常用缓冲液及培养基配方

常用缓冲液及培养基配方常用缓冲液及培养基配方 LB 液体培养基液体培养基 Bacto 蛋白胨10g 酵母抽提物5g 氯化钠10g 加 950ml 蒸馏水溶解 用 5N 氢氧化钠调 pH 至 7 0 定容至 1000ml 高压灭菌后保存 LB 固体培养基固体培养基 每升 LB 液体培养基中加入 12g 琼脂粉 高压灭菌后保存 SOB液体培养基液体培养基 Bacto 蛋白胨20g 酵母抽提物5g NaCl0 5g 加950 ml水溶解 加入250mmol L KCl 溶液10ml 用5 N NaOH调pH至7 0 定容至 1000 ml 高压灭菌后保存 使用前加入5ml经灭菌的2mol LMgCl2 SOC液体培养基液体培养基 SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol L 麦康凯固体培养基麦康凯固体培养基 每 1000ml 水中加 52g 培养基粉 煮沸溶解后分装 高压灭菌 NA 固体培养基固体培养基 牛肉浸膏3g 酵母浸膏1g 蛋白胨 蔗糖 琼脂粉 5g 10g 15g 加 950ml 蒸馏水溶解 调 pH 至 7 0 定容至 1000ml 高压灭菌后保存 TB 培养基培养基 将下列组分溶解在 0 9L 水中 Bacto 蛋白胨12g 酵母抽提物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌 冷却到 60 再加 100ml 灭菌的 170mmol L KH2PO4 0 72 mol L K2HPO4的溶液 高压灭菌或用 0 22um 的滤膜过滤除菌 溶液溶液 葡萄糖 2 25 g 50mmol L 1mol L Tris Cl pH8 0 6 25ml20mmol L 0 5mol L EDTA pH8 0 5ml10mmol L 调pH至8 0后 用水定容至250 ml 高压灭菌后保存 溶液溶液 10 mol L NaOH2ml 10 SDS10ml 用水定容至100 ml 现配现用 溶液溶液 5 mol L 醋酸钾60ml 冰醋酸11 5ml 水28 5ml 高压灭菌后保存 高盐高盐 TE 缓冲液缓冲液 10mmol L Tris Cl pH 8 0 0 1mmol L EDTA pH 8 0 1mol L NaCl 于室温保存 可在几年内保持稳定 CTAB 抽提液抽提液 2 w v CTAB 古立烷基三乙基溴化铵 100mmol L Tris Cl pH 8 0 1 4mol L NaCl 于室温保存 可在几年内保持稳定 CTAB NaCl 溶液溶液 10 CTAB 0 7mol L NaCl 在 80ml H2O 中溶解 4 1g NaCl 缓慢加入 10 一 CTAB 十六烷基三乙基溴化铵 同时 加热并搅拌 如果需要 可加热至 65 溶解 定容终体积至 100ml CTAB 沉淀液沉淀液 1 w v CTAB 50mmol L Tris Cl pH 8 0 10mmol L EDTA pH8 0 PBS 缓冲液 缓冲液 十二水磷酸氢二钠15g 磷酸二氢钾1g 氯化钠40g 氯化钾1g 定容至 5000ml 调 pH 至 7 2 ELISA 包被液包被液 碳酸钠1 59g 碳酸氢钠2 93g 定容至 1000ml 调 pH 至 9 6 ELISA 洗涤液洗涤液 0 01M PBST 5000ml PBS 中加 2 5ml 吐温 20 显色液 底物溶液显色液 底物溶液 邻苯二胺溶液 邻苯二胺溶液 pH5 0 磷酸盐 柠檬酸缓冲液 0 1 M 柠檬酸 19 2 g L 24 3 ml 0 2 M Na2HPO4 28 4 g L 25 7 ml 临用时取上述溶液10 ml 加邻苯二胺 OPD 4 mg 溶解后加入 30 H2O2 15 l 终止液终止液 2 M H2SO4 TE 缓冲液缓冲液 pH8 0 Tris HCl pH8 0 10mmol L EDTA pH8 0 1mmol L 高压灭菌 10 SDS 10g 十二烷基硫酸钠溶于 90ml 水中 加热至 68 溶解 加几滴浓盐酸调 pH 至 7 2 定容至 100ml 过滤除菌 50 TAE缓冲液缓冲液 Tris242 g 冰醋酸57 1 ml 0 5 mol L EDTA pH8 0 100 ml 用水定容至1000 ml 用时稀释50倍 5 TBE 缓冲液缓冲液 Tris 碱 54g 硼酸27 5ml 0 5mol L EDTA pH8 0 20ml 加水定容至 1000ml 0 5 使用 6 DNA 上样缓冲液上样缓冲液 0 25 溴酚蓝 0 25 二甲苯青 FF 30 甘油 甲醛凝胶加样缓冲液甲醛凝胶加样缓冲液 DEPC 处理水配制 50 甘油 1mmol L EDTA pH8 0 0 25 溴酚蓝 0 25 二甲苯青 FF 适量溴化乙锭 20 SSC 氯化钠175 3g 柠檬酸钠88 2g 蒸馏水900ml 溶解后用 5N 氢氧化钠调 pH 至 7 0 定容至 1000ml 高压灭菌保存 预杂交液预杂交液 6 SSC 5 Denhardt 试剂 0 5 SDS 100ug ml 经变性并断裂成片段的鲑精 DNA 5 甲醛凝胶电泳缓冲液甲醛凝胶电泳缓冲液 0 1mol L MOPS pH7 0 40mmol L 乙酸钠 5mmol L EDTA pH8 0 甲醛变性凝胶配方甲醛变性凝胶配方 加入 0 7 g 琼脂糖到 49 7 ml DEPC H2O 中 用煮沸法溶解琼脂糖 待溶液冷却至 55 同时加入 7 ml 10 MOPS 0 2 mol L MOPS pH7 0 20 m mol L 乙酸钠 10 m mol L EDTA pH8 0 电泳缓冲液和 13 3 ml 甲醛 摇匀 制板待用 0 5 mol L 磷酸缓冲液 磷酸缓冲液 PH 7 2 134 g Na2HPO4 4 ml 85 H3PO4 用水定容至 1L 探针标记中的逆转录终止液探针标记中的逆转录终止液 1 TEN 40 m mol L Tris Cl PH 7 5 1 m mol L EDTA PH 8 0 150 m mol L NaCl 洗膜液洗膜液 2 SSC 0 1 m V SDS 洗膜液洗膜液 0 1 SSC 0 1 m V SDS SDS PAGE 电泳分析所用的试剂 电泳分析所用的试剂 30 丙烯酰胺丙烯酰胺 29g丙烯酰胺和1g N N 亚甲基双丙烯酰胺 加入60ml ddH2O 完 全溶解后定容至100ml 过滤 置棕色瓶中备用 Tris 甘氨酸电泳缓冲液甘氨酸电泳缓冲液 Tris 3 00g 甘氨酸14 4g SDS 1g 调pH至8 3 用水定容至 1L 12 分离胶分离胶 ddH2O 3 3ml 30 丙烯酰胺4ml Tris HCl pH8 8 2 5ml 10 SDS 0 1ml 10 过硫酸铵0 1ml TEMED 0 006ml 5 浓缩胶浓缩胶 ddH2O 1 4ml 30 丙烯酰胺0 33ml Tris HCl pH6 6 0 25ml 10 SDS0 02ml 10 过硫酸铵0 02ml TEMED 0 002ml 考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝染色液 乙醇450ml 冰醋酸100ml ddH2O 450ml 考马斯亮蓝R 250 2 5g 脱色液 1L 乙醇450ml 冰醋酸100ml ddH2O 450ml 2 上样缓冲液上样缓冲液 100mmol L Tris HCl pH6 8 200mmol L 二硫苏糖醇 DTT 4 SDS 0 2 溴酚蓝 20 甘油 蛋白纯化所需的缓冲液蛋白纯化所需的缓冲液 Buffer B pH 8 0 8M urea 100 mM NaH2PO4 10mM Tris Cl Buffer C pH 6 3 8M urea 100 mM NaH2PO4 10mM Tris Cl Buffer D pH 5 9 8M urea 100 mM NaH2PO4 10mM Tris Cl Buffer E pH 4 5 8M urea 100 mM NaH2PO4 10mM Tris Cl 电洗脱缓冲液电洗脱缓冲液 SDS0 1 0 5g Tris Base3g 甘氨酸18 8g 定容至 1000ml 蛋白提取缓冲液蛋白提取缓冲液 Tris HCl pH6 850mmol L SDS4 5 疏基乙醇 尿素 7 5 9mol L 电转移缓冲液 电转移缓冲液 Tris Base 3 00g 甘氨酸14 4g SDS 1g 甲醇 200ml 调pH至8 3 用水定容至1L Western blot所用试剂 所用试剂 1 PBS pH7 4 NaCl 8 g KCl 0 2 g KH2PO4 0 24 g Na2HPO4 1 44g 用蒸馏水溶解 至1 L 1 PBST 5L 1 PBS 中加入2 5ml Tween 20 封闭液 封闭液 100ml PBS缓冲液中加入5克脱脂奶粉 植物基本培养基溶液植物基本培养基溶液 大量元素大量元素 1L 七水硫酸镁370mg 磷酸二氢钾170mg 硝酸钾1900mg 硝酸氨1650mg 二水氯化钙440mg 微量元素微量元素 1L 硼酸6 2mg 一水硫酸锰15 6mg 七水硫酸锌8 6mg 二水钼酸钠0 25mg 五水硫酸铜0 025mg 六水氯化钴0 025mg 碘化钾0 83mg 七水硫酸亚铁27 8mg 乙二铵二乙酸二钠37 3mg 有机有机 1L 盐酸硫胺素0 5mg 盐酸吡哆辛0 5mg 烟酸0 05mg 肌醇100mg MSs 培养基培养基 10 大量 100ml 100 微量 10ml 100 铁盐 10ml 500 B5 有机 2ml 6 BA1mg 蔗糖30g 琼脂0 8 调 PH5 8 并加水定容至 1L Msr 1L 10 大量元素 100ml 100 微量元素 10ml 100 Fe 盐 10ml 500 B5 有机 2ml 蔗糖3g 葡萄糖7g 琼脂0 8 PH5 8 加水定容至 1L 水稻转化用培养基水稻转化用培养基 培养基成分 NB 基本培养基 刘巧泉等 1998 N6 大量元素营养液 EDTA Fe 营养液 B5 微量元素营养液 B5 维生素营养液 Nbi 愈伤诱导和继代 培养基 NB 0 5g L 谷氨酰胺 0 5g L 脯氨酸 0 3g L 水解酪蛋白 30g L 蔗糖 2mg L 2 4 D 2 6g L 植物胶 pH5 8 高渗培养基Nbi 47g L 山梨醇 47g L 甘露醇 pH5 8 NBs 筛选培养基 NB 0 5g L 谷氨酰胺 0 5g L 脯氨酸 0 3g L 水解酪蛋白 30g L 蔗糖 2mg L 2 4 D 40mg L Hyg 第二次筛选用量为 50mg L 2 6g L 植物胶 pH5 8 MS 再生培养基 MS 大量元素营养液 EDTA Fe 营养液 MS 微量元素营养液 B5 维生素营养液 2g L 水解酪蛋白 30g L 蔗糖 30g L 山梨 醇 2 0mg L 6 BA 0 5mg L NAA 30mg L Hyg 3 0g L 植物胶 pH5 8 NBr 再生培养基 NB 2g L 水解酪蛋白 30g L 蔗糖 30g L 山梨醇 2 0mg L 6 BA 0 5mg L NAA 30mg L Hyg 3 0g L 植物胶 pH5 8 1 2MS 生根培养基 1 2 MS 大量元素营养液 EDTA Fe 营养液 MS 微量元素营养液 B5 维生素营养液 3g L 蔗糖 7g L 葡萄糖 40mg L Hyg 2 6g L 植物胶 pH5 8 水稻转化用激素和化合物的配制水稻转化用激素