微生物实验室生物安全操作规程

微生物实验室生物安全操作规程微生物实验室生物安全操作规程 一 目的 制订本规则 保证实验室工作人员的健康安全 实验设备 安全卫生以及防止对外界环境造成污染 二 适用范围 适用于所有进入微生物实验室人员 实验室工作人员必需 严格遵守安全操作规程 三 安全操作规程 1 员工安全操作规程 1 1 实验室入口处须贴上生物危险标志 注明危险因子 生物安全级别 负责人姓名和电话 进入实验室的特殊要求及 离开实验室的程序 1 2 禁止非工作人员进入实验室 参观实验室等特殊情况 须经实验室负责人批准后方可进入 做好卫生防护 并在有关 人员陪同下方可进入 同时注意做好环境维护及保密工作 1 3 进行感染性实验时 禁止他人进入实验室 或必须经 实验室负责人同意后方可进入 免疫耐受或正在使用免疫抑制 剂的工作人员必须经实验室负责人同意方可在实验室工作 1 4 接触微生物或含有微生物的物品后 脱掉手套后和离 开实验室前要洗手 1 5 禁止在工作区饮食 吸烟 处理隐形眼镜 化妆及储 存食物 1 6 尽量以移液器吸取液体 禁止口吸 1 7 实验过程中 严格按有关操作规程操作 降低溅出和 气溶胶的产生 1 8 每天至少消毒一次工作台面 活性物质溅出后要随时 用 75 乙醇或巴氏消毒液消毒 1 9 实验人员在配制培养基过程中 需尽量避免接触性或 吸入性危害 特别是配制 ttb 和碘液等对人体有害的培养基或 试剂时 要穿戴工作服 口罩和手套 并在通风橱中进行 1 10 工作人员应接受必要的免疫接种和检测 如乙型肝炎疫 苗 卡介苗等 工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训 掌握预防暴露以及暴露后的处理程序 每年要接受一次最新的 培训 人员暴露于感染性物质时 及时向实验室负责人汇报 并记录事故经过和处理方案 1 11 禁止将无关动物带入实验室 2 无菌室安全操作规程 2 1 无菌培养室每天都要用 0 2 的新洁尔灭拖洗地面一次 拖布专用 紫外线照射消毒 30min 以上 超净工作台台面每次 实验前要用 75 酒精擦洗 然后紫外线消毒 30min 操作用具 如移液器 废液缸 污物盒 试管架等用 75 酒精擦洗后置于 台内同时紫外线消毒 2 2 无菌室应保持清洁 严禁堆放杂物 以防污染 2 3 无菌室应备有工作浓度的消毒液 如 5 的甲酚溶液 75 的酒精 0 1 的新洁尔灭溶液 等等 2 4 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁 以保证无菌室 的洁净度符合要求 2 5 需要带入无菌室使用的器械 平皿等一切物品 均应包 扎严密 并应经过适宜的方法灭菌 2 6 工作人员进入无菌室前 必须用肥皂或消毒液洗手消毒 然后在缓冲间更换专用工作服 鞋 帽子 口罩和手套 或用 75 乙醇等消毒剂再次擦拭双手 方可进入无菌室进行操作 2 7 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌 30 分 钟 灭菌后通无菌风至少 30min 以上人员才能进入 操作完毕 应及时清理无菌室 再用紫外灯辐照灭菌 30 分钟 2 8 供试品在检查前 应保持外包装完整 不得开启 以防 污染 检查前 用 75 的酒精棉球消毒外表面 2 9 每次操作过程中 均应做阴性对照 以检查无菌操作的 可靠性 2 10 吸取菌液时 必须用移液器吸取 切勿直接用口接触 吸管 2 11 接种针每次使用前后 必须通过火焰灼烧灭菌 待冷 却后 方可接种培养物 2 12 带有菌液的吸管 试管 培养皿等器皿应浸泡在盛有 5 来苏尔溶液或巴氏消毒液的消毒桶内消毒 24 小时后取出冲 洗 2 13 如有菌液洒在桌上或地上 应立即用 5 石碳酸溶液或 3 的来苏尔倾覆在被污染处至少 30 分钟 再做处理 工作衣 帽等受到菌液污染时 应立即脱去 高压蒸汽灭菌后洗涤 2 14 凡带有活菌的物品 必须经消毒后 才能在水龙头下 冲洗 严禁污染下水道 2 15 无菌室应每月检查菌落数 在层流无菌风开启的状态 下 取内径 90mm 的无菌营养琼脂平板 5 个 分别放置无菌室 四周及中央位置 开盖暴露 30 分钟后 倒置于 36 培养箱培养 48 小时 取出检查 100 级洁净区平板杂菌数平均不得超过 1 个菌落 平皿 10000 级洁净室平均不得超过 3 个菌落 平皿 如 超过限度 应用臭氧发生器等对无菌室进行彻底消毒 直至重 复检查合乎要求为止 3 压力蒸汽灭菌器的安全使用操作程序 3 1 堆放 将需灭菌的物品予以妥善包扎 各包之间留有空 隙 依次堆放在灭菌桶的筛板上 以蒸汽穿透 提高灭菌效果 需灭菌物品外需黏上高压指示胶带以检验灭菌温度是否达到要 求 3 2 加水 在锅体内注入生活用水 水位一定要超过电热 管 2 厘米以上 不宜过多 连续使用时 每次操作前 必须 补足上述水位 以免烧坏电热管和意外发生 3 3 密封 在每次使用高压锅前 都必须认真检查高压锅 的出气伐和安全阀 确保其状态完好 如有故障 在故障排除 之前不得使用高压灭菌锅 把堆放好物品的灭菌桶放在锅体内 盖上锅盖并锁紧 3 4 加热灭菌 将灭菌器接通与铭牌一致的电源 按下电 源开关 接通电源 指示灯亮 表示电源已正常输入本器 按 下开始按纽电热管开始加热工作 非全自动的高压灭菌锅要注 意排空空气 确保灭菌时高压锅内是饱和水蒸气 高压灭菌锅 内灭菌期间工作人员需监视高压锅指示面板上的压力 温度和 时间等 3 5 开盖 灭菌结束后 切勿立即将灭菌锅内的蒸汽排出 否则 由于液体物品的温度未能下降 而压力蒸汽突然释放 会使液体剧烈沸腾 造成溢出或容器爆裂 应待压力表指针归 零位后 方可开启锅盖 3 6 灭菌后无菌工器具及培养基应存放于无菌区域 如灭 过菌后的无菌室或生物安全柜内 无菌物品需有明确标识 3 7 每年至少 2 次用嗜热脂肪芽孢杆菌作为生物指示剂检 查灭菌效果并记录 指示物需放在不一达到灭菌的部位 如堆 放物品的居中位置 4 生物安全柜操作规程 4 1 确认玻璃窗处于关闭位置后 打开紫外灯 对安全柜内 工作空间进行灭菌 灭菌结束后 关闭紫外灯 安全柜使用前 后均需灭菌 4 2 抬起玻璃门至正常工作位置 打开外排风机 打开荧光 灯及内置风机 检查回风格栅 使之不要被物品堵塞 在无任 何阻碍状态下 让安全柜至少工作 10 分钟 4 3 用消毒液彻底清洗手及手臂 穿上工作褂 戴橡胶手套 并套在袖口上 如有必要的话 戴防护眼镜和防护面罩 4 4 按实验程序放入实验材料 要将工作区域内的污染物质 与洁净物质分开放置 尽量将所需要的物品在正式操作前全部放入安全柜 但不 要过载 不要挡住前后风口 4 5 尽量避免使用可干扰安全柜内气流流动的装置和程序 在操作期间 避免随便移动材料 避免操作者的手臂在前方开 口处频繁移动 尽量减少气流干扰 尽量不要使用明火 接种环之类用红外灭菌器灭菌 4 6 在操作过程中 如果有物质溢出或液体溅出 在将物品 移出安全柜前 要对其表面进行消毒 为防止安全柜内有任何 残留的污染物 在安全柜工作过程中 就要将安全柜内表面全 部消毒 所有接触了污染材料的物体 在从安全柜中取出前 要进行表面消毒 所有开口容器 从安全柜中拿出前要盖好 4 7 全部工作结束后 用 70 的乙醇或适当的中性消毒剂 擦拭安全柜内表面 让安全柜在无任何阻碍的情况下继续至少 工作 5 分钟 以清除工作区域内浮沉污染 4 8 关闭照明灯和安全柜风机 关闭玻璃门 打开 uv 灯消 毒 灭菌结束后 关闭 uv 灯 4 9 定期抬起工作区域下面板 擦拭或冲洗工作面底下空间 5 标准菌株安全操作规程 5 1 标准菌株由专人保管 保管人负责建立标准菌株目录 目录至少应包编号 菌株号 菌种名称 来源 购买日期 购 买数量 保存方法等 5 2 标准菌株应做好标识后 保存于专用冰箱中 5 3 标准菌株不能随意转借其它单位或个人 需要时 须经 实验室负责人批准后方可提供 5 4 必须在生物安全柜中进行标准菌株实验 操作过程中 不要穿戴巳经污染的防护性手套触摸门柄 仪器或污染区以外 区域 避免扩大污染范围 5 5 试验结束后 操作过程中所有可能与生物危险物接触或 被污染的试验器械和物品 能够高压消毒的必须高压消毒 不 能进行高压消毒的物品 应使用有效的消毒剂消毒处理 5 6 标准菌株传代原则上不超过 5 代 6 微生物培养物废弃物安全处理程序 6 1 尽可能使用塑料器材代替玻璃器材 防止利器损伤 非 一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒 最好 进行高压消毒 6 2 禁止用手处理破碎的玻璃器具 装有污染针 利器及 破碎玻璃的容器在丢弃之前必须应用次氯酸消毒液或其他有效 药品进行消毒 6 3 所有培养物 废弃物在运出实验室之前须经巴氏消毒 液消毒处理或高压灭菌后 置于专门污物袋内 交由专业卫生处 理公司处置 6 4 实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒 7 微生物实验室紧急事故处理办法 7 1 刺伤 切割伤或擦伤 受伤人员应脱下防护服 清洗双 手和受伤部位 使用适当的皮肤消毒剂进行消毒 必要时进行 医学处理 同时记录受伤原因和相关的微生物 并保留完整适 当的医疗记录 7 2 潜在感染性物质的食入 应脱下受害人的防护服 进行 必要的医学处理 报告食入材料的鉴定和事故发生的细节 并 保留完整适当的医疗记录 7 3 潜在危害性气溶胶的释放 在生物安全柜以外 所有 人员必须立即撤离相关区域 暴露人员应接受医学咨询 同时 立即通知实验室负责人和生物安全负责人 为了使气溶胶排出 和使较大的粒子沉降 在一定时间内严禁人员入内 若实验室 没有中央通风系统 应推迟进入实验室的时间 同时张贴 禁止 进入 的标志 待气溶胶排出 较大的粒子沉降后 在生物安全 负责人的指导下 清理人员穿戴适当的防护服和呼吸保护装备 进行污染的清除 7 4 容器破碎及感染性物质的溢出 应立即用布或纸巾覆盖 被感染性物质污染或受感染性物质溢洒的破碎物品 并倒上消 毒剂 作用适当时间后 将覆盖物以及破碎物品清除 再用消 毒剂擦拭污染区域 玻璃碎片应用镊子清理 已污染的布 纸 巾和抹布等应放在盛放污染性废弃物的容器内 如果用簸箕清 理破碎物 应对其进行高压灭菌或放在有效的消毒液内浸泡消 毒 所有操作过程中要求戴手套 若实验表格或其他打印或手写材料被污染 应将这些信息 复制后 再将原件置于盛放污染性废弃物的容器内 按废弃物 处理的方式进行处理 7 5 未装可封闭离心桶的离心机内盛有潜在感染性物质的离 心管发生破裂 如果机器正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂 应关闭机器电源 让机器密闭适当时间 如 30min 使气溶 胶沉积 如果机器停止后发现破裂 不开盖或立即将盖子盖上 并密闭 如 30min 同时应通知生物安全负责人 玻璃碎片 应使用镊子 或用镊子夹着棉花进行清理 所有破碎的离心管 玻璃碎片 离心桶 十字轴和转子都应放入无腐蚀性的 已知 对相关微生物具有杀灭活性的消毒剂内进行消毒 未破损的带 盖离心管应放在另一个有消毒剂的容器中 消毒后回收 离心 机内腔应用适当浓度的同种消毒剂多次擦拭 再用水冲洗后干 燥 清理时 应戴结实的手套 如厚橡胶手套 必要时在外 面再戴适当的一次性手套 所使用的全部材料都应按感染性废 弃物处理 7 6 在可封闭的离心桶 安全杯 内离心管发生破裂 所有 的密封离心桶都应在生物安全柜内装卸 若怀疑在安全杯内发 生破损 应松开安全杯盖子并将离心桶高压灭菌 也可采用化 学消毒的方法进行处理 7 7 生物安全柜内生物危害溢出 等待至少 5min 让安全 柜充满气溶胶 清理时应穿戴实验服 安全眼镜和手套 且让 安全柜继续工作 使用浸泡消毒剂的消毒纸巾吸附溢出物 进 行消毒处理应保证一定的接触时间 至少 20min 并用同样 的消毒纸巾擦拭安全柜内壁 工作台表面和柜内所有设备 按 照正确的生物废弃物处理步骤处理被污染的物质 将可回收的 被污染物品放入生物危害物回收袋或高压灭菌盘并且用报纸包 起来 然后进行消毒或清理 用消毒剂对无法进行高压灭菌的 物品进行至少 20 min 的消毒处理后再拿出安全