传染病项目SOP

精品文档 1欢迎下载1 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗原定量测定乙型肝炎病毒表面抗原定量测定 第 1 页 共 62 页 一 目的 一 目的 规范乙型肝炎病毒表面抗原测定的标准操作程序 确保乙型肝炎病毒表 面 抗原测定的结果准确有效 二 适用范围 二 适用范围 在 AutoLumo A2000 化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒 表面抗原 三 临床意义三 临床意义 乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病 据估计全球范围内目前 大约有 3 亿乙肝病毒携带者 感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急 慢性 肝 脏疾病 流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系 HBsAg 是乙肝病毒颗粒 HBV 的外壳成分 为大小不一的多肽 感染 乙 型肝炎病毒后 机体会产生各种不同模式的抗原 抗体血清学免疫应答反应 通过检测这些标志物 不仅可以诊断感染 而且还可以判断疾病的进程和预 后 HBsAg 是 HBV 感染后第一个标志物 是提示样本是否有潜在传染性的最 好的间接指标 四 四 精品文档 2欢迎下载2 方方 法法 原原 理理 本产品采用双抗体夹心法原理进行检测 用抗 HBs 抗体包被磁微粒 用 辣根过氧化物酶标记的抗 HBs 抗体制备酶结合物 通过免疫反应形成抗体 抗原 抗体 酶复合物 该复合物催化发光底物发出光子 发光强度与 HBsAg 含量成正比 五 五 标标 本本 的的 采采 集集 与与 处处 理理 5 1 采用正确医用技术收集血清 血浆样本 推荐对于使用普通管采血的样 本 离心前样本应 37 孵育至少 1h 对于使用促凝管采血的样本 离 心前样本应 37 孵育至少 0 5h 离心条件 10000g min 10min 对于 使 用抗凝管采血的样本 离心条件 10000g min 10min 抗凝管推荐使 用 肝素作为抗凝剂 避免使用枸橼酸钠和 EDTA 抗凝剂 精品文档 3欢迎下载3 5 2 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果 应离心除去 并确定样 本未变质方可使用 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗原定量测定乙型肝炎病毒表面抗原定量测定 第 2 页 共 62 页 5 3 溶血或脂血的样本不能用于测定 5 4 样本收集后在室温放置不可超过 8 小时 如果不在 8 小时内检测需将样 本放置在 2 8 的冰箱中 若需 48 小时以上保存或运输 则应冻存于 20 以下 避免反复冻融 使用前恢复到室温 轻轻摇动混匀 5 5 避 免 反 复 冻 融 使 用 前 恢 复 精品文档 4欢迎下载4 到 室 温 轻 轻 摇 动 混 匀 六 六 标标 本本 拒拒 收收 标标 准准 1 严 重 溶 血 脂 血 2 精品文档 5欢迎下载5 标 本 标 识 不 明 七 七 仪仪 器器 与与 材材 料料 7 1 仪 器 A u t o L u m o A 2 精品文档 6欢迎下载6 0 0 0 化 学 发 光 检 测 仪 7 2 试 剂 A u t o L u m o A 2 0 0 0 精品文档 7欢迎下载7 专 用 乙 型 肝 炎 病 毒 表 面 抗 原 试 剂 7 2 1 试 剂 准 备 本 试 剂 为 即 用 型 试 精品文档 8欢迎下载8 剂 可 以 直 接 放 在 仪 器 上 7 2 2 试 剂 盒 于 2 8 储 存 有 效 期 1 2 精品文档 9欢迎下载9 个 月 7 2 3 试 剂 盒 应 防 止 冷 冻 避 免 强 光 照 射 7 2 4 试 剂 盒 开 启 精品文档 10欢迎下载10 使 用 后 2 8 保 存 可 使 用 1 个 月 7 2 5 试 剂 盒 可 适 应 1 周 内 常 精品文档 11欢迎下载11 温 运 输 运 输 过 程 中 应 轻 拿 轻 放 避 免 重 压 防 止 雨 雪 淋 湿 和 阳 光 曝 晒 精品文档 12欢迎下载12 7 2 6 试 剂 机 载 稳 定 性 7 2 6 1 试剂包 磁微粒混悬液 酶结合物 竖直向上存放 在 2 10 C 环境下冷藏保存 2 小时后 才可上机使 用 首次使用后 机载或在 2 10 C 环境下稳定 期 为 28 天 7 2 6 2 校准品开瓶后保存于2 8 C 稳定期可维持1个月 若需使用更长时间 应根据需要进行分装 于 20 冻存 可以保存2个月 但应避免反复冻融 八 检验方法八 检验方法 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗原定量测定乙型肝炎病毒表面抗原定量测定 生效日期 20151008 精品文档 13欢迎下载13 第 3 页 共 62 页 8 1 消耗品检查 8 1 1 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足 8 1 2 参考相应的仪器系统操作说明 8 2 试剂包装载 8 2 1 试剂包首次上机前 轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的 成 份 避免产生气泡 不要倒转已经打开的试剂包 8 2 2 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数 8 2 3 如果特殊情况下仪器无法识别条码 可以手工输入 8 2 4 参考相应的仪器系统操作说明 8 3 测试 8 3 1 将样本容器放置在仪器配套样本架中 每次测试样本量为 150 l 8 3 2 装载样本架 在仪器软件界面中输入样本信息 8 3 3 选择 运行 开始测试 系统自动进行试验操作 8 3 4 参考相应的仪器系统操作说明 8 4 定标 8 4 1 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数 8 4 2 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡 可以手工输入 8 4 3 将校准品转移至样本容器 放置在仪器配套样本架中 精品文档 14欢迎下载14 8 4 4 装载样本架 在仪器软件界面中输入定标信息 8 4 5 选择 运行 开始测试 生成定标曲线 8 4 6 定标曲线有效期为 28 天 8 4 7 参考相应的仪器系统操作说明 8 4 8 出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成 8 4 8 1 质控结果经重复测定后仍然超出范围 8 4 8 2 试剂盒或发光底物液的批号更改 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗原定量测定乙型肝炎病毒表面抗原定量测定 第 4 页 共 62 页 8 4 8 3 超出定标曲线的有效期限 8 4 8 4 仪器重要部件更换或维修 8 5 质控 8 5 1 使用至少两个分析物水平的质控品进行质控 8 5 2 出现以下情况需要进行质控 8 5 2 1 测试试剂盒使用超过 24 小时 8 5 2 2 更换新的试剂盒 8 5 2 3 重新生成定标曲线 8 5 2 4 停机 精品文档 15欢迎下载15 8 5 3 各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围 以确 保合适的测试性能 8 5 4 质控值应落在规定的范围内 如出现失控 应采取纠正措施 8 6 稀释 8 6 1 使用手工稀释或仪器自动稀释功能 仪器自动稀释的最大比例为 1 100 8 6 2 手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释 将得到的检测结果 乘以稀释倍数计算最终结果 8 6 3 选择仪器自动稀释功能 可以得到准确的检测结果 参考相应的 仪 器系统操作说明以及帮助系统 8 6 4 稀释后的样本含量应不低于 0 05IU ml 8 7 结 果 计 算 选择适当的曲线拟合方式 本试剂盒推荐采用四参数拟合方式 以 校 准品浓度值为 x 轴 以校准品发光强度 log 值为 y 轴建立定标曲线 根 据 精品文档 16欢迎下载16 待测样本的发光强度值回算相应的浓度值 仪器自动操作系统可通过存 储 的定标曲线以及样本测试得到的发光值自动计算样本测试结果 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗原定量测定乙型肝炎病毒表面抗原定量测定 第 5 页 共 62 页 九 参考范围九 参考范围 检测 1040 例样本 用 ROC 曲线方法确定正常参考值为 0 05IU ml 建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值 本试剂盒 仅作为诊断的辅助手段之一 供临床医生参考 十 十 检检 验验 结结 果果 的的 解解 释释 10 1 用本试剂盒检测结果浓度值为 0 04 0 06IU ml 的弱反应性可疑样本 建议复孔重新测定 如果双孔复查浓度值均小于 0 05IU ml 结果判 为 精品文档 17欢迎下载17 阴性 如果单份或双份测定不低于 0 05IU ml 结果判为有反应性 有 条件的实验室建议做中和确证实验 同时动态观察 10 2 本试剂盒测定范围为 0 05 250IU ml 浓度值大于 250IU ml 的样本 其结果是通过定标曲线外延得出的计算结果 如果要获得其更准确的 结 果 需对样本进行稀释后重新测定 推荐稀释比例为 1 500 使用系 统 通用样品稀释液进行稀释 稀释后仍超出线性范围的建议手工稀释并 增 大稀释比例 10 3 由于方法学或免疫特异性等原因 使用不同生产商的试剂对同一份样 本进行检测可能会得到不同的检测结果 因此不同试剂检测所得结果 不应直接相互比较 以免造成错误的医学解释 建议实验室在检测报 告中注明所用试剂特征 系列监测中 如果改变试剂类型 则应进行 额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线 值 十十 一 一 检检 验验 方方 法法 精品文档 18欢迎下载18 的的 局局 限限 性性 11 1 本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一 临床诊断应与临床检查 病 史 及其他检测相结合 11 2 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果 此类样本不适 合 用本试剂盒进行检测 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗原定量测定乙型肝炎病毒表面抗原定量测定 第 6 页 共 62 页 11 3 溶血 脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果 十十 二 二 产产 品品 性性 能能 特特 征征 12 1 阴性参考品符合率 检测国家阴性参考品 20 份 不出现假阳性 精品文档 19欢迎下载19 12 2 阳性参考品符合率 检测国家阳性参考品 3 份 不出现假阴性 12 3 最低检出量 用国家灵敏度参考品进行检测 符合相应参考品要求 12 4 精密性 10 孔平行检测浓度值为 0 5IU ml 样本 CV 15 0 10 孔平行检测浓度值为 1 5IU ml 样本 CV 10 0 12 5 线性 在 0 05IU ml 250IU ml 范围内 线性相关系数 r 不低于 0 9900 12 6 分析特异性 与抗 HIV 1 2 抗 HCV 抗 HAV 等病毒性抗体无 交叉反应 2 5mg ml 血红蛋白 200mg L 胆红素 20g L 甘油三酯 和 500mg dl 胆固醇对检测结果无显著干扰 十三 参考文献十三 参考文献 1 Lok ASE McMahon BJ AASLD practice guidelines chronic hepatitis B Hepatology 2004 34 1225 1241 2 Lavanchy D Hepatitis B virus epidemiology disease burden treatment and current and emerging prevention and control measures J Viral Hepat 2004 11 97 107 3 巴德年 1998 年 当代免疫学技术与应用 北京医科大学中国协和医科大学 联 合出版社 精品文档 20欢迎下载20 4 陶义训 1997 年第二版 免疫学与免疫学检验 人民卫生出版社 5 中华医学会传染病与寄生虫病学分会 肝病学分会 病毒性肝炎防治方案 中华传染病杂志 2001 19 56 62 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗体定量测定乙型肝炎病毒表面抗体定量测定 第 7 页 共 62 页 1 目的 目的 规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序 确保乙型肝炎病毒表面 抗体测定的结果准确有效 2 适用范围 适用范围 在 AutoLumo A2000 化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒 表面抗体 三 临床意义三 临床意义 乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病 据估计全球范围内目 前 大约有 3 亿乙肝病毒携带者 感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急 慢性 肝 脏疾病 流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系 精品文档 21欢迎下载21 表面抗体 Anti HBs 是一种保护性抗体 是乙肝感染后痊愈或趋向治 愈 的象征 全程 3 针 疫苗接种结束后 1 个月检测保护性表面抗体 Anti HBs 的浓度 能够判定免疫效果 关于表面抗体与保护力的关系 世界标准未 完 全统一 目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值 10mIU ml 就有足够的 保 护作用 高危人群表面抗体浓度值 100mIU ml 具有足够的保护作用 肝 移植 血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值 每次检测值 100mIU ml 为宜 四 四 方方 法法 原原 理理 本产品采用双抗原夹心法原理进行检测 用表面抗原包被磁微粒 用辣 根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物 通过免疫反应形成抗原 抗体 酶 标抗原复合物 该复合物催化发光底物发出光子 发光强度与表面抗体的含 量成正比 五 五 标标 精品文档 22欢迎下载22 本本 的的 采采 集集 与与 处处 理理 5 1 采用正确医用技术收集血清 血浆样本 推荐对于使用普通管采血的样 本 离心前样本应 37 孵育至少 1h 对于使用促凝管采血的样本 离 心前样本应 37 孵育至少 0 5h 离心条件 10000g min 10min 对于 使 用抗凝管采血的样本 离心条件 10000g min 10min 抗凝管推荐使 用 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗体定量测定乙型肝炎病毒表面抗体定量测定 第 8 页 共 62 页 肝素钠作为抗凝剂 避免使用枸橼酸钠和 EDTA 抗凝剂 5 2 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果 应离心除去 并确定 样 本未变质方可使用 5 3 溶血或脂血的样本不能用于测定 5 4 样本收集后在室温放置不可超过 8 小时 如果不在 8 小时内检测需将样 精品文档 23欢迎下载23 本放置在 2 8 的冰箱中 若需 48 小时以上保存或运输 则应冻存于 20 以下 避免反复冻融 使用前恢复到室温 轻轻摇动混匀 六 六 标标 本本 拒拒 收收 标标 准准 1 严 重 溶 血 脂 血 2 标 本 标 识 不 明 精品文档 24欢迎下载24 七 七 仪仪 器器 与与 材材 料料 7 1 仪器 适用于 AutoLumo A2000 化学发光检测仪 7 2 试 剂 A u t o L u m o A 2 0 0 0 专 用 乙 精品文档 25欢迎下载25 型 肝 炎 病 毒 表 面 抗 体 试 剂 7 2 1 试 剂 准 备 本 试 剂 为 即 用 型 试 剂 可 以 精品文档 26欢迎下载26 直 接 放 在 仪 器 上 7 2 2 试 剂 盒 于 2 8 储 存 有 效 期 1 2 个 月 精品文档 27欢迎下载27 7 2 3 试 剂 盒 应 防 止 冷 冻 避 免 强 光 照 射 7 2 4 试 剂 盒 开 启 使 用 后 精品文档 28欢迎下载28 2 8 保 存 可 使 用 1 个 月 7 2 5 试 剂 盒 可 适 应 1 周 内 常 温 运 输 精品文档 29欢迎下载29 运 输 过 程 中 应 轻 拿 轻 放 避 免 重 压 防 止 雨 雪 淋 湿 和 阳 光 曝 晒 7 2 精品文档 30欢迎下载30 6 试 剂 机 载 稳 定 性 7 2 6 1 试剂包 磁微粒混悬液 酶结合物 竖直向上存放 在 2 10 C 环境下冷藏保存 2 小时后 才可上机使 用 首次使用后 机载或在 2 10 C 环境下稳定 期 为 28 天 7 2 6 2 校准品开瓶后保存于2 8 C 稳定期可维持1个月 若 需使用更长时间 应根据需要进行分装 于 20 冻 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗体定量测定乙型肝炎病毒表面抗体定量测定 第 9 页 共 62 页 存 可以保存2个月 但应避免反复冻融 八 检验方法八 检验方法 8 1 消耗品检查 精品文档 31欢迎下载31 8 1 1 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足 8 1 2 参考相应的仪器系统操作说明 8 2 试剂包装载 8 2 1 试剂包首次上机前 轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的 成 份 避免产生气泡 不要倒转已经打开的试剂包 8 2 2 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数 8 2 3 如果特殊情况下仪器无法识别条码 可以手工输入 8 2 4 参考相应的仪器系统操作说明 8 3 测试 8 3 1 将样本容器放置在仪器配套样本架中 每次测试样本量为 50 l 8 3 2 装载样本架 在仪器软件界面中输入样本信息 8 3 3 选择 运行 开始测试 系统自动进行试验操作 8 3 4 参考相应的仪器系统操作说明 8 4 定标 8 4 1 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数 8 4 2 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡 可以手工输入 8 4 3 将校准品转移至样本容器 放置在仪器配套样本架中 8 4 4 装载样本架 在仪器软件界面中输入定标信息 8 4 5 选择 运行 开始测试 生成定标曲线 8 4 6 定标曲线有效期为 28 天 精品文档 32欢迎下载32 8 4 7 参考相应的仪器系统操作说明 8 4 8 出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗体定量测定乙型肝炎病毒表面抗体定量测定 第 10 页 共 62 页 8 4 8 1 质控结果经重复测定后仍然超出范围 8 4 8 2 试剂盒或发光底物液的批号更改 8 4 8 3 超出定标曲线的有效期限 8 4 8 4 仪器重要部件更换或维修 8 5 质控 8 5 1 使用至少两个分析物水平的质控品进行质控 8 5 2 出现以下情况需要进行质控 8 5 2 1 测试试剂盒使用超过 24 小时 8 5 2 2 更换新的试剂盒 8 5 2 3 重新生成定标曲线 8 5 2 4 停机 8 5 3 各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围 以确 保 合适的测试性能 精品文档 33欢迎下载33 8 5 4 质控值应落在规定的范围内 如出现失控 应采取纠正措施 8 6 稀释 8 6 1 使用手工稀释或仪器自动稀释功能 仪器自动稀释的最大比例为 1 100 8 6 2 手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释 将得到的检测结果 乘以稀释倍数计算最终结果 8 6 3 选择仪器自动稀释功能 可以得到准确的检测结果 参考相应的 仪 器系统操作说明以及帮助系统 8 6 4 稀释后的样本含量应不低于 5mIU ml 8 7 结 果 计 算 选择适当的曲线拟合方式 本试剂盒推荐采用四参数拟合方式 以校 准品浓度值为 x 轴 以校准品发光强度 log 值为 y 轴建立定标曲线 根据 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗体定量测定乙型肝炎病毒表面抗体定量测定 生效日期 20151008 精品文档 34欢迎下载34 第 11 页 共 62 页 待测样本的发光强度值回算相应的浓度值 仪器自动操作系统可通过存储 的定标曲线以及样本测试得到的发光值自动计算样本测试结果 九 参考范围九 参考范围 正常参考值 10mIU ml 建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值 本试剂盒 仅作为诊断的辅助手段之一 供临床医生参考 十 十 检检 验验 结结 果果 的的 解解 释释 10 1 用本试剂盒检测结果浓度值为 8 0 12 0 mIU ml 的弱反应性可疑样 本 建议双份重新测定 如果双份复查浓度值均小于 10 mIU ml 结 果 判为阴性 如果单份或双份测定不低于 10 mIU ml 结果判为阳性 同 时建议动态观察 10 2 本试剂盒测定范围为 5 1000mIU ml 浓度值大于 1000mIU ml 的样本 精品文档 35欢迎下载35 其结果是通过定标曲线外延得出的计算结果 如果要获得其更准确的 结 果 需对样本进行稀释后重新测定 推荐稀释比例为 1 100 使用系 统 通用样品稀释液进行稀释 稀释后仍超出线性范围的建议手工稀释并 增 大稀释比例 10 3 由于方法学或免疫特异性等原因 使用不同生产商的试剂对同一份样 本进行检测可能会得到不同的检测结果 因此不同试剂检测所得结果 不应直接相互比较 以免造成错误的医学解释 建议实验室在检测报 告中注明所用试剂特征 系列监测中 如果改变试剂类型 则应进行 额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线 值 十十 一 一 检检 验验 方方 法法 的的 局局 限限 性性 11 1 本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一 临床诊断应与临床检查 病 精品文档 36欢迎下载36 史及其他检测相结合 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒表面抗体定量测定乙型肝炎病毒表面抗体定量测定 第 12 页 共 62 页 11 2 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果 此类样本不适 合 用本试剂盒进行检测 11 3 溶血 脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果 十二 产品性能特征十二 产品性能特征 12 1 符合率 与 SFDA 批准的试剂平行检测 1024 份临床样本 阴性符合率 99 58 阳性符合率 99 02 总符合率 99 41 12 2 最低检出限 10mIU ml 12 3 精密性 10 孔平行检测浓度值为 10mIU ml 样本 CV 15 0 10 孔 平行检测浓度值为 100mIU ml 样本 CV 10 0 12 4 线性 在 5 1000mIU ml 范围内 线性相关系数 r 不低于 0 9900 12 5 分析特异性 与抗 HIV 1 2 抗 HCV 抗 HAV 等病毒性抗体无交叉 反应 2 5mg ml 血红蛋白 200mg L 胆红素 10g L 甘油三酯和 500mg dl 胆固醇对检测结果无显著干扰 12 6 HOOK 效应 测定 HBsAb 浓度值为 30000mIU ml 的样本 未出现 HOOK 精品文档 37欢迎下载37 效应引起的假阴性结果 十三 参考文献十三 参考文献 1 Lok ASE McMahon BJ AASLD practice guidelines chronic hepatitis B Hepatology 2004 34 1225 1241 2 Lavanchy D Hepatitis B virus epidemiology disease burden treatment and current and emerging prevention and control measures J Viral Hepat 2004 11 97 107 3 巴德年 1998 年 当代免疫学技术与应用 北京医科大学中国协和医科大学 联 合出版社 4 陶义训 1997 年第二版 免疫学与免疫学检验 人民卫生出版社 5 中华医学会传染病与寄生虫病学分会 肝病学分会 病毒性肝炎防治方案 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 e e 抗原抗原定量测定定量测定 第 13 页 共 62 页 1 目的 目的 规范乙型肝炎病毒 e 抗原测定的标准操作程序 确保乙型肝炎病毒 e 抗原 测定的结果准确有效 精品文档 38欢迎下载38 2 适用范围 适用范围 在 AutoLumo A2000 化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒 e 抗原 三 临床意义三 临床意义 乙型肝炎病毒 e 抗原 HBeAg 一般通称 e 抗原 它来源于乙型肝炎病 毒的核心 是核心抗原的亚成分 或是核心抗原裂解后的产物 是可溶性蛋 白 1 当核心抗原裂解时 可溶性蛋白部分 即 e 抗原 就溶于血清中 存 在于血液循环中 有研究表明 在 PegIFN 2a 治疗过程中 HBeAg 水平对乙 肝治疗应答有较好的预测价值 2 许多专家关注聚乙二醇干扰素治疗过程中 HBeAg 或 HBsAg 浓度的动态变化 认为这种量的变化往往是抗原消失或血 清转换的前提 具有疗效预测作用 对于乙肝治疗过程中 HBeAg 和 HBsAg 浓度明显下降的患者应鼓励继续治疗 以争取获得更好的疗效 3 4 4 方方 法法 原原 理理 本产品采用双抗体夹心法原理进行检测 用抗 HBe 制备磁微粒 辣根 过 氧化物酶标记抗 HBe 制备酶结合物 通过免疫反应形成抗体 抗原 酶标抗 体 复合物 该复合物催化发光底物液发出光子 发光强度与 HBeAg 的含量成正 比 五 五 标标 精品文档 39欢迎下载39 本本 的的 采采 集集 与与 处处 理理 5 1 采用正确医用技术收集血清 血浆样本 推荐对于使用普通管采血的样 本 离心前样本应 37 孵育至少 1h 对于使用促凝管采血的样本 离 心 前样本应 37 孵育至少 0 5h 离心条件 10000g min 10min 对于使 用 抗凝管采血的样本 离心条件 10000g min 10min 抗凝管推荐使用肝 素钠作为抗凝剂 避免使用枸橼酸钠和 EDTA 抗凝剂 5 2 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果 应离心除去 5 3 严重溶血 脂血或浑浊的样本不能用于测定 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 e e 抗原抗原定量测定定量测定 第 14 页 共 62 页 5 4 样本收集后在室温放置不可超过 8 小时 如果不在 8 小时内检测需将样 本放置在 2 8 的冰箱中 若需 48 小时以上保存或运输 则应采用正 确 精品文档 40欢迎下载40 离心条件提取血清或血浆冻存于 20 以下 避免反复冻融 使用前恢 复 到室温 轻轻摇动混匀 六 六 标标 本本 拒拒 收收 标标 准准 1 严 重 溶 血 脂 血 2 标 本 标 识 不 明 精品文档 41欢迎下载41 七 七 仪仪 器器 与与 材材 料料 7 1 仪器 适用于 Lucy2 Lumo AutoLumo A2000 化学发光检测仪 7 2 试 剂 A u t o L u m o A 2 0 0 0 专 精品文档 42欢迎下载42 用 乙 型 肝 炎 病 毒 e 抗 原 试 剂 7 2 1 试 剂 准 备 本 试 剂 为 即 用 型 试 剂 可 精品文档 43欢迎下载43 以 直 接 放 在 仪 器 上 7 2 2 试 剂 盒 于 2 8 储 存 有 效 期 1 2 个 月 精品文档 44欢迎下载44 7 2 3 试 剂 盒 应 防 止 冷 冻 避 免 强 光 照 射 7 2 4 试 剂 盒 开 启 使 用 精品文档 45欢迎下载45 后 2 8 保 存 可 使 用 1 个 月 7 2 5 试 剂 盒 可 适 应 1 周 内 常 温 运 精品文档 46欢迎下载46 输 运 输 过 程 中 应 轻 拿 轻 放 避 免 重 压 防 止 雨 雪 淋 湿 和 阳 光 曝 晒 7 2 精品文档 47欢迎下载47 6 试 剂 机 载 稳 定 性 7 2 6 1 试剂包 磁微粒混悬液 酶结合物 竖直向上存 放 在 2 10 C 环境下冷藏保存 2 小时后 才可上机使 用 首次使用后 机载或在 2 10 C 环境下稳定 期 为 28 天 7 2 6 2 要进行分装 于 20 冻存 但应避免反复冻融 八 检验方法八 检验方法 8 1 消耗品检查 8 1 1 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足 8 1 2 参考相应的仪器系统操作说明 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 e e 抗原抗原定量测定定量测定 第 15 页 共 62 页 精品文档 48欢迎下载48 8 2 试剂包装载 8 2 1 试剂包首次上机前 轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的 成 分 避免产生气泡 不要倒转已经打开的试剂包 8 2 2 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数 8 2 3 如果特殊情况下仪器无法识别条码 可以手工输入 8 2 4 参考相应的仪器系统操作说明 8 3 测试 8 3 1 将样本容器放置在仪器配套样本架中 每次测试样本量为 50 l 8 3 2 装载样本架 在仪器软件界面中输入样本信息 8 3 3 选择 运行 开始测试 系统自动进行试验操作 8 3 4 参 考 相 应 的 仪 器 系 统 操 作 精品文档 49欢迎下载49 说 明 8 4 定标 8 4 1 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数 8 4 2 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡 可以手工输入 8 4 3 将校准品转移至样本容器 放置在仪器配套样本架中 8 4 4 装载样本架 在仪器软件界面中输入定标信息 8 4 5 选择 运行 开始测试 生成定标曲线 8 4 6 定标曲线有效期为 28 天 8 4 7 参考相应的仪器系统操作说明 8 4 8 出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成 8 4 8 1 质控结果经重复测定后仍然超出范围 8 4 8 2 试剂盒或发光底物液的批号更改 8 4 8 3 超出定标曲线的有效期限 8 4 8 4 仪器重要部件更换或维修 8 5 质控 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 e e 抗原抗原定量测定定量测定 第 16 页 共 62 页 精品文档 50欢迎下载50 8 5 1 使用至少两个分析物水平的质控品进行质控 8 5 2 出现以下情况需要进行质控 8 5 2 1 测试试剂盒使用超过 24 小时 8 5 2 2 更换新的试剂盒 8 5 2 3 重新生成定标曲线 8 5 2 4 停机 8 5 3 各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围 以 确 保合适的测试性能 8 5 4 质控值应落在规定的范围内 如出现失控 应采取纠正措施 8 6 稀释 8 6 1 使用手工稀释或仪器自动稀释功能 仪器自动稀释的最大比例为 1 100 8 6 2 手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释 将得到的检测结果 乘以稀释倍数计算最终结果 8 6 3 选择仪器自动稀释功能 可以得到准确的检测结果 参考相应的 仪器系统操作说明以及帮助系统 8 7 结 果 计 精品文档 51欢迎下载51 算 选择适当的曲线拟合方式 本试剂盒推荐采用四参数拟合方式 以校 准品浓度值为 x 轴 以校准品发光强度值的 log 值为 y 轴建立定标曲线 根据待测样本的发光强度值回算相应的浓度值 仪器自动操作系统可通过 存储的定标曲线以及样本测试得到的信号值自动计算样本测试结果 九 参考范围九 参考范围 检测 500 例乙肝患者样本和 500 例正常人样本 用 ROC 曲线方法确定正 常参考值为1 00 时 结果判为阴性 S CO 1 00 时 结果判为阳性 1010 检检 验验 结结 果果 的的 解解 释释 10 1 用本试剂盒检测结果 COI 为 0 80 1 20 的弱反应性可疑样本 建议复 孔重新测定 如果双孔复查 COI 均大于 1 00 结果判为阴性 如果单 孔或复孔测定不大于 1 00 结果判为阳性 同时建议动态观察 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 e e 抗体抗体定量测定定量测定 第 23 页 共 62 页 10 2 由于方法学或免疫特异性等原因 使用不同生产商的试剂对同一份样本 进行检测可能会得到不同的检测结果 因此不同试剂检测所得结果不应 精品文档 70欢迎下载70 直接相互比较 以免造成错误的医学解释 建议实验室在检测报告中注 明所用试剂特征 系列监测中 如果改变试剂类型 则应进行额外的连 续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值 十十 一 一 检检 验验 方方 法法 的的 局局 限限 性性 11 1 本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一 临床诊断应与临床检查 病 史 及其他检测相结合 11 2 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果 此类样本不适 合用本试剂盒进行检测 11 3 溶血 脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果 十二 产品性能特征十二 产品性能特征 12 1 符合率 与 SFDA 批准的试剂平行检测 1024 份临床样本 阴性符合率 98 98 阳性符合率 98 8 总符合率 98 93 12 2 最低检出限 检定系列国家最低检出限参考品或经国家参考品标化的 企 精品文档 71欢迎下载71 业最低检出限参考品 结果符合相应参考品的要求 12 3 精密性 10 孔平行检测 0 5 PEI U ml 样本 CV 10 0 10 孔平行 检测 5 PEI U ml 样本 CV 20 0 12 4 分析特异性 与抗 HIV 1 2 抗 HCV 抗 HAV 等病毒性抗体无交 叉反应 1 25mg ml 血红蛋白 200mg L 胆红素 20g L 甘油三酯和 500mg dl 胆固醇对检测结果无干扰 十三 参考文献十三 参考文献 1 Lok ASE McMahon BJ AASLD practice guidelines chronic hepatitis B Hepatology 2004 34 1225 1241 2 Lavanchy D Hepatitis B virus epidemiology disease burden treatment and 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 e e 抗体抗体定量测定定量测定 第 24 页 共 62 页 current and emerging prevention and control measures J Viral Hepat 2004 11 97 107 3 巴德年 1998 年 当代免疫学技术与应用 北京医科大学中国协和医科大学 联 合出版社 精品文档 72欢迎下载72 4 陶义训 1997 年第二版 免疫学与免疫学检验 人民卫生出版社 5 中华医学会传染病与寄生虫病学分会 肝病学分会 病毒性肝炎防治方案 中华传染病杂志 2001 19 56 62 精品文档 73欢迎下载73 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒核心乙型肝炎病毒核心抗体抗体定量测定定量测定 第 25 页 共 62 页 1 目的 目的 规范乙型肝炎病毒核心抗体测定的标准操作程序 确保乙型肝炎病毒核心 抗体测定的结果准确有效 2 适用范围 适用范围 在 AutoLumo A2000 化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒 核心抗体 三 临床意义三 临床意义 核心抗体是乙型肝炎病毒核心抗体的简称 可简写为抗 HBc 核心抗原 虽然在血清中查不出来 它在血中很快被裂解 但是它具有抗原性 能刺 激 身体的免疫系统产生出特性抗体 即核心抗体 故检测抗 HBc 可以了解人 体 是否有过核心抗原的刺激 也就是说是否有过乙肝病毒的感染 所以抗 HBc 是一项病毒感染的标志 四 四 方方 法法 原原 精品文档 74欢迎下载74 理理 本产品采用竞争法原理进行检测 用核心抗原包被磁微粒 用辣根过氧 化物酶标记核心抗体制备酶结合物 通过免疫反应形成抗原 酶标抗体复合 物 该复合物催化发光底物发出光子 发光强度与核心抗体的含量成反比 五 五 标标 本本 的的 采采 集集 与与 处处 理理 5 1 采用正确医用技术收集血清 血浆样本 推荐对于使用普通管采血的样 本 离心前样本应 37 孵育至少 1h 对于使用促凝管采血的样本 离 心 前样本应 37 孵育至少 0 5h 离心条件 10000g min 10min 对于使 用 抗凝管采血的样本 离心条件 10000g min 10min 抗凝管推荐使用肝 素钠作为抗凝剂 避免使用枸橼酸钠和 EDTA 抗凝剂 5 2 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果 应离心除去 并确定样 本未变质方可使用 5 3 溶血或脂血的样本不能用于测定 5 4 样本收集后在室温放置不可超过 8 小时 如果不在 8 小时内检测需将 精品文档 75欢迎下载75 样 本放置在 2 8 的冰箱中 若需 48 小时以上保存或运输 则应冻存于 20 以下 避免反复冻融 使用前恢复到室温 轻轻摇动混匀 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒核心乙型肝炎病毒核心抗体抗体定量测定定量测定 第 26 页 共 62 页 六 六 标标 本本 拒拒 收收 标标 准准 1 严 重 溶 血 脂 血 2 精品文档 76欢迎下载76 标 本 标 识 不 明 七 七 仪仪 器器 与与 材材 料料 7 1 仪器 适用于 AutoLumo A2000 化学发光检测仪 7 2 试 剂 A u t o L u m o 精品文档 77欢迎下载77 A 2 0 0 0 专 用 乙 型 肝 炎 病 毒 核 心 抗 体 试 剂 7 2 1 试 剂 准 备 本 试 精品文档 78欢迎下载78 剂 为 即 用 型 试 剂 可 以 直 接 放 在 仪 器 上 7 2 2 试 剂 盒 于 2 8 储 精品文档 79欢迎下载79 存 有 效 期 1 2 个 月 7 2 3 试 剂 盒 应 防 止 冷 冻 避 免 强 光 照 射 7 2 精品文档 80欢迎下载80 4 试 剂 盒 开 启 使 用 后 2 8 保 存 可 使 用 1 个 月 7 2 5 试 剂 盒 可 精品文档 81欢迎下载81 适 应 1 周 内 常 温 运 输 运 输 过 程 中 应 轻 拿 轻 放 避 免 重 压 防 止 雨 雪 淋 湿 和 精品文档 82欢迎下载82 阳 光 曝 晒 7 2 6 试 剂 机 载 稳 定 性 7 2 6 1 试剂包 磁微粒混悬液 酶结合物 竖直向上存 放 在 2 10 C 环境下冷藏保存 2 小时后 才可上机使 用 首次使用后 机载或在 2 10 C 环境下稳定 期 为 28 天 7 2 6 2 阴阳性对照开瓶后保存于2 8 C 稳定期可维持1 个月 若需使用更长时间 应根据需要进行分装 于 20 冻存 可以保存2个月 但应避免反复冻 融 精品文档 83欢迎下载83 7 3 质 控 液 推 荐 使 用 安 图 配 套 质 控 品 或 第 三 方 质 控 品 B i o R A D 精品文档 84欢迎下载84 Q C 八 检验方法八 检验方法 8 1 消耗品检查 8 1 1 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足 8 1 2 参考相应的仪器系统操作说明 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒核心乙型肝炎病毒核心抗体抗体定量测定定量测定 第 27 页 共 62 页 8 2 试剂包装载 8 2 1 试剂包首次上机前 轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的 成 份 避免产生气泡 不要倒转已经打开的试剂包 8 2 2 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数 8 2 3 如果特殊情况下仪器无法识别条码 可以手工输入 8 2 4 参考相应的仪器系统操作说明 8 3 测试 8 3 1 将样本容器放置在仪器配套样本架中 每次测试样本量为 50 l 8 3 2 装载样本架 在仪器软件界面中输入样本信息 精品文档 85欢迎下载85 8 3 3 选择 运行 开始测试 系统自动进行试验操作 8 3 4 参考相应的仪器系统操作说明 8 4 定 Cutoff 值 8 4 1 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数 8 4 2 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡 可以手工输入 8 4 3 将阴阳性对照转移至样本容器 放置在仪器配套样本架中 8 4 4 装载样本架 在仪器软件界面中输入 Cutoff 值信息 8 4 5 选择 运行 开始测试 生成 Cutoff 值 8 4 6 Cutoff 值有效期为 28 天 8 4 7 参考相应的仪器系统操作说明 8 4 8 出现以下情况需要重新生成 Cutoff 值 8 4 8 1 质控结果经重复测定后仍然超出范围 8 4 8 2 试剂盒或发光底物液的批号更改 8 4 8 3 超出 Cutoff 值有效期限 8 4 8 4 仪器重要部件更换或维修 8 5 质控 文件编号 XZDF 3 MY 02 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本 修订号 A 0 生效日期 20151008 主题内容 乙型肝炎病毒核心乙型肝炎病毒核心抗体抗体定量测定定量测定 第 28 页 共 62 页 精品文档 86欢迎下载86 8 5 1 使用至少两个分析物水平的质控品进行质控 8 5 2 出现以下情况需要进行质控 8 5 2 1 测试试剂盒使用超过 24 小时 8 5 2 2 更换新的试剂盒 8 5 2 3 重新生成 Cut