MM_FS_CNJ_0326 橄榄油、油橄榄果渣油检验脂肪酸成分含量测定法.DOC

MM_FS_CNJ_0326橄榄油 油橄榄果渣油 脂肪酸 成分 含量 气相色谱 归一法 MM_FS_CNJ_0326橄榄油、油橄榄果渣油检验脂肪酸成分含量测定法1.适用范围本方法适用于商品橄榄油、油橄榄果渣油脂肪酸成分含量检验。2.原理概要将橄榄油中的脂肪酸转化为脂肪酸甲酯，应用气相色谱仪将各甲酯分离，对照各脂肪酸甲酯标准样品保留时间定性，用归一法定量，以各甲酯的百分含量来表示各脂肪酸成分含量。3.脂肪酸甲酯化（在通风橱内进行操作）3.1.三氟化硼-甲醇脂肪酸甲酯化法3.1.1.适用范围本方法适用于任何酸度的橄榄油、油橄榄果渣油。应优先选用此法。3.1.2.主要试剂和仪器3.1.2.1.主要试剂0.5molL氢氧化钠甲醇溶液（先用少许水将氢氧化钠溶解后再放入甲醇）；市售三氟化硼乙醚溶液；甲醇；三氟化硼乙醚-甲醇溶液：将三氟化硼乙醚溶液与甲醇按13（VBF33VCH3OH）配制；饱和食盐水溶液；石油醚（3060沸程）。3.1.2.2.仪器容量瓶：25mL；滴管：20mm；量筒：5mL；漏斗：直径30mm；试剂瓶：510mL；水浴锅。3.1.3.过程简述3.1.3.1.用滴管取混匀油试样89滴（120150mg）置于25mL容量瓶中，加入4mL 0.5molL氢氧化钠甲醇溶液，摇匀，置沸水浴上沸腾5min，使油试样呈透明状态。3.1.3.2.待其冷却后加入5mL三氟化硼-甲醇溶液，再置水浴上沸腾2min，使甲酯化完全。3.1.3.3.加入足够量的饱和食盐水溶液（到细颈底部），上层有黄色液体，用11.5mL石油醚将其萃取到醚层（振摇、静止）。再用滴管吸取上层甲酯石油醚溶液置于试剂瓶内，密封低温保存，待进入气相色谱仪进行脂肪酸成分含量测定。3.2.氢氧化钾-甲醇脂肪酸甲酯化法3.2.1.适用范围本方法适用于酸度小于3的橄榄油、油橄榄果渣油。3.2.2.主要试剂和仪器3.2.2.1.试剂2molL氢氧化钾甲醇溶液：11.2g氢氧化钾溶于100mL甲醇中；正已烷。3.2.2.2.仪器刻度离心试管：10mL，具塞；滴管：200mm；移液管：5mL，1mL；离心机：3000rmin。3.2.3.过程简述取混匀油试样0.6mL于离心试管中，加入5mL正已烷，摇匀，再加入0.25mL 2molL氢氧化钾-甲醇溶液，充分振摇30s，放入离心机内离心1min后，立即取上层甲酯溶液进行气相色谱脂肪酸成分含量测定，故此法适宜使用前临时制备。3.3.甲醇-盐酸-甲酯化法3.3.1.适用范围本方法适用于酸度大于3的橄榄油、油橄榄果渣油。3.3.2.主要试剂和仪器3.3.2.1.主要试剂2盐酸甲醇溶液。3.3.2.2.仪器安瓿瓶：5mL；滴管：200mm；喷灯；电热烘箱。3.3.3.过程简述取混匀油试样1015滴于5mL安瓿瓶中，加入2mL含有2盐酸的甲醇溶液，混匀振摇20s，用喷灯将安瓿瓶口密闭，立即放入1002烘箱内烘40min，取出待用。4.气相色谱法测定脂肪酸成分含量4.1.主要试剂和仪器4.1.1.主要试剂石油醚（3060沸程）；1424C脂肪酸标准样品或1424C脂肪酸甲酯标准样品。4.1.2.仪器气相色谱仪附氢火焰离子检测器；微量注射器：1L、10L，最小刻度为0.1L。4.2.过程简述4.2.1.测试条件，根据气相色谱仪不同型号，将其调到最佳使用状态。担体：chromsorb WAW，80100目；固定液：520DEGS；柱长：22.1m玻璃柱或不锈钢柱，内径24mm；进样器温度：210250；柱温：160180；检测器温度：200240；载气：N2，30mLmin；燃气：H2，30mLmin；助燃气：300mLmin。4.2.2.测定程序待气相色谱仪被调到最佳使用条件后，用微量注射器吸取各脂肪酸甲酯标准样品0.1 L注入进样器（每次用石油醚充分冲洗注射器），得标准样图谱及各成分保留时间；用微量注射器吸取0.51L被测试样的甲酯化溶液注入进样器，得试样图谱及各组分保留时间，与各标准样品相同保留时间对照，定性出各脂肪酸成分。4.3.结果计算各脂肪酸成分含量按下列方法计算：如气相色谱仪带有积分仪，可用积分仪获得定量数据；可用峰面积归一化法计算各脂肪酸成分含量，以甲酯的百分含量表示：X（%）Ai100hiLi100(i1,2,3,n)式中：X脂肪酸甲酯的百分含量，即为脂