药物分析-第十三章-2

,一、结构与性质关系分析,二、鉴别试验,目录,三、特殊杂质检查,四、含量测定,一、结构与性质关系分析,结构通式,药典常用药物结构,理化性质概述,【相关链接】,青霉素类药物,头孢类药物,一、结构与性质关系分析,结构通式,6-氨基青霉烷酸（6-APA）,7-氨基头孢霉烷酸（7-ACA）,青霉素类药物,头孢菌素类药物,一、结构与性质关系分析,阿莫西林（amoxicillin）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,阿莫西林钠（amoxicillin sodium）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,青霉素钠（benzylpenicillin sodium）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,青霉素钾（benzylpenicillin potassium）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,理化性质概述,青霉素V钾（phenoxymethylpenicillin potassium）,一、结构与性质关系分析,氨苄西林（ampicillin）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,哌拉西林（piperacillin）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,氨苄西林钠（ampicillin sodium）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,哌拉西林钠（piperacillin sodium）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,氯唑西林钠（cloxacillin sodium）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,苄星青霉素（benzathine benzylpenicillin）,青霉素类药物结构,一、结构与性质关系分析,青霉素类药物结构,磺苄西林钠(sulbenicillin sodium),一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢氨苄（cefalexin）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢羟氨苄（cefadroxil）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢克洛（cefaclor）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢拉定（cefradine）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢地尼（cefdinir）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢噻吩钠（cefalotin sodium）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢替唑钠（ceftezole sodium）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢硫脒（cefathiamidine）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢呋辛酯（cefuroxime axetil）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢曲松钠（ceftriaxone sodium）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢噻肟钠（cefotaxime）,一、结构与性质关系分析,头孢类药物结构,头孢呋辛钠（cefuroxime sodium）,-内酰胺类理化性质概述,性状,酸性及溶解性,旋光性,紫外吸收,-内酰胺环的不稳定性,性状,白色、类白色或微黄色粉末或结晶性粉末,酸性及溶解性,游离羧基具有酸性，多数pKa介于2.52.8可与无机碱或有机碱成盐。其钠盐或钾盐易溶于水，遇酸可析出白色沉淀；有机碱盐难溶于水，易溶于有机溶剂,旋光性,青霉素类药物具有3个手性碳（C3、C5、C6）头孢菌素类药物具有2个手性碳(C6、C7)均有旋光性，可用于定性和定量。,紫外吸收,6-APA母核不具有紫外吸收，当取代基具有苯环等共轭结构时，可产生紫外吸收；7-ACA结构中具有O=C-N-C=C共轭结构，母核具有紫外吸收。,-内酰胺环的不稳定性,与酸、碱、-内酰胺酶、金属离子等作用发生环结构的水解或重排，导致-内酰胺环破坏，药物失去活性。头孢菌素类相对稳定 拓展提高-内酰胺类抗生素的不稳定性反应,【相关链接】,酸、碱、青霉素酶、羟胺、金属离子（如铜、铅、汞、银）、氧化剂等均可使-内酰胺环破坏，发生水解和分子重排等降解反应，从而失去抗菌活性。,-内酰胺类抗生素的不稳定性反应,反应式,下一张,返 回,二、鉴别试验,（一）呈色反应,（二）紫外光谱,（三）红外光谱,（四）色谱方法,（五）钠、钾盐鉴别反应,二、鉴别试验,1.羟肟酸铁反应,2.肽键特征反应,3.其它呈色反应,（一）呈色反应,1.羟肟酸铁反应,羟胺可使青霉素或头孢菌素在碱性条件下开环，生成羟肟酸，进一步与高铁离子生成有色配合物。 中国药典（2010年版）哌拉西林、头孢哌酮、磺苄西林钠等的鉴别仍旧采用此反应。,反应式,方法,方法：,取本品约10mg，加水2ml与盐酸羟胺试液3ml，振摇溶解后，放置5分钟，加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显红棕色。,返 回,2.肽键特征反应,头孢氨苄、头孢拉定等结构中具有氨基苄，取代基的-CONH-具有典型的-氨基酸性质，可发生双缩脲和茚三酮反应中国药典（2010年版）对头孢克洛、头孢拉定采用TLC鉴别时，显色试剂即采用茚三酮。,3.其它呈色反应,侧链含有酚羟基时，可发生与三氯化铁试液的反应如头孢羟氨苄,二、鉴别试验,（二）紫外光谱,7-ACA结构中有共轭体系，具有紫外特征吸收，可直接进行紫外分光光度法鉴别。,示例：头孢替唑钠的鉴别,中国药典2005年版头孢替唑钠的鉴别,方法：取本品，加水制成每1ml中含16g的溶液，在272nm的波长处应有最大吸收。,二、鉴别试验,（三）红外光谱,-内酰胺环具有侧链仲酰胺氨基具有中国药典（2010年版）对本类药物的鉴别几乎均采用红外光谱法,二、鉴别试验,（四）色谱方法,薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）目前广泛应用于本类药物的鉴别比较供试品与对照品主斑点颜色、位置（Rf）或主峰保留时间（tR），要求一致,二、鉴别试验,（五）钠、钾盐鉴别反应,钾盐或钠盐可利用钾盐或钠盐的特征反应鉴别头孢曲松钠钠盐鉴别（1）青霉素V钾钾盐鉴别（1）。,三、特殊杂质检查,（一）高分子聚合物检查,（二）有关物质和异构体检查,（三）细菌内毒素检查,（四）热原检查,（五）其他特殊检查,（一）高分子聚合物检查,青霉素在使用过程中需进行皮试 主要致敏物质是 青霉噻唑多肽、青霉噻唑蛋白 以及药物自身的 高分子聚合物。,三、特殊杂质检查,不专门列入中国药典（2010年版）检查,内源性杂质检查的重点,【实例分析】阿莫西林聚合物的检查,中国药典（2010年版）规定头孢他啶、头孢曲松、头孢呋辛钠、头孢拉定、头孢噻肟、阿莫西林、青霉素V等药物应检查相关药物的聚合物 检查方法采用分子排阻色谱法，使用葡聚糖凝胶G-10为填充剂,阿莫西林聚合物的检查,色谱条件与系统适应性试验 对照溶液的制备 测定法,色谱条件与系统适应性试验,用葡聚糖凝胶G-10（40120m）为填充剂玻璃柱内径1.01.4cm柱高度3040cm以pH8.0磷酸盐缓冲液为流动相A，水为流动相B流速为每分钟1.5ml，检测波长为254nm。,色谱条件与系统适应性试验,分别以流动相A、B为流动相，取0.2mg/ml蓝色葡聚糖凝胶2000溶液100 200l注入液相色谱仪理论板数按蓝色葡聚糖2000峰计算均不低于500拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值应在0.931.07之间，,色谱条件与系统适应性试验,对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.931.07之间。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液100 200l，连续进样5次，峰面积的相对偏差应不大于5.0。,返 回,对照溶液的制备,取青霉素对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液,返 回,高聚物测定法,取本品约0.2g，精密称定，置10ml量瓶中，加2碳酸钠溶液4ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，立即精密量取100 200l注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图。另精密量取对照溶液100 200l注入色谱仪，以流动相B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算结果除以10，含阿莫西林聚合物以阿莫西林计，不得过0.15（阿莫西林青霉素110）,返 回,三、特殊杂质检查,（二）有关物质和异构体检查,半合成方法制备制备中易引入原料及有关物质，并可能生成异构体 中国药典（2010年版）对有关物质和异构体的检查均采用色谱法 ，多用高效液相色谱法,【实例分析】头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查,头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查,有关物质 异构体,分析：,头孢呋辛酯中的有关物质是指头孢呋辛酯A、B异构体、3-异构体和两个E异构体相对保留时间分别是1.0、0.9、1.2及1.7和2.1。,头孢呋辛酯中有关物质,供试品溶液：用流动相制成每1ml含0.50mg的溶液对照溶液：精密量取1ml供试品溶液，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀照含量项下的色谱条件（HPLC法，十八烷基键合相硅胶色谱柱，0.2mol/L磷酸二氢铵-甲醇流动相，检测波长278nm），取对照溶液20l，注入色谱仪，调节检测灵敏度，使两主成分峰中任一主成分峰的峰高约为满量程的25，精密量取供试品溶液和对照溶液各20l，分别注入色谱仪，记录色谱图至头孢呋辛酯A异构体峰保留时间的3.5倍。,头孢呋辛酯中有关物质,供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰的面积，两个E异构体峰面积之和不得大于对照溶液两个主峰面积之和（1.0）3-异构体峰面积不得大于对照溶液两个主峰面积之和的1.5倍（1.5）其它单个杂质峰面积不得大于对照溶液两个主峰面积之和的0.5倍(0.5）所有杂质峰面积的和不得大于对照溶液两个主峰面积之和的3倍（3.0）。,返 回,头孢呋辛酯中异构体,取本品适量，照含量测定项下方法试验，供试品溶液色谱图中，头孢呋辛酯A异构体峰面积与头孢呋辛酯A、B异构体峰面积和之比为0.480.55。异构体检查主要通过控制异构体A在异构体A、B的比例来控制和反映药品质量,返 回,三、特殊杂质检查,（三）细菌内毒素检查,内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的构成成分，具有致热性、引起血液粒细胞下降、激活凝血系统、血压下降、引起淋巴细胞有丝分裂等生物活性。在GMP条件下，内毒素是主要的热原物质，控制内毒素可控制热原。 内毒素量用内毒素单位（EU）表示。细菌内毒素检查鲎试剂检查法,三、特殊杂质检查,（四）热原检查,热原系指某些药品中含有的能引起体温升高的杂质，主要来源于细菌的内毒素。如氨苄西林钠、氯唑西林钠杂质检查热原。中国药典（2010年版）热原检查法（附录XI D）采用家兔体温升高试验，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。,三、特殊杂质检查,（五）其他特殊检查,1.抽针试验 2.水分,抽针试验,示例：苄星青霉素抽针试验： 取本品1.0g，加水4ml，摇匀。用装有 号针头的注射器抽取，应能顺利通过，不得阻塞。,水分,水分的存在会影响药效，甚至引起药物的霉变 检查方法可采用费休氏法或甲苯法,四、含量测定,概 述,【实例分析】头孢羟氨苄的含量测定,四、含量测定,概 述,中国药典（2010年版）多采用高效液相色谱法。HPLC不但可快速、高效测定药物含量，更能够将供试品中可能存在的降解产物、原料等杂质分离及定量。,四、含量测定,【实例分析】头孢羟氨苄的含量测定,色谱条件与系统适应性试验,测定法,头孢羟氨苄片含量测定,分析,色谱条件与系统适应性试验,以十八烷基键合相硅胶为填充剂以0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇（982）为流动相；检测波长为230nm头孢羟氨苄对照品和7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸对照品加流动相溶解并稀释成每1ml含头孢羟氨苄0.3mg及7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸0.1mg的混合溶液取10l注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢羟氨苄与7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸的保留时间比值不应小于5.0。,头孢羟氨苄测定法,取本品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml约含0.3mg的溶液，精密量取10l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取头孢羟氨苄对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中头孢羟氨苄的含量。,头孢羟氨苄片含量测定,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于头孢羟氨苄0.15g），置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，