OLYMPUSIX51倒置显微镜操作规程-厦门大学生物医学仪器共享平台.doc

倒置荧光显微镜操作规程Olympus IX5厦门大学医学院中心实验室黄静茹2016年10月说明：透射光主开关；汞灯高压电源开关；透射光光强控制钮；滤色片架；光路选择杆；X轴和Y轴调节钮；物镜转盘；粗/微调焦旋钮；双目观察筒；屈光度调节环；聚光镜高度调节钮；聚光镜对中旋钮；视场光阑调节杆；孔径光阑调节杆；聚光镜转盘；荧光光闸（SHUTTER）；荧光激发块转盘；荧光减光阀一、开机1、 打开透射光源（白光）主开关；2、 打开荧光光源（汞灯高压电源）；3、 打开电脑，进入 cellSens Standard工作站； 备注：标本为HE染色、免疫组化时，不需要打开荧光光源；标本为荧光染料染色时，一般也不需要打开白光光源。二、明场观察（Bright Field BF）1、正确放置标本，BF主要用于HE染色、免疫组化标本；2、转动荧光激发块转盘到“6”的位置；3、转动聚光镜转盘到“BF”位置，直到听到咔嗒声；4、将光路选择杆推进去（ 选择目镜观察光路）；5、转动物镜转盘，选用合适的物镜，调节白光光强控制钮至合适的强度， 调 节粗/细调焦旋钮聚焦观察,根据需要调节瞳间距和屈光度；三、相衬观察（Phase contrast PH)1、正确放置标本，PH主要用于没有任何染色的、较透明的标本；2、转动荧光激发块转盘到“6”的位置；3、转动物镜转盘，选用合适的物镜；4、转动聚光镜转盘，使相衬光学元件与所用物镜相匹配（见表1）；5、将光路选择杆推进去（ 选择目镜观察光路）；6、调节光强控制钮直至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮进行聚焦观察,根 据需要调节瞳间距和屈光度。 表1： 物镜、相差元件匹配表物镜4X10X、20X40X相差元件PHLPH 1（PH C）PH 2四、荧光观察1、如果需要，可先用明场观察对标本定位，再转入荧光观察；2、如果不再需要BF观察，可关闭白光电源；或将白光光强调节钮逆时针旋 至最低，将孔径光阑向右拨至最小；3、转动荧光激发块转盘，根据所用的荧光染料选择匹配的荧光激发块； 表2：荧光激发块序号激发块名称激发光（nm）发射光（nm）滤掉光（nm）1WU330-3854204002WB450-4805155003WG510-5505905704WBV400-4404754555WIY545-5806106006BF明场、相差4、打开荧光光闸（SHUTTER），使其置于“O”位置； 5、将光路选择杆推进去（ 选择目镜观察光路）；6、转动物镜转盘，选用合适的物镜，调节粗/细调焦旋钮聚焦观察，根据荧 光强度选择合适的ND滤镜（荧光减光阀）进入光路。（第一个ND100：100% 的荧光强度进入光路；第二个ND6：6%的荧光强度进入光路，第三个ND25: 25% 的荧光强度进入光路）。五、CCD成像1、cellSens Standard工作站中，,点击右侧摄像控制中的实时观察；2、将光路选择杆拉出（，CCD成像光路），调节粗/细调焦旋钮进行聚焦；3、曝光：可先选择自动曝光，参照自动曝光时间，再通过手动调节曝光时间使 图像更清晰；4、背景校准：进行明场和相差成像时执行白平衡 ，荧光成像时执行黑平 衡， 在样品空白背景处画一个小区域，软件自动以该处为背景对整幅 图像进行调整，使所选区域显示为白色或黑色；5、各成像参数设定完毕后，点击拍照 ，仪器自动成像；6、右键文档工具栏窗口或在文件处进行保存（TIF或JPG格式）。六、关机1、实验完毕，先退出工作站；2、将透射光光强调节钮逆时针旋至最低，关闭透射光主开关（TH4）；3、确认汞灯开启超过0.5h，方能关闭汞灯高压电源；4、用无水乙醇擦拭镜头，并将物镜转盘转至空位，清理载物台及桌面；5、刻录数据：放入全新光盘，将数据发送至光盘，电脑右下角出现刻录提示， 点击该提示进入，确认待刻录数据，点击“刻录到光盘”-下一步，刻录 完毕，光盘自动退出。6、关电脑及显示器。七、图像处理1、标尺：在工具栏上选择正确的物镜倍数，点击“视图”-标尺，软件自动将 标尺加在图像上，再点击“图像”-印入信息，保存即可。2、测量：点击“测量”-测量工具，软件左侧显示出测量工具栏，点击选择 所需的测量工具，在图像上画目标区域，右键点击结束测量即可显示结果。 测 量结果可导出Excel：点击测量工具栏图标 。3、图像叠加：打开拟叠加的图，“图像”-组合彩色图像-“可用图像”中 选择拟叠加的图-合并层-确认。4、图像拼接：按一定顺序 拍摄图像，相邻两张图像的边缘要部分重叠， 所有图像拍摄完毕后，选择视图-工具-画廊-全选拟拼接的图像，选择 运算-图像拼接-设置水平方向图像数量-根据拍摄顺序摆好图像位置 -确定；预览后视情况选择“裁剪边缘”-确定。八、注意事项1、汞灯开启后必须至少使用0.5h才能关闭！汞灯关闭后若还需使用，必须等 0.5h后才能再次开启！2、