2016HIV病毒与艾滋病实验室检测

HIV病毒与艾滋病实验室检测,生命的渴望,HIV病原学,中文名称：人类免疫缺陷病毒 英文名称：human immunodeficiency virus;HIV 定义：引起获得性免疫缺陷综合征和相关疾病的RNA病毒。病毒主要侵犯CD4 T细胞、CD4单核细胞和B淋巴细胞。,Introduction,HIV病毒结构模式图,HIV病原学,Structural proteins,病毒基因组是两条相同的正股RNA，每条RNA长约9.2-9.8kb。编码了至少9个蛋白，可分为三类：结构蛋白、调控蛋白、辅助蛋白。,结构蛋白 Gag gag基因产生55kD的蛋白p55：p17基质、p24衣壳、p9核衣壳、p6。 Pol Gag-Pol融合蛋白 ：p10蛋白酶、p50逆转录酶、p15 RNA酶H 及p31整合酶。 Env Env起先是160kD的蛋白 ：gp41与gp120 。调控蛋白 辅助蛋白,HIV病原学,HIV structure & life cycle,HIV病毒感染病程,现已证实HIV感染可分为4个阶段，但不是所有感染HIV的患者都一定经历这4个阶段。,HIV感染的急性初期；HIV感染的慢性无症状期；HIV感染的症状期；晚期，称为AIDS。,艾滋病实验室检测,目前检测HIV的方法有100多种，总体来说可以分为两大类： 抗体检测 病毒检测 细胞培养(病毒分离) p24抗原检测 病毒核酸检测早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体,间接地诊断HIV感染。,血清学试验分为初筛和确认试验。最常用的初筛试验：酶联免疫吸附试验（ELISA）最常用的确认试验：免疫印迹试验(WB)。,艾滋病实验室检测：血清学试验,HIV病毒感染后血清学动态变化,HIV病毒感染窗口期,Window Period,艾滋病窗口期是针对艾滋病检测的标志物而言，并非一个笼统的概念。,人体感染HIV后，一般需要2-3周，最多6周左右血液中才可检测到HIV抗体或者HIV抗原。因为从感染HIV到机体产生抗体的这一段时间检测不到HIV抗体或者HIV抗原，故称之为窗口期，又叫做空窗期，是英文Window Period的翻译。值得注意的是，感染艾滋病病毒的个体在窗口期内同样具有传染性。,在病毒感染后3个月，大多数患者的血清学试验为阳性。尽管有报道有感染1年后才出现血清阳性化，但实际上，所有患者都是在6个月内出现血清的阳性转化。,HIV病毒感染窗口期,Window Period,HIV病毒感染窗口期,Window Period,艾滋病实验室检测：ELISA,试剂分代情况：,第一代HIV诊断试剂原理为间接ELISA法，所用的包被抗原为体外培养的HIV裂解物，含有很多杂抗原，主要HIV结构和表达蛋白浓度不能保证，灵敏度和特异性不高，出现许多假阴性和假阳性,第二代使用基因重组或合成多肽抗原，利用间接ELISA原理，窗口期比第一代诊断试剂缩短了约20天，灵敏度和特异性也有所提高。在一次试验中可同时检测HIV-1和HIV-2抗体 。,第三代利用双抗原夹心法检测标本中的抗体，酶标记物改为特异性HIV抗原，检测HIV-1、HIV-2和HIV-10抗体 。,第四代HIV诊断试剂是一种HIV-1/HIV-2抗体与HIV-10亚群抗体及p24抗原的联合检测方法。,艾滋病实验室检测：ELISA,艾滋病实验室检测：确证试验WB,结果判读,艾滋病实验室检测：病毒载量测定,病毒核酸提取 逆转录 PCR,病毒数量预测生存时间,艾滋病实验室检测：流式细胞术,CD4淋巴细胞计数不是诊断性检查，主要用于判断免疫抑制的程度。,流式细胞仪（FCM）工作原理,艾滋病实验室检测：流式细胞术,用于HIV感染的疾病分期表，凡CD4+T淋巴细200