ABO血型鉴定操作规程

成都市青白江区人民医院对象：全院职工医疗药事制度文件名称：ABO血型鉴定（4.19.2.1）编写日期：2014.1修订日期：2017.4执行日期：2017.4注：本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印本文件最终解释权归输血科ABO血型鉴定 【原理】人类ABO血型系统包括四种主要的表现型：A、B、O和AB。ABO血型由红细胞上A和B抗原的有或无决定，ABO系统还以血清中存在自然发生的规则抗体为特点，即血清中含有针对自身红细胞所缺的A或B 抗原产生的同种凝集素（也称为“天然抗体”）。人类红细胞上A和B抗原的有或无与血浆中抗A和抗B抗体的产生存在着相反的互补关系。例如O型个体红细胞上缺少A和B抗原，其血清中含有抗A和抗B抗体。利用红细胞凝集试验，通过正反定型可以准确鉴定ABO血型。所谓正定型，也称红细胞定型试验，是指用标准抗A和抗B试剂来测定红细胞上的A抗原和B抗原；所谓反定型，也称血清定型试验，是指用标准A型和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和抗B抗体。“天然抗体”的免疫原可能是肠道及环境中的细菌，例如在大肠埃希菌的脂多糖外壳中含有ABO类似结构。1. 试管法 试管法是ABO定型试验的经典方法。 【样本】抗凝或不抗凝的样本均可用于ABO鉴定试验。红细胞可悬浮在自身血清、血浆或盐水中，也可以洗涤后悬浮于盐水中。通常情况下，试管法正定型被检样本与反定型中试剂红细胞悬液浓度皆为2%5%。【试剂】（1）抗A血清 （2）抗B血清 （3）2%5%的A1型、B型红细胞盐水悬液 （4）如果需要，可增加抗A,B试剂和A2血型红细胞.【操作】（1） 正定型：检测红细胞上的A或B 抗原。加1滴抗A到一支洁净试管中并标记；加1滴抗B到一支洁净试管中并标记；如果需要，可选做加1滴抗A,B在第3支试管，并标记；向每一支试管滴加1滴2%5%的待检红细胞悬液；轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常（9001000）g离心15秒；轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；观察、解释、记录试验结果，并与血清（血浆）试验结果对照（2） 反定型：检测血清或血浆中的抗体。取2支洁净试管，分别标记A1和B，分别向其中滴加23滴血清或血浆；加1滴A1试剂红细胞到标记A1的试管；加1滴B型试剂红细胞到标记B的试管；如果需要，加1滴A2试剂红细胞到一支已加入23滴血清或血浆的试管中，并做好标记；轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常（9001000）g离心15秒；检测是否有溶血现象，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；观察、解释、记录试验结果，并与红细胞试验结果对照。【结果判定】（1） 细胞试验中的凝集以及血清或血浆试验中的溶血或凝集均为阳性结果（2） 细胞扣重悬后表现为均匀的细胞悬液是阴性结果（3） 凝集强度判断标准参见表1-5-1（4） ABO定型的血清或血浆试验以及红细胞试验的解释见表1-5-2（5） 如果红细胞定型试验与血清定型试验结果不一致，应通过进一步试验解决，然后才给出ABO血型结果（6） 混合视野凝集的情况，应进一步找出原因：例如是否混合血样标本，近期有无输血史，是否白血病急性期或者ABO亚型等 表1-5-1凝集强度判读4 + = 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3 + = 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2 + = 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1 + = 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。+/ = 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF = 混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍成分散分布。 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。表1-5-2 ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗- A+B A细胞 B细胞 O细胞 + + A + + + B + O + + + + + AB 注：+ = 凝集； = 不凝集 【注意事项】 （1）红细胞试验中抗体试剂与待检红细胞产生3+4+的凝集为阳性反应。血清与试剂红细胞的反应经常较弱。血清试验可以在室温孵育515分钟以上增强凝集反应，观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，有助于弱凝集的发现。 （2）试管法定型反应快，需时短，特别是紧急输血时，可立即离心观察结果；通过离心增强凝集，可发现亚型和较弱的抗原-抗体反应，结果准确可靠，是ABO定型的常规方法。2.玻片法【样本】用玻片法进行ABO正定型时，待检红细胞悬液的浓度是10%15%。玻片法一般只能做正定型。【试剂】（1）抗A （2） 抗B【操作】（1） 加1滴抗A到一洁净的玻璃片或白瓷瓶凹孔中，并做好标记（2） 加1滴抗B到一洁净的玻璃片或白瓷瓶凹孔中，并做好标记（3） 向以上玻片或白瓷瓶凹孔中的每一种试剂中分别加1滴充分混匀的待检红细胞悬液（4） 充分混匀抗体试剂和待检红细胞，用搅拌棒将混合物均匀分散开（5） 不断地从一边到另一边轻轻倾斜转动玻片或白瓷板，持续大概2分钟。在此期间不要将玻片或白瓷板放在热表面上（6） 读取，解释并记录所有玻片或白瓷板凹孔中的结果【结果判定】（1） 任何ABO定型试剂与红细胞反应表现强凝集都是阳性结果（2） 在反应2分钟末红细胞仍呈现均匀悬液是阴性结果（3） 弱阳性或可疑结果应使用试管法进一步确认3.柱凝集法【样本】同玻片法和试管法【试剂】（1）ABO试剂红细胞 （2）柱凝集血型卡【操作】（1）核对病人标本编码、病人信息与检验申请单是否一致。（2）将标本置于离心机，转速1500三分钟。（3）将病人信息写在对应的血型卡上，以防混淆。（4）各吸取血浆50微升分别加入AC、BC孔中，再分别在AC、BC孔中加入ABO血型反定型试剂A1红细胞、B红细胞各一滴。（5）汲取病人标本血球20微升加入已备好的生理盐水（2毫升）试管，配成红细胞悬液。（6）将配好的红细胞悬液分别加入A、B、D孔各50微升。（7）将血型卡置于免疫微柱孵育器（37度）孵育5分钟，取出置于血型血清学多用离心机离心5分钟。【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血结果为阳性，不凝集为阴性。柱凝集法凝集强度判读表见表1-5-3及1-5-4 表1-5-3A孔B孔D孔对照AC孔BC孔结果+A型+B型+AB型+O型RH(D)血型判定：+ 阳性 阴性【注意事项】微柱凝集试验技术是较新的血型血清学检测技术，具有易于操作标准化、自动化、判读