蛹虫草菌丝体中多糖提取方法的研究-答辩稿

蛹虫草菌丝体中多糖提取方法的研究,目 录,研究意义研究方法结果与讨论实验结论致谢,一、研究意义,图1-1 蛹虫草菌丝体,人工培育的蛹虫草与野生冬虫夏草经严格的测试，他们在功能与功效上并无区别，但其生产成本却大大降低。 蛹虫草菌丝体是冬虫夏草的有效替代品，根据科学家们分析检验，它具有与冬虫夏草相同的功效。蛹虫草菌丝体多糖作为蛹虫草的主要有效成分具有抗氧化、抗衰老、调节免疫系统、抗炎、抗肿瘤以及降血糖作用。 蛹虫草菌丝体多糖的应用主要是保健食品和医药制剂。,图1-2 蛹虫草菌丝体多糖,菌丝体多糖检测方法,菌丝体多糖提取方法,二、研究方法,热水浸提法,超声波提取法,微波提取法,超滤膜分离法,分级沉淀法,蒽酮法,离子色谱法,高效液相色谱法,气相色谱法,苯酚-硫酸法,原料称重加入提取液提取多糖抽滤加入乙醇醇沉24h抽滤粗多糖定容490nm下测定吸光度值,图2-1 蛹虫草菌丝体多糖提取工艺流程图,（1）工艺流程,图2-2 葡萄糖标准曲线,（2）葡萄糖标准曲线的绘制,标准曲线的回归方程为Y=0.008X+0.0324，R2=0.9958。说明葡萄糖在0900g/ml有良好的线性关系。此方法简单、快速、灵敏 。,（3）蛹虫草菌丝体多糖的检测-苯酚硫酸法,按照上表准确加入待测液后沸水浴15min，再冷水浴30min，以空白调零点后于490nm下测定吸光度值。,表 1 待测液的处理,（4）多糖提取率计算公式,多糖含量（ug/g）=,多糖提取率（%）=,100,准确称取蛹虫草菌丝体50.0g于四个培养皿中，编号。平铺以利于烘干，放入电热恒温鼓风干燥箱中数天，直至烘干（45），再测其干重，结果如下表：由烘干后的质量知，湿重为干重的10倍。,（5）蛹虫草菌丝体的预处理,表2 蛹虫草菌丝体干湿重比较,（6）蛹虫草菌丝体多糖提取方法的比较,表3 提取方法的比较,图2-4 蛹虫草菌丝体的多糖浓度,液料比对蛹虫草菌丝体多糖提取率的影响 按照上述提取工艺，分别按液料比41、71、101、131、151热水浸提蛹虫草菌丝体多糖，并于490nm下测定吸光度值以确定最佳液料比。提取时间对蛹虫草菌丝体多糖提取率的影响 按照上述提取工艺，分别热水浸提蛹虫草菌丝体多糖1h，2h、3h、4h、5h ，并于490nm下测定吸光度值以确定最佳提取时间。乙醇浓度对蛹虫草菌丝体多糖提取率的影响 按照上述提取工艺，热水浸提后抽滤，下清液中分别加入浓度为70%，80， 90，100%的乙醇，醇沉得多糖，并于490nm下测定吸光度值以确定最佳乙醇浓度。,（7）热水浸提法提取蛹虫草菌丝体多糖的单因素分析,提取温度对蛹虫草菌丝体多糖提取率的影响 按照上述提取工艺，并分别于温度60，70，80，90，100热水中浸提蛹虫草菌丝体多糖 ，并于490nm下测定吸光度值以确定最佳提取温度。提取次数对蛹虫草菌丝体多糖提取率的影响 按照上述提取工艺，分别热水浸提蛹虫草菌丝体多糖1次，2次，3次，4次，5次，并于490nm下测定吸光度值以确定最佳提取温度。,在单因素实验的基础上，选取四个主要影响因素：乙醇浓度、液料比、提取时间、提取温度，进行L9(34)正交实验，因素水平见表1，以菌丝体多糖提取率为指标，确定最佳提取工艺。,（8）正交试验法优化热水浸提法提取蛹虫草菌丝体多糖,通过表1对提取率的比较，得出热水浸提法的效率最高，所以本实验对热水浸提法进行优化。,表4 三种提取方法对菌丝体多糖提取率的影响,三、结果与讨论,图3-1 蛹虫草菌丝体多糖提取方法的比较,（1）液料比对多糖提取 率的影响由图可知，当液料比为10:1时，多糖的提取率达到最高，此时多糖的已趋于饱和，再大的提取液不能提高蛹虫草菌丝体多糖的提取率。,热水浸提法提取蛹虫草菌丝体多糖的单因素分析,（2）提取时间对多糖提取率的影响由图可知，提取时间对多糖提取率的影响较为明显，随着提取时间的增加，多糖的提取率也增加，3h为最佳提取时间。,（3）乙醇浓度对多糖提取率 的影响实验结果表明，随着乙醇浓度的提高，菌丝体多糖的提取率变化不大，可能是低浓度的乙醇已使多糖大量析出。有图可知，确定90%的乙醇对多糖提取效果最佳。,（4）提取温度对多糖提取率的影响实验结果表明，提取温度对多糖提取率的影响最为明显，当提取温度为80 时，菌丝体多糖的提取率最大。过低或过高的温度都会降低多糖的提取率。,（5）提取次数对多糖提取率的影响由图可知，提取3次为最佳提取次数少于3次多糖不能够完全提取出来，若多于3次只会造成更多的浪费。,正交试验法优化热水浸提法提取蛹虫草菌丝体多糖,蛹虫草菌丝体多糖提取条件的主次因素顺序为： 提取温度 提取次数提取时间液料比,四、实验结论,超声波提取法提取时间短，温度低可保护有效成分，杂质 少，操作简单易行，但提取效率略低于热水浸提法。,微波助提取法提取时间短，杂质少，操作简单易行，无污染，但提取率略低于热水浸提法和超声波法。,热水浸提法操作简易,条件易控制,结果精准,提取率最高，适合蛹虫草菌丝体中多糖的提取、分离纯化。在单因素试验的基础上，经正交试验确定了提取菌丝体多糖的最佳工艺条件：提取温度80，提取次数为3次，提取时间为3h，液料比为10:1。所得菌丝体多糖的提取率为1.06%。,致 谢,首先衷心的感谢我的指导老师王志兵老师，王老师平日里工作繁多，但在我毕业设计的每个阶段都给予细心