【毕业学位论文】（Word原稿）猪干扰素-γ基因的克隆、表达及其疫苗佐剂效应研究预防兽医学硕士论文

I 密级 _ 论文编号 _ 中国农业科学院 学位论文 猪干扰素 因的克隆、表达及其 疫苗佐剂效应研究 of as of of as 猪干扰素 因的克隆 、 表达及其疫苗佐剂效应研究 摘 要 干扰素 是一种具有广泛 抗病毒 、 抗细胞内寄生菌及胞内寄生虫 、 抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子，在机体免疫系统中发挥重要作用 。 它 主要由活化的 T 淋巴细胞和 胞产生， 丝裂原以及抗原特异性刺激 T 淋巴细胞克隆也可产生。 研究表明， 望成为新一代的疫苗佐剂。为了研究和开发猪 用于 相关 疾病的治疗或预防，我们进行了 猪干扰素 表达及其疫苗佐剂效应研究。以植 物血凝素（ 脂多糖（ 同刺激分离的猪外周血淋巴细胞，提取总 用反转录 术 扩增 猪 因，将 扩增 到的基因与 体连接后进行酶切 、 及测序鉴定 ， 结果表明 ： 所克隆的猪 因与 的猪 因序列完全一致。 依照 该基因开放阅读框（ 侧 序列重新 设计并合成引物，以重组质粒 模板进行扩增，扩增产物和 和 双酶切后连接，转化大肠杆菌。经酶切 、 及测序鉴定证明，猪 因正确插入到 体。用 导表达，表达产物通过 析， 证实 猪 因在大肠杆菌中得到了成功表达， 目的蛋白与 成融合形式，分子量大小为 40右，与预期的大小相吻合，而且可被 鼠 抗人重组 清所 别 ；薄层扫描分析表明， 表达产物 约 占菌体总蛋白的 30将克隆到的猪 因插入到哺乳动物细胞表达载体 核启动子 ，直接用该质粒作为猪囊虫全虫疫苗佐剂免疫 小鼠 ，检测抗体 ，结果试验组小鼠抗体滴度明显高于各对照组，说明 猪 因重组真核表达载体 猪囊虫全虫疫苗 有 良好的 免疫 佐剂作用 ，优于传统使用的铝盐和206 佐剂。 该研究首次对 面的 作 用进行了探索，为打破目前寄生虫免疫防制的被动局面进行了有益的尝试。 关键词： 猪 因克隆；诱导表达；疫苗佐剂 of as is a K or It a in to It a in is to be as a in In we HA NA it as a to 00% We to RF of as in CR to of in a of 0 ST by 0of . We , it as an to ; V 目 录 第一章 引 言 1 1 研究目的和意 义 1 2 国内外研究现 状 2 3 研究内容和方 法 9 第二章 猪干扰素 因的克隆及表 达 10 1 实验材料和方 法 10 验材 料 10 验方 法 12 2 实验结 果 21 3 讨论 30 第三章 猪 32 1 实验材料和方法 32 验材料 32 验方法 32 2 实验结果 34 3 讨论 35 研究结论 37 参考文献 38 附录 44 致谢 49 作者简历 50中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言 1 第一章 引 言 1 研究目的和意义 干扰素 一种具有广泛的抗病毒、抗 细胞内寄生菌及胞内寄生虫、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子，在机体免疫系统中发挥重要作用。 1973 年 抗原性与以前发现的完全不同，于是就命名为 型 980 年统一命名为 伯泉 ,2001）。 1981 年， 首次成功地克隆了人 因（ ， 2000），其后多种动物的 因相继被克隆和表达，猪 因在 1990 年由 成功克隆（ 周光炎， 2001）。 因的成功克 隆，使人们能够大量获得具有活性的重组 加方便地开展 用及应用方面的研究。近年来，随着细胞分子生物学、免疫学、 组技术及基因转移技术的发展 ,有关 作用机理、临床应用等方面取得了长足发展，由于 有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用，使其成为临床治疗病毒性疾病的首选药物。 要由活化的 T 淋巴细胞和 胞产生，丝裂原以及抗原特异性刺激 T 细胞克隆均可产生 T 细胞中， 类是产生 主要细胞，此外， 胞、病毒或同种异体抗原 刺激的 核细胞、巨噬细胞以及树突状细胞均可分泌 伯泉 ,2001）。有许多生物学活性，在抗病毒感染和抗肿瘤方面同 相似，但 免疫调节作用比 更为重要，而且 较严格的种属特异性，如人的 作用于人和灵长类动物的细胞。 于 细胞因子，可诱导机体免疫反应向 转化 ,而抑制 免疫反应。在小鼠实验模型中发现， 促进 泌，而降低 水平， 可抑制 导小鼠 B 细胞 表达 (， 1996； H 等，1998)。 人和小鼠的 因分别定位于 12 号和 10 号染色体，在 平上与 基因无同源性，但立体分子结构十分相似，有人认为这三个基因可能来自于同一个祖先基因。人与各种动物 因开放阅读框（ 苷酸同源性分别为：人与小鼠为 40%、人与猪为 人与牛为 牛与猪为 88%。在蛋白质水平，人成熟 子由 143 个氨基酸残基组成，而小鼠成熟 133 个氨基酸残基组成 ，人与小鼠氨基酸序列同源性为 40%、人与猪为 人与牛为 、牛与猪为 70%。 分子中没有形成二硫键的半胱氨酸，其活性形式是牢固的二聚体或四聚体，单体没有活性。天然 一种糖蛋白，在第 25 位和第 97 位 有两个糖基化位点，虽然大肠杆菌表达的 有进行糖基化修饰，但研究证实仍具有生物学活性（郭瀛军等， 2001）。在 分子中的 86 90 位和 /或 128 132 位分别为 种碱性氨基酸序列可能是 伯泉 ,2001）。猪 为 501码由 166 个氨基酸残基组成的前体蛋白，其中信号肽为 23 个，可引导 泌到细胞外，在胞外切去信号肽后成为成熟的猪 含 143 个氨基酸，分子量为 17 在 128 132 位含有 列，而不存在 列。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言 2 理想的疫苗接种后应能刺激机体产生持久的特异性免疫反应，但目前许多疫苗免疫原性差，接种后所激发的免疫应答或强度不足，或维持时间短，即使使用传统 的疫苗佐剂也不能有效诱导机体产生足够强的免疫应答和特定的应答类型（ 这些一直是困绕免疫接种的一大难题（张延龄等， 2004）。近年来，随着细胞因子研究的进展，发现许多细胞因子具有明显的佐剂效应，若以细胞因子作为疫苗佐剂使用，不仅可有效增强疫苗的免疫效果，而且可诱导免疫应答向特定的类型转换，这使得细胞因子的应用从治疗转向了预防。但是，细胞因子作为佐剂存在使用过量带来一定副作用和很快失活的缺点。后来，受基因免疫的启发，以编码细胞因子的表达载体直接作为佐剂可避免这些缺点，编码细胞因子的表达载体进入机 体后可在体内持续低水平表达，起基因治疗作用或参与疫苗免疫的应答，这种方法不仅避免细胞因子的不利影响，还省去了表达、纯化等复杂的手续。以 其基因作为治疗剂或疫苗佐剂的研究目前已取得了较大的进展，如将 因导入 瘤小鼠不仅可延长其存活期，并有 25%的实验鼠肿瘤消退，这说明 在小鼠体内表达并发挥了相应的作用（ 陈受霓等， 2003） 。将乙肝病毒 因共同免疫小鼠，可明显促进 胞增殖，并使抗 面抗原的抗体 量增加，同时显著抑制 胞的增殖并减少 体的产生 (H 等 , 1998)。这些结果使得人们对细胞因子的研究前景充满了信心，而 为一种抗病毒和抗肿瘤的细胞因子更是具有极高的研究和开发价值。 作为疫苗佐剂调节机体对疫苗的免疫应答之外，它还可作为治疗药物用于病毒性或细菌性疾病的治疗。总之，对 用方面的研究将有望解决目前许多疫苗不能达到有效保护的问题，为动物病毒病的治疗和预防提供一种强有力的手段。它将是一个新的技术产业，产生不可估量的社会和经济效益。 医学临床上目前 虽然已有重组人 于病毒病（如乙肝）或肿瘤的治疗，但将其作为疫苗佐剂尚处于研究探索阶段。动物方面，国内外虽进行了许多动物源 面的研究，但仅仅处于起步阶段，在国内还没有一种动物源性 品，为了研究和开发猪 用于相关疾病的治疗或预防，我们开展了本项研究。 2 国内外研究现状 2 1 细胞因子的研究现状 细胞因子（ 一类由活化的免疫细胞（淋巴细胞、单核巨噬细胞等）和相关细胞（纤维细胞、内皮细胞等）产生的具有调节细胞功能的高活性、多功能蛋白质，它们通过与高亲和力特 异性受体相互作用，在低浓度下发挥作用，是机体发挥免疫功能不可缺少的成分（金伯泉，2001）。 1957 年， 发现病毒诱导细胞产生一种能干扰病毒复制的可溶性蛋白质，将其命名为干扰素，这是正式命名的第一个（类）细胞因子。此后，人们陆续发现了一系列的细胞因子。20 世纪 70 到 80 年代是细胞因子研究十分活跃的时期，在此阶段，有关细胞因子的研究有两个重要发展，一是细胞因子命名的统一，二是细胞因子纯化、鉴定技术的发展和基因重组技术的应用（ A 等， 2000）。尤其是在 80 年代，由于分子生物学技术和 基因重组技术的不断发展和完善，新的细胞因子不断被发现，重组的细胞因子更加接近于天然分子，这使得人们能更加确切的研究各种细胞因子的理化特性、结构和生物学效应，作用的受体、受体的结构及受体介导的信中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言 3 号传导过程（金伯泉， 2001；周光炎， 2001）。但是，由于重组细胞因子在临床应用中可引起如发热、寒颤等一系列的副作用以及很快失活的特性，人们又将目光转向对细胞因子进行适当的加工和改造上来，通过对细胞因子的结构进行适当的加工和改造，以获得生物学活性更加单一、更加有效、副作用更小的细胞因子。研究发现，将 125 位 突变为 得到的有不形成二聚体、比活性高、热稳定性好、体内半衰期延长等优点（李元等 ,2003）。若利用 组技术，用 段取代绿脓杆菌 素基因的细胞识别功能区构建嵌合基因，发现该融合蛋白对表面表达 活化 T 淋巴细胞具有明显杀伤效应，可用于抗排斥反应或治疗自身免疫性疾病（ C 等， 1989； G 等， 1998；毕美霞， 2000）。美国科学家也构建了以白喉杆菌（ 毒素为主体的 明它们能在体外高度特异性地 杀伤高表达相应细胞因子受体的肿瘤细胞（刘堰等， 2002）。目前，要证实新发现一种细胞因子的标准是：必须克隆其基因且证明其具有生物学活性，并在核苷酸序列和氨基酸序列上与已知的细胞因子或其它活性蛋白质显著不同（金伯泉， 2001；孙卫民等， 1999）。 从细胞因子被发现时起，就因其对免疫系统的强大调节作用而备受关注，开始研究其与疾病的关系，但直到近年来随着细胞工程和基因工程的发展，能够大量获得天然或重组细胞因子以后，其临床应用才成为可能。 1986 年，美国食品和药物管理局（ 准 于临床，至今至少已 有 30 个以上的细胞因子在美国、欧洲和世界各地用于临床治疗，利用基因工程技术生产有活性的细胞因子用于疾病的治疗或预防已成为当前研究的热门并取得了很大的成绩，相信不久将有更多的细胞因子进入临床应用（ ， 2000）。用细胞因子作为疫苗佐剂的研究也取得了很大的进展，对于抗原性弱、不能有效诱导机体产生保护性免疫反应的疫苗，利用细胞因子作为佐剂进行免疫可达到增强免疫效果的目的，尤其对于基因工程疫苗或基因疫苗，选择合适的细胞因子或细胞因子基因作为佐剂是当前研究的重点和热点（李求是等， 1994； 1994；G 等， 2003）。细胞因子拮抗剂（包括天然的、基因重组的和可溶性细胞因子受体等）也日渐成为研究的重点之一，从而可有效控制某些细胞因子的负作用，如消除其对机体造成免疫损伤或抑制排斥反应等（ H 等， 1998；王斐等， 1999）。细胞因子的基因导入疗法和细胞因子与基因工程抗体、细胞因子与毒素等复合物的临床价值亦在研究之中。近年来，动物细胞因子的研究也越来越受到重视并取得了一定的成绩，但总的来说相对滞后，各种兽用相关细胞因子产品正处于研究和开发之中，开发动物源性细胞因 子作为疫苗佐剂的研究才刚刚起步。 2 2 干扰素 的分类、特性及其基因转录调控 扰素的分类及特性 在 20 世纪 60 年代，人们根据 生的来源及其对酸（ 耐受程度，将它分为 型和 型干扰素。 型干扰素在 件下活性稳定，其中由病毒感染的白细胞产生的称为白细胞干扰素，而由病毒感染的成纤维细胞产生的称为成纤维细胞干扰素。 型干扰素主要由抗原或丝裂原刺激的外周血单个核细胞（ 产生，所以又叫免疫干扰素。 20 世纪 80 年代初，又根据干扰素分子结构、抗原性及生物活性的区别，将 型 干扰素中的白细胞干扰素命名为纤维细胞干扰素命名为 型干扰素命名为 中 有异质性，又可分为不同的亚型（金伯泉， 2001；金奇， 2001）。虽然将干扰素分为不同的种类，但其生物中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言 4 活性大致相同，主要有： 抗病毒、抗细胞内寄生菌及其它微生物繁殖； 抗肿瘤细胞和其它细胞增殖； 免疫调节作用，包括增强巨噬细胞、 胞和 胞活性，促进或抑制抗体产生，促进 达，激活补体系统等。其中 型干扰素即 免疫调节作用比 强许多倍，但其生物学作用有较严 格的种属特异性（金奇， 2001；殷震等， 1997）。 身并不直接灭活病毒，而是作用于靶细胞膜上的 体，发生内化并降解，导致抗病毒蛋白基因的操纵子去抑制化而转录并合成抗病毒蛋白，从而发挥抗病毒作用。这些抗病毒蛋白目前研究最为清楚的是 2成酶，它可催化一种特殊的寡核苷酸 ） 2形成，该寡核苷酸可使干扰素诱导的潜伏的内切核酸酶 化，活化的 降解病毒 而抑制病毒蛋白的合成。另一种 导的抗病毒蛋白是 赖蛋白激酶可 使 译的起始因子 酸化而灭活，抑制了病毒蛋白的合成（ 1993； 等， 1994）。此外， 诱生一些只作用于某一类病毒的蛋白质，如 白只阻断流感病毒的复制（ A， 1992）。尽管对干扰素的抗病毒机理进行了很长时间的研究，但它对大多数病毒的确切作用机理仍不十分清楚，仅了解一些普遍的特征，这是由于：首先，干扰素诱生的不同蛋白质介导不同的抗病毒机制；其次，对不同科的病毒，其作用途径亦不一样；第三，可作用在病毒繁殖周期的一个或多个步 骤，包括病毒穿入、脱壳、转录、翻译、基因组复制、装配和释放，具体作用于哪个步骤主要取决于病毒的性质和感染细胞的类型。 因的转录调控 通常 因受一种抑制物的作用而使其表达处于沉默状态，只有受到诱导和刺激后被激活才进行转录，转录时也受到多种因素的调节和控制，这些因素相互作用，组成一个复杂的基因转录调控网络。研究表明，在 T 细胞受到抗原刺激分化为 ，细胞因子基因转录需要经过两个阶段：首先是未致敏的 T 细胞受到抗原刺激后活化、增殖，同时在 化，在此过程中 因位点染色体重构， 甲基化，细胞特异性转录因子及细胞表面受体的上调和下调；然后 因在诱导性转录因子作用下进行转录（ T 等， 1999； O， 2000），这些转录因子包括活化 T 细胞核因子（ 胞特异性转录因子（ (H 等， 1999)。 以和 因启动子近端 的 5 个功能性位点（ 4）相结合，并与结合在 点的激活蛋白（ 同作用，诱导 低水平转录；同时，在 增强子上亦存在功能性 合位点，增强子与启动子协同作用，才能使 因充分转录与表达（ 等 ， 1997； 等， 1998）。尽管 因表达具有重要作用，但 因的表达必需细胞特异性转录因子的参与才能完全实现。 于亮氨酸拉链转录因子家族，其只在 胞中表达而不在 胞中表达，它可以与 因启动子近端 应元件结合。在体外， 以激活 因启动子， 因敲除小鼠 其它 细胞因子（ 5、 6、 10、 13 等）的产生不受影响。因此， 因的高水平表达有重要作用（ I 等， 1998）。 锌指结构转录因子家族成员，也是 异性转录因子。 早期分化的 胞中移位表达，可抑制 化，使 细胞因子分泌增加，而使 细胞因子（ 12 等）分泌中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言 5 减少；但 因对 反应不同， 直接激活 因启动子，而 应性较低，但对 有很强的结合能力（ I 等， 1998； S 等 ， 2003）。 首次在免疫细胞中发现的 T 盒转录因子家族成员，小鼠的 白由530 个氨基酸组成 ,含有一个由 189 个氨基酸组成的 T 盒 合域，人 氨基酸水平与小鼠 88%的同源性。用 迹和 迹杂交证实其仅选择 性的表达于 未分化的 T 细胞及 胞中不表达，新鲜分离的 基因脾细胞在 非 导条件下可观察到 表达；除 胞外 ,在活化的 B 细胞和 胞中可观察到 同时表达 ,这表明 能与 表达有关 ( 等， 2002)。目前，在因上发现了 3 个潜在的 合位点，两个位于启动子，一个位于第三个内含子， 因的表达，而且可使 因位点染色体重组 ,可有 效地反式激活 因和 内源表达（翟中和等， 2000）。另外还发现 动子具有抑制作用 ,而对 动子无明显作用，但它可能通过抑制 因转录，降低 而抑制 细胞因子转录（ D 等 2003）。异位表达 新鲜分离的人 T 细胞，不仅可使 T 细胞在缺乏相应细胞因子诱导下向 细胞分化 , 而且能诱导已分化的效应性胞重新向 胞分化（ S 等， 2003）。从而说明 诱导 胞定向分化的特 异性转录因子。 与转录后 稳定性有关。人们早就发现多种细胞因子 半衰期（ ）很短，如 的 均短于 30 分钟，而 长达 17 小时，通过分析发现 、 基因的 富含 等， 2001)，当把 富含 连接到大鼠 端后，发现 稳定性降低了 10果把 富含 缺失，则 稳定性有明显的提高，半衰期从 4 小时。所以， 3的富含 是 解的信号识别区（ S， 2001； 等， 1995； A 等， 2002）。研究 因表达调控具有实际意义，一方面可指导我们发掘拮抗剂或激活剂，便于主动地调节其表达；另一方面可指导我们构建高效真核表达体系，以获得高产量的重组 细胞因子，用于疾病的治疗或作为疫苗佐剂使用。 体及其介导的信号传递 受体 (细胞表面或亚细胞组分中的一种生物大分子物质，可以识别并特异性的与有生物活性的配体相结合，从而激活或启动细胞的一系列生物化学反应，最后导致配体特定的生物学效应（ 孙大业等， 2001）。 挥其相应的生物学功能也必须与其存在于靶细胞上的特异性受体相结合，通过受体的介导作用将胞外信号传导至细胞内，从而引起细胞内的一系列变化；另外， 作用范围和生物学效应，取决于 体（ 表达和分布（ M 等，1999）。可见，受体在 挥其相应生物学效应中具有十分重要的作用。因此， 号转导途径研究是目前研究的一个热点，人们正在试图控制或改变信号转导，从而治疗一系列疾病如肿瘤、自身免疫性疾病、免疫抑制或免疫缺陷、移植排斥反应等。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言 6 的结构特点 1(, 成。其中 29 个氨基酸，分子量为 90 100膜外 区有 229 个氨基酸，含有两个 构域，五个 无 型细胞因子受体家族 的 x 序，它是 链，可与 聚体结合，主要分布于单核细胞、巨噬细胞、 T 细胞、 胞、中性粒细胞、成纤维细胞、上皮以及多种肿瘤细胞（ 等， 1994）。 10 氨基酸残基，分子量为 62膜外区有 220 个氨基酸，含有两个 构域，但缺乏 序，有六个 膜区和胞浆区分别为 21 和 69 个氨基酸残基，基因定位于 为 链（ ,1994）。 与 亲和力结合，要通过胞膜外区与 合介导 等， 1994）。 介导的信号转导 信号转导是指一种信号形式转换为另一种信号形式， 将胞外信号转导到胞内，细胞内部将发生一系列的生化反应，包括细胞生理反应及诱导基因表达（ 孙大业等， 2001）。径是目前研究最多的一条 主要信号转导途径，其参与了机体多种免疫和造血细胞的发育、分化成熟、调亡和功能的表达（贺平等， 1998），也是 导信号转导的一条主要途径。因此，国内外学者近年来对此进行了深入广泛的研究并取得了巨大进展。 1998 年 2 月在美国开了有关 专门会议，总结了过去 8 年的研究成果，充分说明了号转导途径的重要性。 于非受体型胞浆氨酸激酶，由 个成员构成的一个家族，分子量为 110结构上看， 族有 7 个高度保守的结构域（ 从 C 端到 N 端依次为 构域为蛋白酪氨酸激酶区（ 其中有活化所需的 序，切去该功能域后发现 仅失去激酶活性，而且成为一种显性阴性分子。此外，该功能域还含有 2 个相邻的酪氨酸残基，该位点的磷酸化或脱磷酸化与 化有关。 构域为激酶样区（ 是与 合的部位， 子中该功能域自身无酶活性但与维持酶活性有关。 N 末端的 同源区域，无酶活性，是与细胞因子受体胞浆区域结合的功能域。最近发现在 N 端含有 样（ 构域，是 细胞因子结合所必需的结构，目前认为其可能发挥一种分子接头作用 (， 1995； 等， 1997)。在 直接底物中，信号转导和转录活化因子（ of 一种 合蛋白，该家族由 成，结构上可分为 4 个功能区， N 端为保守区，此区含有蛋白酪氨酸磷酸激酶功能域（ 中间是 合功能域（ 含有 合序列， C 末端是具有转录活化的功能域（ 含有与转录因子相互作用的基序和酪氨酸磷酸化位点，在 间依次为 能域，对于 磷酸化和二聚体化游重要作用， C 末端功能域在 能中发挥着重要作用 (H 等， 1995； OJ 等 1997)。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言 7 其靶细胞上的特异受体结合后诱导受体 链发生聚化形成二聚体，二聚化的 链胞膜外区因变构而产生与 链结合区域，其分别结合一条 链形成 22 四聚体，结合后的 合位点， 受体上的结合位点结合后发生自身或与受体交叉酪氨酸磷酸化而活化，活化 的 一步募集细胞内含 构域的信号分子如 使其磷酸化而活化，活化的 成同源或异源二聚体，进而与 核定位分子结合，移入细胞核内，结合到特定基因启动子上，激活相应基因的表达，完成 导的信号转导过程，该途径活化迅速，在受体受到刺激 115 分钟内 发生磷酸化，随即进入细胞核 (J 等 1998； J, 2001； 陈晓萍等， 2003)。 导的信号转导除了 径外，还有其它途径，如 径。一般来说， 径主要调节功能性基因的转录， 径主要介导细胞增殖反应，研究同时还发现 径之间也存在着复杂的相互作用（ W 等， 1996；， 2000）。此外， 号传递中还存在着负反馈抑制因子，其中信号转导的抑制因子（ of 多数细胞因子受体信号转导的重要调节剂 ,它们通过负反馈方式调节细胞因子启动的 号转导通路 ,其作用机制 包括：与 合而抑制其激酶活性 ,竞争性抑制 活化受体的结合而抑制 激活 ,以及介导信号蛋白依赖蛋白酶体的降解过程 ( 等 , 1997；朱蕾， 2003)。 机体免疫应答的产物，对机体免疫系统具有强大的调节作用，是机体发挥免疫功能，清除胞内寄生病原体不可缺少的成分，与疾病的发生、发展有着密切的关系；另一方面，机体 可引起病理性反应。因此， 疾病的诊断、治疗和预防等方面有着极为广阔的应用前景（ M 等 , 1996； 等， 2001）。进入 20 世纪 80 年代以来，包括 内的诸多细胞因子的临床应用已成为医学研究和产品开发的重要领域，进入临床应用的细胞因子逐年增多，它们在人类和动物疾病的诊断、治疗和预防等方面发挥着越来越重要的作用，可以预计，在不久的将来，干扰素的应用可能会有新的突破和贡献。 诊断和治疗方面的应用 由于 仅具有抗胞内寄生微生物及肿瘤细胞生长繁殖的功能，同时具有较强的免疫调节作用，因此它一方面可以治疗某些疾病，如免疫缺陷性疾病、病毒性疾病、细菌性疾病及肿瘤等疾病，另 一方面可以导致和 /或促进某些疾病的发生和发展，如自身免疫性疾病、移植排斥反应等，（ 陈受霓等， 2003）。支气管哮喘患者体内 细胞因子的浓度显著升高，在其作用下 成增多， 嗜碱性粒细胞和肥大细胞上的高亲和力受体结合，从而引起本病的发生。应用 抗 体或 减少 细胞因子产生，从而抑制过敏反应，达到治疗的目的。在多发性硬化症病人的病灶， 生明显增加，而在恢复期， 泌增多 ， 细胞因子下降。因此，通过检测细胞因子的浓度可判断疾病的发展情况，也可通过运用 细胞因子或抑制 细胞的药物阻止其进一步的发展。给大鼠肌肉注射 外，重组猪 第一章 引言 8 在体外可有效抑制猪口蹄疫病毒（ 蓝耳病病毒（ 非洲猪瘟病毒（ 殖，同时对免疫抑制猪具有良好免疫调节作用（金奇， 2001）。受基因免疫的启发， 将表达载体通过鼻内接种的方法使其在小鼠的肺内表达 果小鼠可抵抗合胞体 病毒的感染（ 等， 2000）。 将 因转入肿瘤特异性 胞，使该 T 细胞的杀瘤活性提高了 23 倍，而且这种转基因肿瘤特异性 肿瘤局部 浓度远高于其它组织，从而加强了抗肿瘤效果，又大大减轻了 毒副作用，说明 因导入疗法有其独特的优势（ ,1996）。 为疫苗免疫佐剂的应用 早在