实验十一 谷丙转氨酶活性的测定_第1页
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实验十一谷丙转氨酶活性的测定 实验原理 丙转氨酶 GPT 能催化丙氨酸和 酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸 丙酮酸在酸性条件下与2 4 二硝基苯肼可缩合生成丙酮酸二硝基苯腙 其在碱性条件下呈现棕红色 在一定的浓度下 颜色的深浅符合比尔定律 在520nm处有最大吸收 根据颜色的深浅 通过比色法可计算出酶活性 应用 GPT在肝脏中含量最多 当某种药物对肝脏早晨损害或病毒肝炎的急性阶段 由于肝细胞受损 GPT就释放到血液中 使血清中此酶水平明显升高 因此测定血清谷丙转氨酶的活性可作为诊断肝病的重要指标 实验方法 1 标准曲线的制备 A 取干净试管6支 编号后按照下表添加试剂 B 将试管置于37 水浴中保温10min 然后向每管中加入0 5ml2 4 二硝基苯肼 再继续保温20min C 分别向各管中加入0 4mol L氢氧化钠溶液5ml 室温下静止10min D 用 0 号管作为空白对照 与520nm下测定吸收值 E 以各管吸收值为纵坐标 丙酮酸的浓度为横坐标做标准曲线 2 GPT活性的测定 取干净试管4支 按照下表添加试剂 37 水浴加热30min 转氨基反应 37 水浴加热20min 丙酮酸与2 4 二硝基苯肼反应 各管反应完成后混匀 室温静止10min后 以对照管1或者对照2调节零点 测定1和2号管的吸收值 实验数据计算 由标准曲线查出1号和2号反应管中的丙酮酸的量 根据下面的公式计算GPT的活性 GPT活力单位的定义 单位时间 每小时 内 单位体积 每ml 的酶反应生成的产物的量 mM GPT活力 单位 反应管中丙酮酸的量 mM 0 5小时 0 25ml 实验注意事项 1 在呈色反应中 2 4 二硝基苯肼与含有酮基的化合物反应形成苯腙 底物中的 酮戊二酸可以与2 4 二硝基苯肼反应 生成 酮戊二酸苯腙 因此在制备标准曲线的时候需要加入一
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