疗 真菌其实很常见 真菌就生活在我们身边 真菌其实很常见 真菌就生活在我们身边 病原真菌的一般特性病原真菌的一般特性 真菌 Fungi 是微生物中的一个大类 是一群数目庞大的细胞生物 估计全世界已有记载的真菌 有 10 万种以上 它们的子实体小者用显微镜才能见到 大者可达数十厘米 它们共同特征是具有真正 的细胞核 产生孢子和不含叶绿素 以寄生或腐生等方式吸取养料 仅少数类群为单细胞 其他都有分 支或不分支的丝状体 能进行有性或无性繁殖 具有纤维素 或其他葡聚糖 或几丁质的微纤维或两者 兼有的细胞壁的有机体 对人类和动物致病的真菌大约 100 余种 属于病原真菌 一 基本性状 一 形态结构 一 形态结构 真菌分单细胞真菌与多细胞真菌两大类 前者属于酵母菌 yeast 一般呈球形或卵圆形 后者称为 霉菌 mold 或丝状真菌 呈丝状分枝 菌丝交织象绒球状 另有一些真菌可因寄生环境及培养条件 养料 温度 氧气等 的不同可交替出现两种形态 即在室温中呈霉菌型 在 37 或体内呈单细胞 的酵母型 这类真菌有双相性 所以称之为双态真菌或二相真菌 真菌的细胞结构与一般植物细胞相似 有定型的细胞核及完善的细胞器 但胞壁与细菌胞壁不同 真菌的细胞结构与一般植物细胞相似 有定型的细胞核及完善的细胞器 但胞壁与细菌胞壁不同 不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成 也含有脂多糖蛋白质 其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖 不生不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成 也含有脂多糖蛋白质 其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖 不生 长真菌丝 革兰氏染色呈阳性 丝状真菌分菌丝及孢子两部分长真菌丝 革兰氏染色呈阳性 丝状真菌分菌丝及孢子两部分 形态多种多样 分述如下 1 菌丝 Hypha 真菌在 合适的环境中 由孢子生出嫩芽 称为芽管 芽管逐渐延长呈丝状 称菌丝 菌丝继续生长并生长分 枝 增殖的菌丝交织组成菌丝体 其中一部分菌丝深入被寄生的物 体或培养基中吸取养料 称为营 养菌丝体 另一部分菌丝向空间 生长 称为气生菌丝体 气生菌 丝体能产生孢子者称为生殖菌丝 体 菌丝中各个细胞间有明显分 隔者 称为有隔菌丝 主要见于病原性真菌 很多非病原真菌的菌丝无明显分隔 称为无隔菌丝 有些 菌丝可呈各种特殊形式 如球拍状 破梳状 螺旋状 结节状 关节状 鹿角状 假菌丝 2 孢子 生成孢子是真菌扩大繁殖的一种方式 真菌孢子的抵抗力 形态及作用等均与细菌芽胞不 同 分为无性孢子及有性孢子两大类 不经过两性细胞的结合而形成的孢子叫无性孢子 这一繁殖过程 称为无性繁殖 常见的无性孢子有 5 种 关节孢子 厚壁孢子 孢子囊孢子 芽孢和分生孢子 病原真 菌属于不完全菌纲 很少产生有性孢子 大多数是无性孢子 甲真菌病直接镜检见关节菌丝 400 倍 1 厚壁孢子 当真菌在不利环境中 由菌丝 内胞浆缩浓和胞壁增厚而成 呈圆形 当环境好转时 可生成芽管成长为菌丝 2 关节孢子 菌丝断裂形成长方形两端略钝 圆的孢子叫关节孢子 如白地霉和粗球孢子菌 3 孢子囊孢子 为鞭毛菌和接合菌的无性生殖形式 孢子囊中所含的孢子来源于分枝菌丝或胞 囊梗顶端膨大形成孢子囊 囊内原生质浓缩集聚 割裂而成 一般数目较多 孢子囊形态多样 因种而 异 4 芽生孢子 由菌细胞出芽生成 见于念珠菌及隐球菌 前者 类酵母菌 出芽后孢子伸长呈 丝状 但不见与母细胞分离 称为假菌丝 在假菌丝上的收缩点也可出芽成芽生孢子 5 分生孢子 是子囊菌和半知菌的无性孢子 也是半知菌分类的主要依据 单细胞的分生孢子 称小分生孢子 有蒂或无蒂 侧生或游离 分散或成群 圆形 梨形 卵圆形或其它形状 表面粗糙或 光滑 或有或无各种纹饰 多细胞的分生孢子称大分生孢子 有纺锤形 棒形 球棍形 镰刀形及其它 形状 两端尖或圆或一端圆 厚壁或薄壁 壁光滑或粗糙 有色或无色 分隔有多有少 二 培养特性及繁殖方式 二 培养特性及繁殖方式 1 培养特性 大多数真菌对营养要求不高 只需要水 盐 简单的氮源及碳水化合物就可生长 一般常用沙堡氏琼脂基 主要成分葡萄糖 4 蛋白胨 1 琼脂 2 培养都能生长 但需要弱酸性 pH 4 6 较低孵育温度 22 28 充 分温度和氧气供应才能生长良好 侵害内脏的某些真菌在 37 含血的培养基中生长良好 真菌生长都比较缓慢 大多需孵育数天后才成明显菌落 菌落有下列三 种类型 1 酵母型菌落 外观湿润稠软致密 类似一般细菌菌落 镜检只见有圆形或椭圆形生芽细胞 例如隐球菌的菌落 2 类酵母型菌落 外观性状似酵母型菌落 镜检除见有出芽的细胞外 尚可见到假菌丝 例如 真菌的哪些特性决定了其有极强的生 存能力 念珠菌的菌落 3 丝状型菌落 由多数分枝的菌丝体向上生长组成疏松的绒球状 表面有很多孢子 显示各种 色泽 菌落可呈棉絮状 绒球状 粉末状或石膏样 其正面和背面可显示各种不同色素 常作为鉴定菌种 的参考 镜检可见有纵横交织的菌丝及各种孢子 例如各种癣菌的菌落 2 繁殖方式 有多样性 包括出芽增殖 菌丝增长 菌丝分枝和断裂 产生无性孢子及有性孢子进 行繁殖 因此它繁殖力很强 但生长速度较慢 三 变异性和抵抗力 三 变异性和抵抗力 真菌很容易发生变异 在人工培养基中多次移种或孵育过久 就可出现形态结构 菌落性状 色素 以及各种生理性状 包括毒力 的改变 用不同的培养基和温度培养真菌 其性状也有改变 真菌对干 燥阳光紫外线及一般化学消毒剂耐受性却较强 但对热的抵抗力却不强 60 以上 1 小时即可杀死孢子 及其菌丝 在 1 3 石炭酸 2 5 碘酊 0 1 升汞及 10 甲醛中可被灭活 用甲醛气体熏蒸被真菌污 染的衣物用具 可杀灭真菌菌丝及其孢子 但真菌对一般抗菌素及磺胺药均不敏感 只对二性霉素 酮 康唑 制霉菌素等非常敏感 治疗真菌感染常用此药 四 致病性与免疫性 四 致病性与免疫性 1 致病性 病原真菌的致病机制还是一个未完全解决的问题 根据其侵害部位 主要分为下列两类 1 浅部真菌病 主要由癣菌引起 大多为外源感染 常易侵害皮肤 指 趾 甲及须发等含角 质的组织 引起癣症 2 深部真菌病 可由各种真菌引起 包括类酵母菌 二相真菌及丝状菌 侵害粘膜 皮下组织 内脏及脑膜等处 有时扩散全身 主要是内源性感染 也可由外源传染 前者是因机体抵抗力降低 如 患重病 长期使用免疫抑制剂 广谱抗菌素或放射治疗 患恶性病 严重烧伤等时 造成体内菌群失调 以致常居在体内的某些真菌 如白念珠菌 甚至平时不致病的环境中的真菌 如曲霉 毛霉 等也会 乘机侵害 一些传染性较强的内脏真菌病是内外源感染 2 免疫性 浅部真菌病一般在血中不产生特异性抗体 病后无免疫保护力 只是儿童头癣等青春期 后头皮皮脂增多时可以自愈 以后不再感染 其他部位癣症治愈后仍可再感染 深部真菌病虽可产生抗 体 但无明显免疫保护作用 三种癣菌从菌种鉴定上有何共同和不 同之处 临床常见的病原性真菌临床常见的病原性真菌 一 浅部真菌 皮肤癣菌 皮肤癣菌 皮肤癣菌又称皮肤丝状真菌 有下列三属 见表 1 都只侵犯体表角化组织 皮肤 毛发及指甲 和趾甲 不侵害深部组织 或内脏 皆属外源性传染 由接触患癣病人 动物 狗 猫 鼠 牛 马 等 或染菌物体而感染 1 毛癣菌属 毛癣菌属 红色毛癣菌 1 直接镜检 皮屑及甲屑 分枝 分隔的菌丝有时可断裂或关节孢子状 毛 发 发外型感染表现为发外孢子排列成串 少数为发内型感染孢子在发内排列成链状 毛发穿孔试验阴性 2 培养特征 在葡萄糖蛋白胨琼 脂 25 生长比较快 菌落形态有多种 表现 镜检也不完全一样 常见有下列四 种 I 型 羊毛状 白色羊毛状菌丝充满斜面 典型的卷成筒状 边缘贴牢管壁 呈鲜红色 背面开始 在中心有一红色小点 以后形成深红色环 最后成片为葡萄酒色 色素边缘划界非常明显 少数 I 型菌 株表现无红色色素 正面白色 背面呈淡黄色类似石膏 I 型 亦有正面白色而背面呈灰黑色 II 型 绒 毛状 粉红色绒毛状菌丝生长 占斜面 3 5 菌丝稀疏 透过菌丝可见粉红色的基底 背面颜色同 I 型 相同 III 型 粉未状 菌落表面稍有凸起 呈粉末状 粉红色 约占斜面的 1 2 2 3 背面同 I 型 IV 型 沟纹状 菌落生长相对较慢 比以上三种类型为小 占斜面的 1 3 1 2 菌落中央凸起 从中央向 四周有排列比较整齐的放射状沟纹 边缘整齐 表面菌丝甚少 开始微带黄色 以后变粉红 背面同 I 型 3 菌种鉴定 菌落特征及色素 大小分生孢子的形态 玉米粉吐温琼脂上产生红色色素 毛发穿孔试验阴性 尿素酶试验阴性 须癣毛癣菌 1 直接镜检 皮屑内见分枝分隔的菌丝 甲屑内为关节状菌丝 毛发感染为发外型 发内有时 有菌丝 2 培养特性 在沙氏上生长较快 菌落形态可分为两大类 毛型和粉型 下列 I II 型为毛型 III IV V 型属粉型 自炎症明显的皮损中所分离出的菌株多属粉型 毛型菌落外观均似红毛 应注意 鉴别 具体分型 羊毛状 I 型 又称趾间毛癣菌 菌落生长快 白色羊毛状 气生菌丝较多且长 排列紧密 充满斜面 好象红毛 正面雪白 背面淡黄色 镜检见较细分枝 分隔的菌丝 胞浆浓 有 少量球形或长形小分生孢子 无螺旋菌丝和大分生孢子 间或可见球拍菌丝及结节菌丝 绒毛型 II 型 生长快 菌落雪白 表面有紧密的细短气生菌丝 中央可有乳头状突起 边缘如刀切 背面棕黄 色或棕红色 镜检见较细的分枝 分隔的菌丝 小分生孢子多 有时成葡萄串状 无螺旋菌丝或大分生 孢子 乳皮状 III 型 开始为乳白色菌丝 不久一部分菌落变为粉末样 色微黄 光滑 似牛乳 甲真菌病红色毛癣菌病理 PAS 染色 400 倍 表面的一层薄膜 可一块块地挑取 中央有少许褶叠 边缘不整齐 背面淡黄或棕黄色 镜检见粗细不 一 分枝分隔的菌丝和大量螺旋菌丝 间或可见破梳状菌丝 结节菌丝及球拍菌丝 大分生孢子少 棒 状 两端圆 与分生孢子梗的连接处较窄 薄壁光滑 小分生孢子多 球形或长形 有时成葡萄串状排 列 粉末状 IV 型 菌落粉末状 表面平坦 光滑 间或有少数白色气生菌丝 中央有乳头状凸 起 边缘锯齿状 菌落生长快 充满斜面 色黄或奶油色 外观像石小 背面棕黄或棕红色 颗粒状 V 型 生长快 菌落粉样 表面不平 呈颗粒状 有不规则的褶叠或沟纹 边缘不整齐 下面色黄 带红或棕黄 背面棕红色 IV V 镜检均见大量棒状大分生孢子及无数圆形的小分生孢子 少数长型 游离或葡萄状成串 有螺旋菌丝和球拍菌丝 3 菌种鉴定 菌落形态 菌丝较细 是皮肤癣菌中最细的一种 螺旋菌丝多见 大 分生孢子的形态和球形小分生孢子 尿素酶阳性 毛发穿孔阳性 紫色毛癣菌 1 直接镜检 皮屑 甲屑内可见分枝分隔 的菌丝或成串的孢子 病发取黑点部位的断发 毛发损害为发内型大孢子 呈关节型排列 充满整个发 内 故毛发出皮即断 2 培养特性 在沙氏琼脂培养基室 温培养菌落生长慢 开始为圆形 白色 潮 湿发亮的菌落 类似酵母 以后中央褶叠或 突起 产生紫色色素 并逐渐扩大 或中央 紫色 边缘淡红色 最外围有一圈白色的环 培养基颜色不变 边缘无放射状菌丝 整齐 如刀切 下沉不明显 背面无色至深紫色 少数菌株无颜色 呈无色紫色毛癣菌 镜检 见粗细不一的菌丝 分隔较密 胞浆淡 有 很多不规则的突起和肿胀 但无鹿角菌丝 厚壁孢子多 多为间生 偶见小分生孢子 2 5 个大生分生 孢子 3 菌种鉴定 菌落形态 紫色色素 VitB 能促进菌落生长 形成大分生孢子 发内型感 染 须癣毛癣菌培养 沙氏琼脂培养基室温培养 20 天 2 小孢子菌属 小孢子菌属 羊毛状小孢子菌 1 直接镜检 皮屑内见分枝 分隔的菌丝 病发为发外型感染 2 培养特性 在沙氏琼脂培养基上室温生长快 开始为黄色绒毛样生长 2 周后菌丝较多 呈 羊毛状 可充满大部分斜面 中央趋向粉未化 正面桔黄 背面红棕色 平皿中培养的菌落表面中央可 有少数同心园 无放射状沟纹 生长约 4 5 周后开始变异 菌丝增多 大分生孢子减少或消失 镜检见 大量纺锤形 厚壁的大分生孢子 一端稍弯曲 末端有帽样肥大 有 6 15 个分隔 小分生孢子较少 长形 无柄侧生 可有球拍状菌丝 破梳状菌丝 结节菌丝及大量厚壁孢子等 3 菌种鉴定 菌落形态及色素 在 PDA 培养基上能产生黄色色素 特征性的厚壁 顶端 膨大微弯曲 如戴帽的大分生孢子 发外孢子型感染 石膏样小孢子菌 1 直接镜检 皮屑内见菌丝或成串的孢子 病发为发外型感染 孢子较大 排列成串 2 培养特性 在沙氏琼脂培养基上室温生长快 开始为白色菌丝 后成棕黄色粉未状菌落 凝 结成片 菌落中心有隆起 外围有少数极短的沟纹 边缘不整齐 背面红棕色 镜检 见多数较小 纺 锤形 4 6 个的大分生孢子 壁厚 1 3 m 两端园 壁有刺 菌丝较少 小分生孢子棒状无柄 有时 可见球拍状菌丝 螺旋 破梳状菌丝及结节菌丝 3 菌种鉴定 菌落形态 大分生孢子的形态 毛发穿孔试验阳性 3 表皮癣菌属 表皮癣菌属 絮状表皮癣菌 1 直接镜检 皮屑及甲屑内见分枝分隔的菌丝 2 培养特性 在沙氏培养基室温生长快 菌落开始蜡状 高出斜面 表面有不规则的褶叠 上 覆粉未样菌丝 黄绿色 较大的菌落中央有褶叠 外围可见放射状沟纹 最外围有不整齐的平滑圈 菌 落下沉明显 培养基常为之开裂 背面黄至棕色 镜检 见典型的杵状大分生孢子 2 4 个分隔 游 离端圆形 薄壁光滑 基部平截 常 2 4 个成群 无小分生孢子 老龄菌落厚壁孢子多 菌丝较细 分枝 分隔 间或可见球拍 结节和螺旋菌丝 3 菌种鉴定 菌落特征 典型杵状大分生孢子 无小分生孢子 二 深部真菌 一 白念珠菌 一 白念珠菌 Candida albicans 1 标本来源 痰 大便 口腔或阴道分泌物 尿 脑脊液 胸水 脓液 皮屑及痂皮等 2 直接镜检 氢氧化钾涂片 可见卵圆形 圆形芽孢 薄 壁 直径约 2 4 m 芽孢 椭圆形芽孢的芽管延长形成假菌丝 有时在菌丝旁附着芽孢 PAS 染色为红色 3 培养及镜检 1 葡萄糖蛋白胨琼脂 30 划线培养一天即有光滑小菌落生长 菌落为奶油色 闪光或呈蜡状 柔软光滑 老的菌落渐变硬 表面有皱褶或有毛发状突起 镜检 在菌丝交接处有群集的卵圆形孢子或 在菌丝旁侧有少许芽孢 3 0 6 5 3 5 12 5 m 2 玉米培养基 菌落外观同上 镜检 菌丝很少分枝 有少量芽生孢子 在菌丝的顶端或侧缘 有厚壁孢子 直径 7 17 m 各种深部真菌在快速鉴定上有何不同 之处 3 快速鉴定与鉴定程序 将标本直接接种在科玛嘉上 24 小时出现翠绿色菌落 将初代分离的酵母样菌接种在含 1 吐温 80 米粉中 25 室温中 24 48 小时 镜检可见顶端产生圆形厚壁孢子或接种于 0 5ml 正常人血清或羊血 清中 置 37 温箱中 经 1 2 小时镜检有芽生孢子及芽管形成 可初步鉴定为白念珠菌 API 酵母 快速鉴定 同化试验结果 葡萄糖 麦芽糖 乳糖 半乳糖 二 热带念珠菌 二 热带念珠菌 Candida Tropicalis 1 标本来源 同白念珠菌 2 直接镜检 同白念珠菌 3 培养及镜检 1 葡萄糖蛋白胨琼脂 在 25 中培养 菌落平滑有光泽 白色 时间较久表面有皱纹 粘稠 甚至有毛样外观 镜检可见卵圆形细胞或球形细胞 约 5 9 m 6 12 m 2 玉米琼脂 产生丰富的假菌丝及发育良好芽生孢子 但无厚壁孢子生长 3 快速鉴定 科玛嘉培养基上 24 小时出现蓝灰色 同化试验 三 克柔氏念珠菌 三 克柔氏念珠菌 Candida Krusei 标本来源 同白念珠菌 直接镜检 同白念珠菌 培养及镜检 葡萄糖蛋白胨琼脂 菌落扁平 平滑 干燥 有时表面有皱折 通常是乳白色到淡黄 镜检所见 大多数孢子是较大的柱状 2 5 5 5 m 7 5 21 5 m 亦有少数短卵圆形孢子 假菌丝丰富 芽生孢子 在菌丝上轮生 玉米琼脂 对称分枝的菌丝 芽生孢子较少 无厚壁孢子 白色念珠菌厚膜孢子米粉吐温 80 培养基 400 倍 葡萄糖蛋白胨液培养基 在培养基表面生长 与试管壁粘连 快速鉴定 科玛嘉培养基上 24 小时出现淡粉红色菌落 同化试验 四 近平滑念珠菌 四 近平滑念珠菌 Candida parapsilosis 标本来源 同白念珠菌 直接镜检 同白念珠菌 培养及镜检 葡萄糖蛋白胨琼脂 乳酪样菌落 通常表面光滑 亦有菌落表面粗糙及皱折 镜检所见 卵圆形 芽生孢子 2 5 5 0 4 8 m 假菌丝形成丰富 玉米琼脂 交叉分枝菌丝 侧生芽生孢子较多 无厚壁孢子 葡萄糖蛋白胨液基 无表面生长 在管底生长 快速鉴定 科玛嘉培养上 24 小时出现粉色光滑菌落 同化试验 API 五 光滑念珠菌 五 光滑念珠菌 Candida glabrata 标本来源 痰 尿 血 皮肤 阴道 伤口 腹水 胸水 胆汁等 直接镜检 卵圆形芽生孢子 直径 2 7 m 或更大 单芽 位于孢子的细端 无荚膜 无子囊或 菌丝 培养及镜检 葡萄糖蛋白胨琼 白色或奶油色乳酪样菌落 日久变棕灰色 表面平滑 稍有光泽 本菌只在酸 性条件下生长 pH 6 5 即不生长 镜检 同直接涂片 快速鉴定 科玛嘉培养基上 24 小时出现紫色菌落 同化 API 试验 六 胶红酵母 六 胶红酵母 Rhodotorula mucilaginosa 标本来源 痰 尿 血 大便 皮肤 CSF 咽喉 体液等 直接镜检 圆形或卵圆形 3 5 m 直径 有荚膜的芽生孢子 单芽生 孢子内有少数颗粒 无 菌丝 不着色 培养及镜检 葡萄糖蛋白胨琼脂 25 或 37 时 生长迅速 菌落 10 天内可达 2 2 5cm 直径 为乳酪样生长 边缘整齐 表面光滑 但无光泽 桔红 日久颜色逐渐消退 呈淡黄色或桔黄色 培养基不变色 镜检 同涂片所见 有时可见假菌丝 无子囊 快速鉴定 菌落产生红色色素 使尿素琼脂由黄变红 七 新生隐球菌 七 新生隐球菌 Cryptococcus neoformans 标本来源 脑脊液 痰 脓 尿 粪 血 活体组织及尸体解剖材料等 直接镜检 墨汁染色 可见圆形厚壁孢子 菌体直径约 4 20 m 外围有一透光的厚荚膜 厚度 约 5 7 m 荚膜内的菌体可出芽或不出芽 孢内有一较大的反光颗粒 脂质颗粒 不是孢核 和许多 小颗粒 可与白细胞或淋巴细胞相鉴别 培养及镜检 在葡萄蛋白胨琼脂 25 或 37 培养时 2 5 天即生长出乳白色细菌粘液性菌落 呈不 规则圆形 表面有蜡样光泽 以后菌落增厚 颜色由乳白 奶油转桔黄色 非致病性隐球菌 37 不生长 镜检类似直接镜检 可见圆形孢 子 直径 2 5 8 m 多数有芽 孢子外围有 荚膜 但荚膜开始甚狭 日久渐增厚 无真菌 丝及子囊孢子 但可有芽管 新生隐球菌革兰染色 1000 倍 快速鉴定 37 生长 尿素酶变红 咖啡酸变棕色 同化试验 不发酵葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 乳糖等 三 其它实验室常见的丝状真菌 一 曲霉属 一 曲霉属 标本来源 皮屑 甲屑 耵聍 痰 粪 尿 脓液 活检与尸检组织标本 直接镜检 涂片见分枝 分隔的菌丝及足细胞 与外界相通腔道内标本中有时可见分生孢子头 为曲霉的特征结构 培养 初代用沙氏培养基 次代用察氏 PDA 培养基 接种后室温培养 2 周 少数能产生闭囊壳 的曲霉需培养 3 周或更长时间 菌种鉴定 1 菌落 菌落生长速度 表面菌落 菌落