课题3　血红蛋白的提取和分离

课题3血红蛋白的提取和分离 一 课题目标 本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离 使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程 并了解色谱法 电泳法等分离生物大分子的基本原理 二 课题重点 凝胶色谱法的原理和方法 三 课题难点 样品的预处理 色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 一 阅读课本P64 P70 完成自学导引 二 基础知识 1 蛋白质的性质 1 具有两性 蛋白质由 氨基酸通过肽键构成的高分子化合物 在蛋白质分子中存在着氨基和羧基 2 可发生水解反应 蛋白质在酸 碱或酶作用下发生水解反应 经过多肽 最后得到多种 氨基酸 3 水溶性 具有胶体性质 4 盐析作用 少量的盐能促进蛋白质的溶解 如向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液 可使蛋白质的溶解度降低 而从溶液中析出 这种作用叫盐析 盐析的蛋白质不影响原性质 是个可逆过程 可用于分离提纯蛋白质 一 阅读课本P58 P63 完成自学导引 二 基础知识 1 蛋白质的性质 5 蛋白质的变性 在热 酸 碱 重金属盐 紫外线等作用下 蛋白质的结构会发生改变 这种改变是不可逆的 不能再使它们恢复成原来的蛋白质 因此 蛋白质变性凝固是不可逆的 6 颜色反应 蛋白质可跟许多试剂发生颜色反应 如 蛋白质 浓硝酸 黄色蛋白质 双缩脲试剂 紫色 7 蛋白质在灼烧时 可以产生烧焦羽毛的气味 例 人们用鸡的红细胞提取DNA 用人的红细胞提取血红蛋白的原因是 A 鸡的红细胞无血红蛋白 人的红细胞有B 鸡的红细胞有线粒体 人的红细胞没有C 鸡的红细胞有细胞核 人的红细胞没有D 鸡的红细胞有氧呼吸 人的红细胞无氧呼吸 2 蛋白质的分离方法 凝胶色谱法 1 概念 课本P64 2 原理 优化设计 P603 缓冲溶液 1 概念 这种能对抗外来少量强酸 强碱或稍加稀释不引起溶液pH发生明显变化的作用叫做缓冲作用 具有缓冲作用的溶液 叫做缓冲溶液 2 缓冲溶液组成 缓冲溶液含两种物质 一种抵制外加少量强碱物质 一种抵制外加少量强酸物质 A 弱酸和弱酸盐组合 B 弱碱和弱碱盐组合 C 多元弱酸的酸式盐和它所对应的次级盐 4 电泳 1 概念 2 原理 3 方法 4 测定蛋白质分子量时常用的方法 5 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 6 SDS的作用 三 实验操作 蛋白质提取和分离一般分为四步 样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定1 样品处理亚铁血红素基团可携带一分子氧或一分子CO2 1 样品处理 1 红细胞的洗涤 采集血样 低速短时间离心 吸取血浆 盐水洗涤 低速离心 重复 步骤三次 2 血红蛋白的释放 3 分离血红蛋白溶液 溶液分为4层 第1层 最上层 甲苯层 无色透明 第2层 中上层 脂溶性物质沉淀层 白色薄层固体 第3层 中下层 血红蛋白的水溶液层 红色透明液体 第4层 最下层 杂质沉淀层 暗红色 4 透析 2 凝胶色谱操作 1 凝胶色谱柱的制作 1 取玻璃管 磨平两端 2 制作底塞 3 制作顶塞 4 组装 5 安接其他附属结构2 凝胶色谱柱的装填 交联葡聚糖凝胶 1 固定 2 装填 3 洗涤 3 样品的加入和洗脱 1 调整缓冲液面 与凝胶面平齐 2 滴加透析样品 用量为1mL 3 样品渗入凝胶床 样品