1 糖的呈色反应和定性鉴定

欢迎同学们上 生物化学实验 任课教师 刘昱杨明园陈颖卓 考核方式 实验报告情况 50 实验操作情况 20 开放实验 10 理论考试 10 实验素质 10 预习情况原始数据 实验结果结果讨论 不及格 60分 有下列情况者 实验项目成绩评为不及格 1 不能完成基本的实验操作 2 实验报告马虎 内容不全 无数据处理过程或数据处理过程不完整 实验无结论等 3 抄袭实验报告 4 未做实验 但模仿指导教师笔迹签字伪造原始数据的 5 无故缺席或者迟到30分钟以上者 不能补做 该次实验成绩按0分记 有关网址和参考书目 实验一糖的呈色反应和定性鉴定 实验目的及要求 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法学习鉴定还原糖的方法及其原理加强对糖的结构和性质的理解 糖 saccharide Cn H2O n 多羟基醛或多羟基酮以及它们的聚合物或衍生物 单糖 monosaccharide 不能被水解成更小分子的糖寡糖 oligosaccharide 2 10个单糖脱水后以糖苷键相连而成多糖 polysaccharide 由糖苷键结合的糖链 超过10个以上的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物结合糖 glycoconjugate 糖脂 糖蛋白 蛋白聚糖 糖 核苷酸等糖的衍生物 糖醇 糖酸 糖胺 糖苷 葡萄糖 Glucose 单糖 全部都是还原糖 分为丙糖 丁糖 戊糖 己糖 庚糖等 酮糖 醛糖 果糖 Fructose CH2OH C O CH2OH H C OH 双糖 麦芽糖 maltose 乳糖 lactose 蔗糖 sucrose 还原二糖 还原二糖 非还原糖 D 葡萄糖部分 D 葡萄糖部分 D 葡萄糖部分 D 半乳糖部分 D 葡萄糖部分 D 果糖部分 多糖 均多糖 淀粉 纤维素等 杂多糖 透明质酸等 非还原糖 难溶于水 不溶于有机溶剂 在酸性条件下水解可生成寡糖或单糖 单糖 双糖 多糖 葡萄糖 醛糖 果糖 酮糖 麦芽糖乳糖纤维二糖 蔗糖 淀粉纤维素 还原糖 非还原糖 还原糖 淀粉纤维素 目的 鉴定是否存在糖类测定糖类的含量鉴定酮糖和醛糖鉴定还原糖和非还原糖鉴定单糖与还原二糖 Molish反应蒽酮反应Seliwanoff反应Fehling试验Benedict试验Barfoed试验 实验 葡萄糖 果糖 麦芽糖 乳糖 蔗糖 淀粉 及水 1 Molish反应 糖定性 糠醛 紫红色复合物 糖 a 萘酚紫红色复合物 紫环反应 浓酸 各种糠醛衍生物 葡萄糖醛酸 丙酮 甲酸 乳酸 草酸 甘油醛等均产生近似的颜色反应 假阳性 果糖浓度过高时 由于浓硫酸对它的焦化作用 将呈现红色及褐色 Molish实验步骤 对试管做标号每管1ml各待测糖溶液 100mlMolish试剂倾斜试管 沿管壁小心加入约1ml浓硫酸 切勿摇动 小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化比较各管的颜色并记录 2 蒽酮反应 糖定量 该蓝绿色复合物在630nm有最大的吸收峰 并且在一定范围内 颜色与糖量的多少成正比 勿混入沉淀 不同糖类呈色深浅不同 故仅用于单一糖类的测定 糖 蒽酮蓝绿色复合物 浓酸 1ml蒽酮试剂 100ml各待测糖 酮糖 间苯二酚鲜红色复合物 浓酸 1min 醛糖 间苯二酚淡黄色复合物 浓酸 10 20min 果糖 葡萄糖 3 Seliwanoff反应 鉴定酮糖 1mlSeliwanoff试剂 200ml各待测糖加热 鉴定还原糖 醛糖4 Fehling试验5 Benedict试验 还原糖能在碱性溶液中将二价铜离子还原成一价氧化亚铜 红色沉淀 而糖本身氧化成各种羟酸 非还原糖则无此特性 Fehling试剂 氢氧化钠 硫酸铜 酒石酸钾钠Benedict试剂 氢氧化钠 硫酸铜 柠檬酸钠 醛糖比较容易被氧化 甚至能被弱氧化剂氧化成酸 如Fehling试剂和Benedict试剂 而酮糖一般不易被氧化 只有在长时间或强氧化剂的作用下才被分解 6 Barfoed试验 区分单糖和还原二糖 在酸性溶液中 单糖和还原二糖的还原速度有明显差异 在弱酸性Barfoed试剂 巴弗德氏试剂 的作用下 煮沸时 单糖能将Cu2 还原成砖红色的氧化亚铜 时间约为3分钟 而还原二糖则需20分钟左右 当加热时间过长 非还原性二糖经水解后也能呈现阳性反应 观察 记录 冷却 冷却 冷却 请勿将含浓酸的溶液倒入废液缸 应倒入水池中 流水冲洗 边加热边观察 区分不同糖类的反应时间 实验内容 用上述六种糖鉴定实验检测已知六种糖 以水为阴性对照 其中蒽酮实