食品中脂肪含量测定-酸水解法

实验一实验一 食品中脂肪含量测定食品中脂肪含量测定 酸水解法酸水解法 通过实验掌握食品中脂肪含量测定原理及操作步骤 充分认识脂肪含量测定的重要性 增强学生对酸水解法提取脂肪的理解 1 原理原理 将试样与盐酸溶液一同加热进行水解 使键合或包藏在组织里的脂类游离出来 提取 脂肪 回收溶剂 干燥后称重 即得游离态及结合态脂肪总量 2 试剂试剂 1 盐酸 2 乙醚 3 乙醇 95 4 石油醚 沸程 30 60 3 主要仪器主要仪器 100mL 具塞量筒 烘箱 4 操作步骤操作步骤 1 样品处理 固体样品 精密称取约 2 0 g 置于 50 mL 具塞量筒中 加 8 mL 水 混匀后加 10 mL 浓盐酸 液体样品 准确称取 10 0 g 置于 50mL 具塞量筒中 加 10 mL 浓盐酸 2 将量筒放入 70 80 水浴中 每隔 5 10 min 用玻璃棒搅拌一次 至样品脂肪 游离消化完全为止 时间约需 40 50 min 3 取出试管 加入 10 mL 乙醇 混合 冷却后将混合物移人 100 mL 具塞量筒中 用 25 mL 乙醚分次洗试管 洗液一并倒人量筒中 加塞振摇 1 min 小心开塞放出气体 再塞好 静置 12 min 小心开塞 用石油醚一乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪 静置 10 20min 待上部液体澄清 吸出上清液于已恒重的锥形瓶内 再加 5 mL 乙醚等量 混合液于具塞量筒内 振摇 静置后 仍将上层乙醚吸出 放人原烧瓶内 放入将锥形瓶 置于水浴锅中蒸发至干 取出擦去外壁水珠 置于 100 5 烘箱中干燥 2h 取出 放入 干燥器内冷却 0 5h 后称重 重复以上操作至恒重 5 计算计算 样品中脂肪含量 M2 M1 M 式中 M 样品的质量 g M1 锥形瓶质量 g M2 锥形瓶和脂类的质量 g 实验二实验二 原花青素提取及含量测定原花青素提取及含量测定 通过实验掌握原花青素提取及含量测定的原理和操作方法 加强对香草醛 盐酸比色的 认识和理解 1 实验原理实验原理 原花青素和儿茶素类单体 A 环的化学活性较高 在酸性条件下 其上的间 苯二酚或间苯三酚与香草醛发生缩和 产物在浓酸作用下形成红色的正碳离子 样品的浓 度与产生的颜色呈正相关 用儿茶素为对照品 在 500nm 下测定吸光度 2 实验试剂及仪器实验试剂及仪器 香草醛 盐酸 甲醇 可见分光光度计 3 操作步骤操作步骤 取 2g 样品于 50mL 离心管中 加入 10mL 1 w w 的 HCI 甲醇溶液 室温下避光 摇床密封提取 20 min 4000g 离心 10min 取上清 1mL 进行测定 测定前先配制香草醛盐 酸溶液 在试管中通过混合等体积的 1 w w vanillin 甲醇溶液和 8 w w HCI 甲 醇溶液至 5mL 1min 间隔混合 1 mL 等量溶液 香草醛试剂每天新鲜制备 加入 1mL 上 清 充分振摇后于 30 水浴保温反应 20min 500nm 测定吸光度 3 结果计算结果计算 根据标准曲线的标准方程计算原花青素含量 每 g 样品中原花青素含量以儿茶素 g 数 来表示 实验三实验三 游离多酚含量测定游离多酚含量测定 通过本实验了解游离多酚提取 测定原理 掌握多酚化合物含量测定操作方法 加深 对福林酚法测定多酚含量的理解 1 实验原理实验原理 多酚类化合物在碱性溶液中 钨钼酸可以将多酚化合物定量氧化 自身被还原 使 W6 变为 W5 生成蓝色的化合物 蓝色的深浅程度与含酚基团的数目成正比 该蓝色化 合物在 725nm 下有最大吸收峰 以阿魏酸为对照品 通过比色测定可对多酚化合物进行定 量 2 实验试剂及器材实验试剂及器材 丙酮 盐酸 摇床 乙醚 福林酚试剂 3 游离多酚提取游离多酚提取 称取脱脂样品 2g 于 50mL 离心管中 加入 40mL 70 v v 丙酮 室温下避光摇床提取 2h 4000g 离心 10min 得上清 重复 3 次 合并上清 得到可溶性多酚化合物 上清于 30 真空旋转蒸发至约 50mL 用 12 M HCl 调节 pH 为 2 利用乙醚按提取液 1 1 v v 萃取 5 次 有机相在 30 下真空旋转蒸发至干 得到游离的和非共轭的多酚化合物 用甲 醇溶解并转移到 25mL 棕色容量瓶中 用甲醇定容至刻度线 0 4 下避光储存备用 4 多酚含量测定多酚含量测定 吸取甲醇溶解的可溶性多酚粗提液 2mL 置于离心管中 加入 0 5mL 2mol L Folin Ciocalteau 试剂 充分振摇 加入 1mL 饱和碳酸钠溶液 补加蒸馏水使总体积至 10mL 充分混匀 室温下避光反应 3