常见大肠杆菌感受态的特点和用途解析.doc

1:DH5a 菌株DH5a 是一种常用于 质粒克隆的菌株 。 E.coli DH5a在使用 pUC 系列质粒载体转化时,可与载体编码的 -半乳糖苷酶氨基端实现 -互补。可用于 蓝白斑筛选 鉴别重组菌株。基因型:F-, 80dlacZM15, (lacZYA-argFU169, deoR , recA1, endA1, hsdR17(rk-, mk+, phoA , supE44, -, thi-1, gyrA96, relA12:BL21(DE3 菌株该菌株用于 高效表达 克隆于含有噬菌体 T7启动子的表达载体(如 pET 系列的基因。 T7噬菌体 RNA 聚 合酶位于 噬菌体 DE3区,该区整合于 BL21的染色体上。 该菌适合表达非毒性蛋白 。基因型:F-, ompT , hsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE33:BL21(DE3 pLysS菌株该菌株含有质粒 pLysS ,因此具有 氯霉素抗性 。 PLysS 含有表达 T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的 背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。 该菌适合表达毒性蛋白 和非毒性蛋白。基因型:F-, ompThsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE3, pLysS , Camr4:JM109菌株该菌株在使用 pUC 系列质粒载体进行 DNA 转化或 用 M13 phage载体进行转染 时,由于载体 DNA 产生的 LacZa 多肽和 JM09编码的 LacZM15进行 -互补 ,从而显示 -半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重 组体菌株基因型 :recA1, endA1, gyrA96, thi -1, hsdR17, supE44, relA1, (lac -proAB /FtraD36, proAB+, lacIq , lacZM155:TOP10菌株该菌株适用于 高效的 DNA 克隆和质粒扩增 ,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。基因型:F- , m crA(mrr-hsd RMS-mcrBC, 80 , lacZM15, lac 74, recA1 ,ara139(ara-leu7697, galU , galK , rps , (Strr endA1, nupG6:HB101菌株该菌株遗传性能稳定,使用方便, 适用于各种基因重组实验基因型:supE44, hsdS20(rB-mB - , recA13, ara -14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, leuB6, thi-17:M110或 SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有 Dam 甲基化酶和 Dcm 甲基化酶 , 前者可以在 GATC 序列中腺嘌呤 N-6位上引 入甲基,后者在 CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生 dam,dcm , 从而受到甲基化的影响 .部分限制性内切酶对甲基化的 DNA 不能切割,如 FbaI 和 MboI 等,一般生物公司提供的内切酶说明中均 有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如 XbaI, BclI等。而且甲基化只发生在特定序列, 以 XbaI 为例,只有在位点序列旁出现 GA 或 TC ,该 XbaI 位才会被甲基化。而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:(1选用上述酶的同功酶,如 Sau3AI , DNA 识别切割位点与 MboI 相同;但不受甲基化影响;(2 利用甲基化酶缺失的受体细胞进行 DNA 的制备,如 E.coli JM110和链霉菌等,前者 Dam 和 Dcm 甲 基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的 DNA 就能被上述酶切割。 8:E.coli JM110要排除 dam,dcm 甲基化的影响,需要用特定的 dam-,dcm-的菌株,如 JM110如果由 JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株 产生的质粒,则不会被甲基化 .各种感受态细胞的区别用途特征Xl1-Blue 菌株基因型:endA1 gyrA96(nalR thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 FTn10 proAB+ lacIq (lacZM15 hsdR17(rK- mK+。特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途:分子克隆和质粒提取。BL21(DE3菌株基因型:F ompT gal dcmlonhsdSB(rB- mB- (DE3 lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5。特点:该菌株用于以 T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。 T7噬菌体 RNA 聚合酶 基因的表达受控于 噬菌体 DE3区的 lacUV5启动子,该区整合于 BL21的染色体上。该菌适合于非毒性 蛋白的表达。用途:蛋白质表达。BL21(DE3ply菌株基因型:F- ompT gal dcmlonhsdSB(rB- mB- (DE3 pLysS(cmR。特点:该菌株带有 pLysS ,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达 T7溶菌酶的基因, T7溶菌酶能够降低目的 基因的背景表达水平,但不干扰 IPTG 诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途:蛋白质表达DH5菌株基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoRnupG 80dlacZM15 (lacZYA-argFU169, hsdR17(rK-, 特点:一种常用于质粒克隆的菌株。其 80dlacZM15基因的表达产物与 pUC 载体编码的 -半乳糖苷酶 氨基端实现 互补,可用于蓝白斑筛选。 recA1和 endA1的突变有利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ (lac-proAB e14- F traD36 proAB+ lacIq lacZM15hsdR17(rK-mK+。特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达 , 可用于 M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH10B 菌株基因型:F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC 80dlacZM15 lacX74 endA1 recA1 deoR (ara,leu7697 araD139galUgalKnupGrpsL -The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。host for pUC and other -complementation vectors; pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues, useful for plasmid rescue procedures。ELECTROMAX DH10B T1 CELLS说明:DH10B 细胞是高转化效率的 E. coli,可以完美应用于大多数实验应用。DH10B 基因型具有以下特点:? lacZM15 用于重组克隆的蓝 /白斑筛选? 消除了 mcrA 、 mcrBC 、 mrr 和 hsdRMS 限制系统,允许构建更多具有代表性的基因组文库 (1,2? endA1突变,可以增加质粒产量和数量? 高效率转化大小为 150 kb的质粒,用于产生 cDNA 或基因组文库DH10B? 可以表达 tonA 的基因型, tonA 能够提供对 T1和 T5噬菌体感染的抗性 (DH10B? T1R。DH10B? 的基因型 :F mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC 80lacZM15 lacX74 recA