高中生物选修一生物技术实践知识点总结

高中生物高中生物选选修一生物技修一生物技术实术实践践 知知识识点点总结总结 专题专题一一 传统发传统发酵技酵技术术的的应应用用 课题课题一一 果酒和果醋的制作果酒和果醋的制作 1 发酵 通过微生物技术的培养来生产大量 代谢产物的过程 2 有氧发酵 醋酸发酵 谷氨酸发酵 无氧 发酵 酒精发酵 乳酸发酵 3 酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 酵 母菌的生殖方式 出芽生殖 主要 分裂生殖 孢子生殖 4 在有氧条件下 酵母菌进行有氧呼吸 大 量繁殖 C6H12O6 6O2 6CO2 6H2O 5 在无氧条件下 酵母菌能进行酒精发酵 C6H12O6 2C2H5OH 6CO2 6 20 左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时 一般将温度控制在 18 25 7 在葡萄酒自然发酵的过程中 起主要作用的 是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌 在 发酵过程中 随着酒精浓度的提高 红葡萄 皮的色素也进入发酵液 使葡萄酒呈现深 红色 在缺氧 呈酸性的发酵液中 酵母菌 可以生长繁殖 而绝大多数其他微生物都 因无法适应这一环境而受到制约 8 醋酸菌是单细胞细菌 原核生物 代谢类 型是异养需氧型 生殖方式为二分裂 9 当氧气 糖源都充足时 醋酸菌将葡萄汁中 的糖分解成醋酸 当缺少糖源时 醋酸菌将 乙醇变为乙醛 再将乙醛变为醋酸 C2H5OH O2 CH3COOH H2O 10 控制发酵条件的作用 醋酸菌对氧气的 含量特别敏感 当进行深层发酵时 即使 只是短时间中断通入氧气 也会引起醋酸 菌死亡 醋酸菌最适生长温度为 30 35 控制好发酵温度 使发酵时间缩 短 又减少杂菌污染的机会 有两条途 径生成醋酸 直接氧化和以酒精为底物的 氧化 11 实验流程 挑选葡萄 冲洗 榨汁 酒 精发酵 果酒 醋酸发酵 果醋 12 酒精检验 果汁发酵后是否有酒精产生 可以用重铬酸钾来检验 在酸性条件下 重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色 先在试 管中加入发酵液 2 L 再滴入物质的量浓 度为 3mol L 的 H2SO43 滴 振荡混匀 最 后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液 3 滴 振荡试管 观察颜色 13 充气口是在醋酸发酵时连 接充气泵进行充气用的 排气口是在酒精发 酵时用来排出二氧化碳的 出料口是用来取 样的 排气口要通过一个长而弯曲的胶管与 瓶身相连接 其目的是防止空气中微生物的 污染 开口向下的目的是有利于二氧化碳的 排出 使用该装置制酒时 应该关闭充气口 制醋时 应该充气口连接气泵 输入氧气 疑难解答 1 你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝 梗 为什么 应该先冲洗 然后再除去枝梗 以避免除 去枝梗时引起葡萄破损 增加被杂菌污染的 机会 2 你认为应该从哪些方面防止发酵液被 污染 如 要先冲洗葡萄 再除去枝梗 榨汁机 发酵装置要清洗干净 并进行酒精消毒 每 次排气时只需拧松瓶盖 不要完全揭开瓶盖 等 3 制葡萄酒时 为什么要将温度控制在 18 25 制葡萄醋时 为什么要将温度控 制在 30 35 温度是酵母菌生长和发酵的重要条件 20 左右最适合酵母菌的繁殖 因此需要将温度 控制在其最适温度范围内 而醋酸菌是嗜温 菌 最适生长温度为 30 35 因此要将温 度控制在 30 35 课题课题二二 腐乳的制作腐乳的制作 1 多种微生物参与了豆腐的发酵 如青霉 酵 母 曲霉 毛霉等 其中起主要作用的是毛 霉 毛霉是一种丝状真菌 代谢类型是异 养需氧型 生殖方式是孢子生殖 营腐生 生活 2 原理 毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆 腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸 脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸 3 实验流程 让豆腐上长出毛霉 加盐腌制 加卤汤装瓶 密封腌制 4 酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行 前期发酵和后期发酵 前期发酵的主要作用 1 创造条件让毛霉 生长 2 使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成 型 后期发酵主要是酶与微生物协同参与生化 反应的过程 通过各种辅料与酶的缓解作 用 生成腐乳的香气 5 将豆腐切成 3cm 3cm 1cm 的若干块 所 用豆腐的含水量为 70 左右 水分过多则 腐乳不易成形 水分测定方法如下 精确 称取经研钵研磨成糊状的样品 5 10g 精 确到 0 02mg 置于已知重量的蒸发皿中 均匀摊平后 在 100 105 电热干燥箱内 干燥 4h 取出后置于干燥器内冷却至室温 后称重 然后再烘 30min 直至所称重量不 变为止 样品水分含量 计算公式如下 烘干前容器和样品质量 烘干后容器和 样品质量 烘干前样品质量 毛霉的生长 条件 将豆腐块平放在笼屉内 将笼屉中的控制在 15 18 并保持一定的 温度 来源 1 来自空气中的毛霉 孢子 2 直接接种优良毛霉菌种 时间 5 天 加盐腌制 将长满毛霉的豆腐块分层整齐地 摆放在瓶中 同时逐层加盐 随着层数的加 高而增加盐量 接近瓶口表面的盐要铺厚一 些 加盐腌制的时间约为 8 天左右 用盐腌制时 注意控制盐的用量 盐的浓度 过低 不足以抑制微生物的生长 可能导致 豆腐腐败变质 盐的浓度过高会影响腐乳的 口味 食盐的作用 1 抑制微生物的生长 避免腐 败变质 2 析出水分 是豆腐变硬 在后期制 作过程中不易酥烂 3 调味作用 给腐乳以必 要的咸味 4 浸提毛酶菌丝上的蛋白酶 配制卤汤 卤汤直接关系到腐乳的色 香 味 卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的 卤汤中酒的含量一般控制在 12 左右 酒的作用 1 防止杂菌污染以防腐 2 与有机 酸结合形成酯 赋予腐乳风味 3 酒精含量的 高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关 系 酒精含量越高 对蛋白酶的抑制作用也 越大 使腐乳成熟期延长 酒精含量过低 蛋 白酶的活性高 加快蛋白质的水解 杂菌繁 殖快 豆腐易腐败 难以成块 香辛料的作用 1 调味作用 2 杀菌防腐作用 3 参与并促进发酵过程 防止杂菌污染 用来腌制腐乳的玻璃瓶 洗刷干净后要用沸水消毒 装瓶时 操作 要迅速小心 整齐地摆放好豆腐 加入卤汤 后 要用胶条将瓶口密封 封瓶时 最好将 瓶口通过酒精灯的火焰 防止瓶口被污染 疑难解答 1 利用所学的生物学知识 解释豆腐长 白毛是怎么一回事 豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝 严格 地说是直立菌丝 在豆腐中还有匍匐菌丝 2 为什么要撒许多盐 将长毛的豆腐腌 起来 盐能防止杂菌污染 避免豆腐腐败 3 我们平常吃的豆腐 哪种适合用来做 腐乳 含水量为 70 左右的豆腐适于作腐乳 用 含水量高的豆腐制作腐乳 不易成形 4 吃腐乳时 你会发现腐乳外部有一层 致密的 皮 这层 皮 是怎样形成的呢 它 对人体有害吗 它的作用是什么 皮 是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌 丝 匍匐菌丝 对人体无害 它能形成腐乳 的 体 使腐乳成形 课题课题三三 制作泡菜制作泡菜 制作泡菜所用微生物是乳酸菌 其代谢类 型是异养厌氧 型 在无氧条件下 降糖分解 为乳酸 分裂方式是二分裂 反应式为 C6H12O62C3H6O3 能量 含抗生素 酶 牛奶不能生产酸奶的原因是抗生素杀死乳 酸菌 常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆 菌 乳酸杆菌常用于生产酸奶 亚硝酸盐为白色粉末 易溶于水 在食品生 产中用作食品添加剂 膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康 国家规定肉制品中不超过30mg kg 酱腌菜 中不超过20mg kg 婴儿奶粉中不超过 2mg kg 亚硝酸盐被吸收后随尿液排出体外 但在适宜 pH 温度和一定微生物作用下形 成致癌物质亚硝胺 亚 硝 酸 盐 含 量 发酵时间 d 一般在腌制 10 天后亚硝酸 盐 含量开始降低 故在 10 天 之后食用最好 测定亚硝酸盐含量的原理 是在盐酸酸化条件下 亚硝酸盐与对氨基苯 磺酸发生重氮化反应后 与 N 1 萘基乙二 胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料 与已知浓 度的标准显色液目测比较 估算泡菜中亚硝 酸盐含量 专题二 微生物的培养与应用 课题一 微生物的实验室培养 培养基 人们按照微生物对营养物质的不同 需求 配制出供其生长繁殖的营养基质 是 进行微生物培养的物质基础 培养基按照物理性物理性质质可分为液体培养基液体培养基 半半 固体培养基固体培养基和固体培养基固体培养基 在液体培养基中 加入凝固剂琼琼脂脂 是从红藻中提取的一种多 糖 在配制培养基中用作凝固剂 后 制成琼 脂固体培养基 微生物在固体培养基表面生 长 可以形成肉眼可见的菌落 根据菌落的 特征可以判断是哪一种菌 液体培养基液体培养基应用 于工业或生活生产 固体培养基固体培养基应用于微生 物的分离和鉴定 半固体培养基半固体培养基则常用于观 察微生物的运动及菌种保藏等 按照成分成分培养基可分为人工合成培养基人工合成培养基和 天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基是用成分已知的化 学物质配制而成 其中成分的种类比例明确 常用于微生物的分离鉴定 天然培养基天然培养基是用 化学成分不明的天然物质配制而成 常用于 实际工业生产 按照培养基的用途用途 可将培养基分为选择选择 培养基培养基和鉴鉴定培养基定培养基 选择选择培养基培养基是指在培 养基中加入某种化学物质 以抑制不需要的 微生物生长 促进所需要的微生物的生长 鉴别鉴别培养基培养基是根据微生物的特点 在培养基 中加入某种指示剂或化学药品配制而成的 用以鉴别不同类别的微生物 培养基的化学成分包括 水水 无机无机盐盐 碳源碳源 氮源氮源 生生长长因子因子等 碳源 能为微生物的代谢提供碳元素的物质 如 CO2 NaHCO3等无机碳源 糖类 石油 花生粉饼等有机碳源 异养微生物只能利用 有机碳源 单质单质碳不能作碳不能作为为碳源碳源 氮源 能为微生物的代谢提供氮元素的物质 如 N2 NH3 NO3 NH4 无机氮源 蛋白质 氨基酸 尿素 牛肉膏 蛋白胨 有机氮源 等 只有固氮微生物才能利用只有固氮微生物才能利用 N2 培养基还要满足微生物生长对 PH 特殊营 养物质以及氧气的要求 例如 培养乳酸杆乳酸杆 菌菌时需要在培养基中添加维维生素生素 培养霉菌霉菌 时须将培养基的 pH 调至酸性酸性 培养细细菌菌是 需要将 pH 调至中性或微碱性中性或微碱性 培养厌厌氧型氧型 微生物微生物是则需要提供无氧无氧的条件 无菌技术 获得纯净培养物的关键是防止外 来杂菌的入侵 要注意以下几个方面 对实验操作的空间 操作者的衣着和手 进行清洁和消毒 将用于微生物培养的器皿 接种用具和 培养基等器具进行灭菌 为避免周围环境中微生物的污染 实验 操作应在酒精灯火焰附近进行 实验操作时应避免已经灭菌处理的材 料用具与周围的物品相接触 无菌技术除了用来防止实验室的培养 物被其他外来微生物污染外 还有什么目的 答 无菌技术还能有效避免操作者自身 被微生物感染 消毒与灭菌的区别 消毒消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的 微生物 不包括芽孢和孢子 消毒方法常用 煮沸消毒法煮沸消毒法 巴氏消毒法巴氏消毒法 对于一些不耐高 温的液体 还有化学化学药剂药剂 如酒精 氯气 石 炭酸等 消毒 紫外紫外线线消毒消毒 灭灭菌菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体 内外所有的微生物 包括芽孢和孢子 灭菌 方法有灼灼烧灭烧灭菌菌 干干热灭热灭菌菌 高高压压蒸汽蒸汽灭灭菌菌 灭菌方法 接种环 接种针 试管口等使用灼烧灭 菌法 玻璃器皿 金属用具等使用干热灭菌法 所用器械是干热灭菌箱 培养基 无菌水等使用高压蒸汽灭菌 法 所用器械是高压蒸汽灭菌锅 表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭 菌法 所用器械是紫外灯 比 较 项 理化因 素的作 用强度 消灭微生 物的数量 芽孢和孢 子能否被 消灭 消较为温部分生活不能 毒和状态的微 生物 灭 菌 强烈全部微生 物 能 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 1 方法步骤 计算 称量 溶化 灭菌 倒平 板 2 倒平板操作的步骤 将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面 上 右手拿装有培养基的锥形瓶 左手拔出 棉塞 右手拿锥形瓶 将瓶口迅速通过火焰 用左手的拇指和食指将培养皿打开一 条稍大于瓶口的缝隙 右手将锥形瓶中的培 养基 约 10 20mL 倒入培养皿 左手立即 盖上培养皿的皿盖 等待平板冷却凝固 大约需 5 10min 然后 将平板倒过来放置 使培养皿盖在下 皿底在上 倒平板操作的讨论 1 培养基灭菌后 需要冷却到 50 左右时 才能用来倒平板 你用什么办法来估计培养 基的温度 提示 可以用手触摸盛有培养基的锥形 瓶 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时 就可以进行倒平板了 2 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰 答 通过灼烧灭菌 防止瓶口的微生物 污染培养基 3 平板冷凝后 为什么要将平板倒置 答 平板冷凝后 皿盖上会凝结水珠 凝 固后的培养基表面的湿度也比较高 将平板 倒置 既可以使培养基表面的水分更好地挥 发 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 4 在倒平板的过程中 如果不小心将培养基 溅在皿盖与皿底之间的部位 这个平板还能 用来培养微生物吗 为什么 答 空气中的微生物可能在皿盖与皿底 之间的培养基上滋生 因此最好不要用这个 平板培养微生物 纯化大肠杆菌 1 微生物接种的方法最常用的是平板划平板划线线 法法和稀稀释释涂布平板法涂布平板法 2 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培 养基表面连续划线的操作 将聚集的菌种逐逐 步稀步稀释释分散到培养基的表面 在数次划线后 培养 可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉 眼可见的子细胞群体 这就是菌落 3 稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的 梯度稀释 然后将不同稀释度的菌液分别涂 布到琼脂固体培养基的表面 进行培养 分 为系列稀稀释释操作操作和涂布平板操作涂布平板操作两步 4 用平板划线法和稀释涂布平板法接种的 目的目的是 使聚集在一起的微生物分散成单个 细胞 从而能在培养基表面形成单个的菌落 以便于纯化菌种 5 平板划线法操作步骤 将接种环放在火焰上灼烧 直到接种环 烧红 在火焰旁冷却接种环 并打开棉塞 将试管口通过火焰 将已冷却的接 种环伸入菌液中蘸取一环菌液 将试管通过火焰 并塞上棉塞 左手 将皿盖打开一条缝隙 右手将沾有菌种的接 种环迅速伸入平板内 划三至五条平行线 盖上皿盖 注意不要划破培养皿 灼烧接 种环 待其冷却后 从第 一区域划线的 末端开始往第二区域内划线 重复以上操作 在三 四 五区域内划线 注意不要将最 后一区的划线与第一区相连 将平板倒置 放入培养箱中培养 平板划线操作的讨论 1 为什么在操作的第一步以及每次划线 之前都要灼烧接种环 在划线操作结束时 仍然需要灼烧接种环吗 为什么 答 操作的第一步灼烧接种环是为了避 免接种环上可能存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划 线结束后 接种环上残留的菌种 使下一次 划线时 接种环上的菌种直接来源于上次划 线的末端 从而通过划线次数的增加 使每 次划线时菌种的数目逐渐减少 以便得到菌 落 划线结束后灼烧接种环 能及时杀死接 种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感 染操作者 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷 却后再进行划线 答 以免接种环温度太高 杀死菌种 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么总是从上一次划线的末端开始划线 答 划线后 线条末端细菌的数目比线 条起始处要少 每次从上一次划线的末端开 始 能使细菌的数目随着划线次数的增加而 逐步减少 最终能得到由单个细菌繁殖而来 的菌落 6 涂布平板操作的步骤 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 取少量菌液 滴加到培养基表面 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引 燃 待酒精燃尽后 冷却 8 10s 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表 面 涂布平板操作的讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近 进行 结合平板划线与系列稀释的无菌操作 要求 想一想 第 2 步应如何进行无菌操作 提示 应从操作的各个细节保证 无菌 例如 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管 头不要接触任何其他物体 吸管要在酒精灯 火焰周围 等等 菌种的保存 1 对于频繁使用的菌种 可以采用临时临时保保 藏藏的方法 临时保藏方法 将菌种接种到试管的固体斜面培养基上 在合适的温度下培养 当菌落长成后 将试 管放入 4 的冰箱中保藏 以后每 3 6 个月 都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新 鲜的培养基上 缺点缺点 这种方法保存的时间不长 菌种 容易被污染或产生变异 2 对于需要长期保存的菌种 可以采用甘甘 油管藏油管藏的方法 在 3mL 的甘油瓶中 装入 1mL 甘油后灭 菌 将 1mL 培养的菌液转移到甘油瓶中 与 甘油充分混匀后 放在 20 的冷冻箱中保 存 疑难解答 1 生物的营养 营养是指生物摄取 利用营养物质的过程 营养物质是指维持机体生命活动 保证发育 生殖所需的外源物质 人及动物的营养物质 水 无机盐 糖类 脂质 蛋白质 维生素六类 植物的营养物质 矿质元素 水 二氧化碳 等三类 微生物的营养物质 水 无机盐 碳源 氮 源及特殊营养物质五类 2 确定培养基制作是否合格的方法 将未接种的培养基在恒温箱中保温 1 2 天 无菌落生长 说明培养基的制备是成功 的 否则需要重新制备 课题二 土壤中分解尿素的细菌的分离与 计数 尿素 是一种重要的农业氮肥 尿素 并不能直接被农作物吸收 只有当土壤中的 细菌将尿素分解成氨之后 才能被植物利用 土壤中的细菌之所以能分解尿素 是因为他 们能合成脲酶 尿素最初是从人的尿液中发现的 筛选菌株 1 实验室中微生物的筛选应用的原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件 包 括营养 温度 pH 等 同时抑制或阻止其 他微生物生长 2 选择性培养基 在微生物学中 将允许特定种类的微生物 生长 同时抑制或阻止其他种类微生物生长 的培养基 称作选择选择培养基培养基 3 配制选择培养基的依据 根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入 某种物质以达到选择的目的 例如 培养基 中不加入有机物可以选择培养自养微生物 培养基中不加入氮元素 可以选择培养能固 氮的微生物 加入高浓度的食盐可选择培养 金黄色葡萄球菌等 统计菌落数目 1 测定微生物数量的常用方法有稀稀释释涂布涂布 平板法平板法和显显微微镜镜直接直接计计数数 2 稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目 的原理 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生 长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个 活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测 出样品中大约含有多少活细菌 为了保证结 果准确 一般设置 3 5 个平板 选择菌落数 在 30 300 的平板进行计数 并取平均取平均值值 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低 因 此 统计结果一般用菌落数而不是活菌数来 表示 采用此方法的注意事项 1 一般选取菌落数 在 30 300 之间的平板进行计数 2 为了防止 菌落蔓延 影响计数 可在培养基中加入 TTC 3 本法仅限于形成菌落的微生物 设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中非测 试因素对实验结果的影响 提高实验结果的 可信度 对照实验是指除了被测试的条件以 外 其他条件都相同的实验 其作用是比照 试验组 排除任何其他可能原因的干扰 证 明确实是所测试的条件引起相应的结果 实验设计 实验设计包括实验方案 所需仪器 材料 用具和药品 具体的实施步骤以及时间安排 等的综合考虑和安排 1 土壤取样 同其他生物环境相比 土壤中 的微生物 数量最大 种类最多 在富含有 机质的土壤表层 有更多的微生物生长 从 富含有机物 潮湿 pH 7 的土壤中取样 铲 去表层土 在距地表约 3 8cm 的土壤层取 样 2 样品的稀释 样品的稀释程度将直接影 响平板上生长的菌落数目 在实际操作中 通常选用一定稀释范围的样品液进行培养 以保证获得菌落数在 30 300 之间 适于计 数的平板 测定土壤中细菌的数量 一般选用 104 105 106 测定放线菌的数量 一般选用 103 104 105 测定真菌的数量 一般选用 102 103 104 3 微生物的培养与观察 不同种类的微生物 往往需要不同的培养温 度和培养时间 细菌 30 37 1 2 天 放线菌 25 28 5 7 天 霉菌 25 28 3 4 天 每隔 24 小时统计一次菌落数目 选取菌落 数目稳定时的记录作为结果 这样可以防止 因培养时间不足而导致一楼菌落的数目 一 般来说 在一定的培养条件下 相同的培养 基 唯独及培养时间 同种微生物表现出稳 定的菌落特征 形状 大小 隆起程度 颜色 疑难解答 1 如何从平板上的菌落数推测出每克样 品中的菌落数 统计某一稀释度下平板上的菌落数 最好 能统计 3 个平板 计算出平板菌落数的平均 值 每克样品中的菌落数 C V M 其中 C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数 V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积 ml M 代表稀释倍数 课题三 分解纤维素的微生物的分离 纤维素 一种由葡萄糖首尾相连而成的高分 子化合物 是地球上含量最丰富的多糖类物 质 纤维素与纤维素酶 1 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然 产物 木材 作物秸秆等也富含纤维素 2 纤维素酶是一种复合酶 一般认为它至 少包括三种组分 即 C1酶 CX酶和葡萄糖 苷酶 前两种酶使纤维素分解成纤维二糖 第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖 纤维素 最终被水解成葡萄糖 为微生物的生长提供 营养 纤维素分解菌的筛选 1 筛选方法 刚果红染色法 能够通过颜色 反应直接对微生物进行筛选 2 刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理 刚果红是一种染料 它可以与像纤维素这 样的多糖物质形成红色复合物 但并不和水 解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应 当 我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红 时 刚果红能与培养基中的纤维素形成红色 复合物 当纤维素被纤维素酶分解后 刚果 红 纤维素的复合物就无法形成 培养基中 会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈 这 样 我们就可以通过是否产生透明圈来筛选 纤维素分解菌 分离分解纤维素的微生物的实验流程 土壤取样 选择培养 此步是否需要 应根 据样品中目的菌株数量的多少来确定 梯 度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌 的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 1 土壤采集 选择富含纤维素的环境 2 刚果红染色法分离纤维素分解菌的步骤 倒平板操作 制备菌悬液 涂布平板 3 刚果红染色法种类 一种是先培养微生物 再加入刚果红进行 颜色反应 另一种是在倒平板时就加入刚果 红 课题延伸 对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选 后 只是分离纯化的第一步 为确定得到的 是纤维素分解菌 还需要进行发酵产纤维素 酶的实验 纤维素酶的发酵方法有液体液体发发酵酵 和固体固体发发酵酵两种 纤维素酶的测定方法 一 般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产 生的葡萄糖进行定量的测定 疑难解答 1 为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤 维素分解菌 由于生物与环境的相互依存关系 在富含 纤维素的环境中 纤维素分解菌的含量相对 提高 因此从这种土样中获得目的微生物的 几率要高于普通环境 2 将滤纸埋在土壤中有什么作用 你认为 滤纸应该埋进土壤多深 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对 聚集 实际上是人工设置纤维素分解菌生存 的适宜环境 一般应将纸埋于深约 10cm 左 右腐殖土壤中 3 两种刚果红染色法的比较 方法一是传统的方法 缺点是操作繁琐 加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂 其 优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤 维素分解菌的作用 方法二的优点是操作简 便 不存在菌落混杂问题 缺点是由于纤维 素和琼脂 土豆汁中都含有淀粉类物质 可 以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性 反应 但这种只产生淀粉酶的微生物产生的 透明圈较为模糊 因为培养基中纤维素占主 要地位 因此可以与纤维素酶产生的透明圈 相区分 方法二的另一缺点是 有些微生物 具有降解色素的能力 它们在长时间培养过 程中会降解刚果红形成明显的透明圈 与纤 维素分解菌不易区分 4 为什么选择培养能够 浓缩 所需的微生 物 在选择培养的条件下 可以使那些能够适 应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖 而 那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖 被抑制 因此可以起到 浓缩 的作用 专题三 植物的组织培养技术 课题一 菊花的组织培养 植物组织培养的基本过程 细胞分化 在生物个体发育过程中 细胞在 形态 结构和生理功能上出现稳定性差异的 过程 离体的植物组织或细胞 在培养了一段时间 以后 会通过细胞分裂 形成愈伤组织 愈 伤组织的细胞排列疏松而无规则 是一种高 度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞 由高 度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的 过程 称为植物细胞的脱分化 或者叫做去 分化 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养 又可以重新分化成根或芽等器官 这个过程 叫做再分化 再分化形成的试管苗 移栽到 地里 可以发育成完整的植物体 植物细胞工程 具有某种生物全套遗传信息的任何一个活 细胞 都具有发育成完整个体的能力 即每 个生物细胞都具有全能性 但在生物体的生 长发育过程中并不表现出来 这是因为在特 定的时间和空间条件下 通过基因的选择性 表达 构成不同组织和器官 植物组织培养技术的应用有 实现优良品种 的快速繁殖 培育脱毒作物 制作人工种子 培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生 产等 细胞分化是一种持久性的变化 它有什么 生理意义 使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专 门化 有利于提高各种生理功能的效率 比较根尖分生组织和愈伤组织的异同 影响植物组织培养的条件 材料 材料 不同的植物组织 培养的难易程度差 别很大 植物材料的选择直接关系到试验的 成败 植物的种类 材料的年龄和保存时间 的长短等都会影响实验结果 菊花组织培养 一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧 枝作材料 一般来说 容易进行无性繁殖的 植物容易进行组织培养 选取生长旺盛嫩枝 进行组培的是嫩枝生理状态好 容易诱导脱 分化和再分化 营营养 养 离体的植物组织和细胞 对营养 环境 等条件的要求相对特殊 需要配制适宜的培 养基 常用的培养基是 MS 培养基 其中含 组织类型细胞来源细胞形态细胞结构细胞排列细胞去向 根尖 分生组织 受精卵正方形无液泡紧密 分化成多种 细胞组织 愈伤组织高度分化细胞无定形高度液泡化疏松再分化成新个体 相同点都通过有丝分裂进行细胞增殖 有的大量元素是 N P S K Ca Mg 微量 元素是 Fe Mn B Zn Cu Mo I Co 有机 物有甘氨酸 烟酸 肌醇 维生素 蔗糖等 激素 激素 植物激素中生生长长素素和细细胞分裂素胞分裂素是启 动细胞分裂 脱分化和再分化的关键性激素 在生长素存在的情况下 细胞分裂素的作用 呈现加强趋势 在培养基中需要添加生长素 和细胞分裂素等植物激素 其浓度 使用的 先后顺序 用量的比例等都影响结果 环环 境境 条条 件 件 P H 温度 光等环境条件 不同的植物对各种条件 的要求往往不同 进行 菊花的组织培养 一般将 pH 控制在 5 8 左 右 温度控制在 18 22 并且每日用日光 使用顺 序 实验结 果 先生长 素 后细胞 分裂素 有利于 分裂但 不分化 先细胞 分裂素 后生长 素 细胞既 分裂也 分化 同时使 用 分化频 率提高 生长素 细胞 分裂素比值与结 果 比值 高时 促根分化 抑芽形成 比值 低时 促芽分化 抑根形成 比值 适中 促进愈伤 组织生长 灯照射 12h 4 操作流程 配制配制 MS 固体培养基固体培养基 配制各种母液 将各 种成分按配方比例配制成的浓缩浓缩液液 培养基 母液 使用时根据母液的浓缩倍数 计算用量 并 加蒸馏水稀释 配制培养基 应加入的物质有琼脂 蔗糖 大量元素 微量元素 有机物和植物激素的 母液 并用蒸馏水定容到 1000 毫升 在菊花组织培养中 可以不添加植物激素 原因是菊花茎段组织培养比较容易 灭菌 采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌 MS 培养基中各种营养物质的作用是什么 与肉汤培养基相比 MS 培养基有哪些特点 大量元素和微量元素提供植物细胞所必需 的无机盐 蔗糖提供碳源 维持细胞渗透压 甘氨酸 维生素等物质主要是为了满足离体 植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后 所产生的特殊营养需求 微生物培养基以有机有机营营养养为主 MS 培养基 则需提供大量无机无机营营养养 外植体的消毒外植体的消毒 外植体 用于离体培养的植 物器官或组织片段 选取菊花茎段时 要取 生长旺盛的嫩枝 菊花茎段用流水冲洗后可 加少许洗衣粉 用软刷轻轻刷洗 刷洗后在 流水下冲洗 20min 左右 用无菌吸水纸吸干 外植体表面的水分 放入体积分数为 70 的 酒精中摇动 2 3 次 持续 6 7s 立即将外植 体取出 在无菌水中清洗 取出后仍用无菌 吸水纸吸干外植体表面水分 放入质量分数 为 0 1 的氯化汞溶液中 1 2min 取出后 在无菌水中至少清洗 3 次 漂洗消毒液 注意 对外植体进行表面消毒时 就要考虑 药剂的消毒效果 又要考虑植物的耐受能力 接种 接种 接种过程中插入外植体时形态学上端 朝上 每个锥形瓶接种 7 8 个外植体 外植 体接种与细菌接种相似 操作步骤相同 而 且都要求无菌操作 培养 培养 应该放在无菌箱中进行 并定期进行 消毒 保持适宜的温度 18 22 和光照 12h 移栽 移栽 栽前应先打开培养瓶的封口膜 让其 在培养间生长几日 然后用流水清洗根部培 养基 然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍 珠岩等环境中生活一段时间 进行壮苗 最 后进行露天栽培 栽培栽培 外植体在培养过程中可能会被污染 原因有 外植体消毒不彻底 培养基灭菌不彻底 接 种中被杂菌污染 锥形瓶密封性差等 专题二 月季的花药培养 被子植物的花粉发育被子植物的雄蕊通常 包含花花丝丝 花花药药两部分 花药为囊状囊状结结构构 内部含有许多花粉 花粉是由花粉母花粉母细细胞胞经 过减数分裂而形成的 因此 花粉是单单倍体倍体 的生殖的生殖细细胞胞 被子植物花粉的发育要经历小小 孢孢子四分体子四分体时时期期 单单核期核期和双核期双核期等阶段 在小孢子四分体时期 4 个单倍体细胞连在 一起 进入单核期时 四分体的 4 个单倍体 细胞彼此分离 形成 4 个具有单细胞核的花 粉粒 这时的细胞含浓厚的原生质 核位于 细胞的中央 单单核居中期核居中期 随着细胞不断长 大 细胞核由中央移向细胞一侧 单单核靠核靠边边 期期 并分裂成 1 个生殖细胞核和 1 个花粉 管细胞核 进而形成两个细胞 一个是生殖 细胞 一个是营养细胞 生殖细胞将在分裂 一次 形成两个精子 注意 注意 成熟的花粉粒有两类 一类是二核 花粉粒 其花粉粒中只含花粉管细胞核和生 殖细胞核 二核花粉粒的精子是在花粉管中 形成的 另一类是三核花粉粒 花粉在成熟 前 生殖细胞就进行一次有丝分裂 形成两 个精子 此花粉粒中含有两个精子核和一个 花粉管核 营养核 花粉发育过程中的四 分体和动物细胞减数分裂的四分体不同 花 粉发育过程中的四分体是花粉母细胞经减 数分裂形成的 4 个连在一起的单倍体细胞 而动物细胞减数分裂过程中的四分体是联 会配对后的一对同源染色体 由于含有四条 染色单体而称为四分体 同一生殖细胞形 成的两个精子 其基因组成完全相同 产生花粉植株的两种途径通过花药培养产 生花粉植株 即单倍体植株 一般有两种途两种途 径径 一种是花粉通一种是花粉通过过胚状体胚状体阶阶段段发发育育为为植物 植物 另一种是花粉在另一种是花粉在诱导诱导培养基上先形成愈培养基上先形成愈伤伤 组织组织 再将其 再将其诱导诱导分化成植株分化成植株 这两种途径 之间并没有绝对的界限 主要取决于培养基 中激素的种激素的种类类及其浓浓度配比度配比 注意 注意 无论哪种产生方式 都要先先诱导诱导生生 芽 再芽 再诱导诱导生根生根 胚状体 胚状体 植物体细胞组织 培养过程中 诱导产生的形态与受精卵发育 成的胚非常类似的结构 其发育也与受精卵 发育成的胚类似 有胚芽 胚根 胚轴等完 整结构 就像一粒种子 又称为细胞胚 影响花药培养的因素诱导花粉能否成功及 诱导成功率的高低 受多种因素影响 其中 材料的材料的选择选择与培养基的培养基的组组成成是主要的影响 因素 亲本的生理状况 花粉早期是的花药比后期 的更容易产生花粉植株 选择月季的初花期月季的初花期 合适的花粉发育时期 一般来说 在单单核期核期 细胞核由中央移向细胞一侧的时期 花药培 养成功率最高 花蕾 选择完全未开放完全未开放的花蕾 亲亲本植株的生本植株的生长长条件条件 材料的低温材料的低温预处预处理理 以及接种密度接种密度等对诱导成功率都有一定影 响 材料的选取 选择花药时 一般要通过镜检镜检 来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期 确定花粉发育时期的最常用的方法是醋酸醋酸 洋洋红红法法 但是 某些植物的花粉细胞核不易 着色 需采用焙花青焙花青 铬矾铬矾法法 这种方法能将 花粉花粉细细胞核胞核染成蓝蓝黑色黑色 材料的消毒 接种和培养 灭菌后的花蕾 要在无菌条件 下除去萼片和花瓣 并立即将花药接种到培 养基上 在剥离花药时 要尽量不尽量不损伤损伤花花药药 否则接种后容易从受伤部位长生愈伤组织 同时还要彻彻底去除花底去除花丝丝 因为与花丝相连 的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 通 常每瓶接种花药 7 10 个 培养温度控制在 25 左右 不需要光照不需要光照 幼小植株形成后才需幼小植株形成后才需 要光照要光照 一般经过 20 30 天培养后 会发现 花花药药开裂开裂 长出愈伤组织或形成胚状体 将 愈伤组织及时转移到分化培养基上 以便进 一步分化出再生植株 如果花药开裂释放出 胚状体 则一个花药内就会产生大量幼小植 株 必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开 分别移植到新的培养基上 否则这些植株将 很难分开 还需要对培养出来的植株做进一 步的鉴定和筛选 植物组织培养技术与花药培养技术的相同 之处是 培养基配制方法 无菌技术及接种 操作等基本相同 两者的不同之处在于 花 药培养的选材非常重要 需事先摸索时期适 宜的花蕾 花药裂开后释放出的愈伤组织或 胚状体也要及时更换培养基 花药培养对培 养基配方的要求更为严格 这些都使花药培 养的难度大为增加 专题五 和蛋白质技术 课题一 的粗提取与鉴定 提取 DNA 的溶解性原理包括哪些方面 DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度不 同 DNA 不溶于酒精 DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶 解度有何特点 要使 DNA 溶解 需要使用什么浓度 要使 DNA 析出 又需 要使用什么浓度 在 0 14mol L 时溶解度最小 较高浓度 可使 DNA 溶解 0 14mol L 可使 DNA 析出 在溶解细胞中的 DNA 时 人们通常选用 2mol LNaCl 溶液 将 DNA 分子析出的方法 是向溶有 DNA 的 NaCl 溶液中缓慢注入蒸 馏水 以稀释 NaCl 溶液 酒精是一种常用 有机溶剂 但 DNA 却不能溶于酒精 特别 是 95 冷却酒精 但细胞中蛋白质可溶于 酒精 从理论上分析 预冷的乙醇溶液具有以下优 点 一是抑制核酸水解酶活性 防止 DNA 降解 二是降低分子运动 易于形成沉淀析 出 三是低温有利于增加 DNA 分子柔韧性 减少断裂 采用 DNA 不溶于酒精的原理 可以达到什 么目的 将 DNA 和蛋白质进一步分离 提取 DNA 还可以利用 DNA 对酶 高温和 洗涤剂的耐受性原理 利用该原理时 应选 用怎样的酶和怎样的温度值 蛋白酶 因为酶具有专一性 蛋白酶只 水解蛋白质而不会对 DNA 产生影响 温度 值为 60 80 因为该温度值蛋白质变性沉 淀 而 DNA 不会变性 补充 DNA 的变性是指 DNA 分子在高 温下解螺旋 其温度在 80 以上 如在 PCR 技术中 DNA 变性温度在 95 洗涤剂在提取 DNA 中有何作用 洗涤剂将细胞膜上的蛋白质 从而瓦解 细胞膜 当鉴定提取出的物质是否是 DNA 时 需要 使用什么指示剂进行鉴定 在沸水浴条件下 DNA 遇二苯胺呈现蓝 色 原理总结 通过利用不同浓度 NaCl 溶液 溶解或析出 DNA 可以从细胞中提取和提 纯 DNA 再利用酒精进一步将 DNA 与蛋白 质分离开来 达到提纯的目的 最后利用二 苯胺试剂鉴定提取的物质是否是 DNA 实验实验材料的材料的选选取取 不同生物的组织中 DNA 含量不同 在 选取材料时 应本着 DNA 含量高 材料易 得 便于提取的原则 本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原 因 一是因为鸡血细胞核的 DNA 含量丰富 材料易得 二是鸡血细胞极易吸水胀破 而 用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆 和离心 对设备要求较高 操作繁琐 历时 较长 鸡血细胞破碎以后释放出的 DNA 容易 被玻璃容器吸附 所以在提取过程中为了减 少 DNA 的损失 最好使用塑料的烧杯和试 管盛放鸡血细胞液 破碎破碎细细胞 胞 获获取含取含 DNA 的的滤滤液液 若选用鸡血和洋葱作实验材料 则怎样获 取含 DNA 的滤液 在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用 玻棒搅拌 过滤后收集滤液 切碎洋葱 加入 一定量洗涤剂和食盐 搅拌研磨 过滤后收 集滤液 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂 答 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液 体 水分可以大量进入血细胞内 使血细胞 胀裂 再加上搅拌的机械作用 就加速了鸡 血细胞的破裂 细胞膜和核膜的破裂 从而 释放出 DNA 在以上实验中 加入蒸馏水 洗涤剂和食盐 的作用分别是什么 过滤时应当选用 滤纸 尼龙布 血细胞在蒸馏水中大量吸水而张 裂 洗涤剂瓦解细胞膜 食盐溶解 DNA 物质 选用尼龙布进行过滤 在处理植物组织时需要进行研磨 其目的 是什么 研磨不充分产生什么结果 破碎细胞壁 使核物质容易溶解在 NaCl 溶 液中 研磨不充分会使 DNA 的提取量减少 影响实验结果 导致看不到丝状沉淀物 用 二苯胺鉴定不显示蓝色等 具体做法 10mL 鸡血 20mL 蒸馏水 同方向搅拌 3 层尼龙布过滤 滤液 去除去除滤滤液中的液中的杂质杂质 为什么反复地溶解与析出 DNA 能够去除 杂质 用高盐浓度的溶液溶解 DNA 能除去 在高盐中不能溶解的杂质 用低盐浓度使 DNA 析出 能除去溶解在低盐溶液中的杂 质 因此 通过反复溶解与析出 DNA 就能 够除去与 DNA 溶解度不同的多种杂质 最初获得的 DNA 滤液含有蛋白质 脂质等 杂质 需要进一步提纯 DNA 方案一的原理是 DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度不同 方案二的原理是蛋白酶 分解蛋白质 不分解 DNA 方案三的原理是 蛋白质和 DNA 的变性温度不同 方案二与方案三的原理有什么不同 答 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白 从 而使提取的 DNA 与蛋白质分开 方案三利 用的是 DNA 和蛋白质对高温耐受性的不同 从而使蛋白质变性 与 DNA 分离 析出与析出与鉴鉴定定 在滤液中仍然含有一些杂质 怎样除去这 些杂质呢 得到的 DNA 呈何颜色 滤液与等体积的冷却酒精混 合均匀 静置 2 3 分钟 析出 的白色丝状物就是 DNA DNA 呈白色 怎样鉴定析出的白色丝状物就是 DNA 呢 具体做法 试管 2 支 编号甲乙 各加 等量 5mLNaCl 溶液 甲中放入少量白色丝 状物 使之溶解 各加 4mL 二苯胺 混合均 匀 沸水浴 5min 观察颜色变化 实验实验操作操作 制备鸡血细胞液 加柠檬酸钠 静置或离心 破碎细胞 释放 DNA 加蒸馏水 同 一方向快速通方向搅拌 过滤 除去细胞壁 细胞膜等 溶解核内 DNA 加入 NaCl 至 2mol L 同一方向缓慢搅拌 DNA 析出 加蒸馏水至 0 14mol L 过滤 在溶解到 2mol L 溶液中 除去细胞质中的大部分物质 DNA 初步纯化 与等体积 95 冷却酒精混合 析出白色丝状物 除去核蛋白 RNA 多糖等 DNA 鉴定 二苯胺 沸水 浴 呈现蓝色 注意事注意事项项 在 在鸡鸡血中加入血中加入柠柠檬酸檬酸钠钠防止凝固 防止凝固 鸡鸡血静置或离心以提高血静置或离心以提高细细胞胞悬悬液液浓浓度 使用度 使用 塑料塑料烧烧杯 使用尼杯 使用尼龙龙布布过滤过滤 玻棒沿同一方 玻棒沿同一方 向向搅搅拌 玻棒拌 玻棒搅搅拌要拌要缓缓慢 慢 细细胞破裂快速胞破裂快速搅搅 拌 玻棒不要碰到拌 玻棒不要碰到烧烧杯壁 二苯胺杯壁 二苯胺试剂试剂要要现现 用用现现配等 配等 专题六 植物有效成分的提取 课题一 植物芳香油的提取 天然香料的来源 植物 动物 不同植物的根 茎 叶 花 果实 种子都可 以提取芳香油 芳香油的提取方法 蒸馏 压榨 萃取等 芳香油的性质 挥发性强 成分复杂 以萜类 化合物及其衍生物为主 水蒸气蒸馏法 原理 水蒸汽可将挥发性较强的芳香油携带 出来形成油水混合物 冷却后水油分层 方法 水中蒸馏 原料放在沸水中加热蒸馏 水上蒸馏 原料隔放在沸水上加热蒸 馏 水汽蒸馏 利用外来高温水蒸气加热 蒸馏 不足 有些原料不适宜于水中蒸馏 如 柑橘 柠檬等易焦糊 有效成分容易水解 通常用压榨法 通过机械压缩力将液相物从 液固两相混合物中分离出来的一种简单操 作 萃取法 原理 芳香油易溶于有机溶剂 溶剂挥发 后得到芳香油 如石油醚 酒精 乙醚等 方法 原料浸泡在溶剂中 得到浸泡液 有机溶剂挥发 芳香油 不足 有机溶剂中的杂质影响芳香油的 品质 蒸蒸馏馏装置装置包括 铁架台两个 酒精灯 石棉网 蒸馏瓶 橡胶 塞 蒸馏头 温 度计 直型冷 凝管 接液管 锥形瓶 以及 连接进水口和出水口的橡皮管 所有仪器必 须事先干燥 保证无水 整套蒸馏装置可分 为左 中 右三部分 其中左边的部分通过 加热进行蒸馏 中部将蒸馏物冷凝 右边的 部分用来接收 安装仪器一般都按照自下而 上 从左到右的顺序 拆卸仪器的顺序与安 装时相反 具体安装顺序和方法如下 1 固 定热源 酒精灯 2 固定蒸馏瓶 使其离热源的距离如教科 书中图 6 2 所示 并且保持蒸馏瓶轴心与铁 架台的水平面垂直 3 安装蒸馏头 使蒸馏头的横截面与铁架 台平行 4 连接冷凝管 保证上端出水口向上 通过 橡皮管与水池相连 下端进水口向下 通过 橡皮管与水龙头相连 5 连接接液管 或称尾接管 6 将接收瓶瓶口对准尾 接管的出口 常压蒸馏一 般用锥形瓶而不用烧杯 作接受器 接收瓶应在实 验前称重 并做好记录 7 将温度计固定在蒸馏头上 使温度计水 银球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一 水平线上 蒸馏装置安装完毕后 可以在蒸馏瓶中加几 粒沸石 防止液体过度沸腾 打开水龙头 缓缓通入冷水 然后开始加热 加热时可以 观察到 蒸馏瓶中的液体逐渐沸腾 蒸气逐 渐上升 温度计读数也略有上升 当蒸气的 顶端达到温度计水银球部位时 温度计读数 急剧上升 在整个蒸馏过程中 应保证温度 计的水银球上常有因冷凝作用而形成的液 滴 控制蒸馏的时间和速度 通常以每秒 1 2 滴为宜 分液漏斗分液漏斗的使用方法如下 1 首先把活塞擦干 为活塞均匀涂上一层 润滑脂 注意切勿将润滑脂涂得太厚或使润 滑脂进入活塞孔中 以免污染萃取液 2 塞好活塞后 把活塞旋转几圈 使润滑脂 分布均匀 并用水检查分液漏斗的顶塞与活 塞处是否渗漏 确认不漏水后再使用 3 将分液漏斗放置在大小合适的 并已固 定在铁架台上的铁圈中 关好活塞 将待分 离的液体从上部开口处倒入漏斗中 塞紧顶 塞 注意顶塞不能涂润滑脂 4 取下分液漏斗 用右手手掌顶住漏斗顶 塞并握住漏斗颈 左手握住漏斗活塞处 大 拇指压紧活塞 将分液漏斗略倾斜 前后振 荡 开始振荡时要慢 5 振荡后 使漏斗口仍保持原倾斜状态 左